國(guó)家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑技術(shù)審評(píng)要點(diǎn)（試行）的通告（2022年第31號(hào)）

發(fā)布時(shí)間：2022-07-15

為規(guī)范猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑技術(shù)審評(píng)工作，國(guó)家藥監(jiān)局器審中心組織編寫(xiě)了《猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑技術(shù)審評(píng)要點(diǎn)（試行）》，現(xiàn)予發(fā)布。

特此通告。

附件：猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑技術(shù)審評(píng)要點(diǎn)（試行）.doc

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局
醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心
2022年7月15日

附件

猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑技術(shù)審評(píng)要點(diǎn)（試行）

本審評(píng)要點(diǎn)旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本審評(píng)要點(diǎn)是對(duì)猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

一、適用范圍

本審評(píng)要點(diǎn)適用于猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申請(qǐng)和變更注冊(cè)申請(qǐng)的情形，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)）及相關(guān)法規(guī)的要求，如猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內(nèi)容。應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測(cè)流程。提供不同適用機(jī)型的檢測(cè)通量，即一次檢測(cè)最多可檢測(cè)的樣本數(shù)。提供核酸提?。ㄊ止ず妥詣?dòng)提取方式應(yīng)分別明確）和PCR擴(kuò)增的時(shí)間，以及檢測(cè)全過(guò)程所需的時(shí)間。不同檢測(cè)流程，分別提供最少和最多檢測(cè)樣本量下的檢測(cè)時(shí)間。與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較，比較內(nèi)容包括樣本類型，檢測(cè)原理，檢測(cè)靶基因區(qū)域，組成成分，內(nèi)標(biāo)，質(zhì)控品，判讀規(guī)則，分析性能和臨床性能等。

（三）產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（2022年第8號(hào)）的要求編寫(xiě)。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑如有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑的檢出限水平應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)指南文件規(guī)定申報(bào)產(chǎn)品對(duì)國(guó)家靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)與聲稱的檢出限水平相當(dāng)。

如有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

（四）分析性能研究

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。

如申報(bào)產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交采用不同機(jī)型進(jìn)行性能評(píng)估的資料。如申報(bào)產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。

分析性能評(píng)估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來(lái)源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過(guò)程及數(shù)據(jù)等。如果樣本的陰陽(yáng)性或濃度值由其他單位提供，需要由該單位出具蓋章的樣本信息文件。

分析性能評(píng)估中如使用稀釋樣本，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。

分析性能評(píng)估用樣本應(yīng)當(dāng)為真實(shí)樣本，可采用境內(nèi)或境外樣本進(jìn)行研究。對(duì)于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

1.反應(yīng)體系

1.1樣本采集和處理

根據(jù)適用樣本類型，進(jìn)行樣本采集研究。提供樣本采集器具和保存液等的詳細(xì)研究資料，明確保存液或裂解液等的成分、濃度、使用量的要求等。配套的不同保存液或裂解液需驗(yàn)證檢出限和重復(fù)性。

提供樣本滅活、處理方式、處理過(guò)程的研究。

1.2核酸提取和反應(yīng)體系

研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取方法與過(guò)程、提取用樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。建議在保證核酸提取質(zhì)量的情況下盡量擴(kuò)大總反應(yīng)體系和加樣量，以提高檢測(cè)靈敏度。

提交不同適用機(jī)型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

2.樣本穩(wěn)定性

對(duì)采集后各階段的樣本進(jìn)行穩(wěn)定性研究，包括不同保存液、裂解液，不同滅活方式處理后的樣本，研究?jī)?nèi)容包括冷藏保存時(shí)間，冷凍保存時(shí)間，凍融次數(shù)等。

建議對(duì)每種樣本類型均進(jìn)行穩(wěn)定性研究。

如核酸提取液可不立即進(jìn)行檢測(cè)，還需對(duì)核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

3.適用的樣本類型

列明產(chǎn)品適用的樣本類型，如皮膚病變標(biāo)本（包括病變皮疹、痘皰表面和/或滲出物的拭子，痘皰液，痘皰表皮或痘痂等）、咽拭子、全血或血清樣本，應(yīng)分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。

4.核酸提取/純化性能

在進(jìn)行核酸檢測(cè)之前，建議有核酸提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的DNA外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。對(duì)配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對(duì)。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測(cè)試劑進(jìn)行抗干擾、精密度和檢出限的驗(yàn)證。

5.精密度

應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮運(yùn)行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸提取步驟。設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如為期至少20天的檢測(cè)。對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獲得重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度、批間精密度等結(jié)果。

應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、臨界陽(yáng)性樣本、中/強(qiáng)陽(yáng)性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?，例如?/p>

陰性樣本：待測(cè)物濃度為零濃度，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

臨界陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽(yáng)性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

中/強(qiáng)陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度呈中度到強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

6.分析特異性

6.1交叉反應(yīng)

首先應(yīng)采用生物信息學(xué)分析方法進(jìn)行研究，應(yīng)當(dāng)包括人基因組和所有已知病原體。

樣本驗(yàn)證：交叉反應(yīng)研究樣品除特殊說(shuō)明外，應(yīng)采用滅活的臨床樣本或添加了滅活病原體培養(yǎng)物的陰性臨床樣本，樣本基質(zhì)應(yīng)與預(yù)期檢測(cè)樣本類型一致，交叉反應(yīng)研究用樣本主要考慮以下幾方面：

6.1.1其他近緣病毒：天花病毒（假病毒）、痘苗病毒、牛痘病毒、鼠痘病毒、傳染性軟疣病毒、特納河痘病毒（假病毒）、亞巴猴病毒（假病毒）等。

6.1.2引起出疹癥狀等的其他病毒：水痘-帶狀皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒-1/-2、人類皰疹病毒 6、人類皰疹病毒 7、人類皰疹病毒8、麻疹病毒、腸道病毒、梅毒螺旋體、登革病毒等。

6.1.3適用樣本中可能存在的其他細(xì)菌/真菌：金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、丙酸桿菌、類白喉?xiàng)U菌等。

6.1.4高濃度人類基因組DNA。

注：病毒培養(yǎng)液的濃度單位可采用TCID₅₀或PFU/mL，細(xì)菌培養(yǎng)物濃度單位可采用CFU/mL。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常，細(xì)菌感染的水平為10⁶CFU/mL或更高，病毒為10⁵PFU/mL或更高。也可采用其他合理方法定值的濃度，例如核酸濃度10⁷copies/mL，如病原體樣本或培養(yǎng)物不能符合上述要求，申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明理由。

申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來(lái)源、種屬/型別信息和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

6.2干擾研究

6.2.1干擾試驗(yàn)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對(duì)可能存在的內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證推薦物質(zhì)見(jiàn)表1。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行試驗(yàn)，檢測(cè)包含臨界陽(yáng)性水平在內(nèi)的猴痘病毒樣本。對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)比添加干擾物質(zhì)前后的 Ct 值差異。檢測(cè)的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)及在樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)。

表1 用于干擾試驗(yàn)的物質(zhì)

6.2.2競(jìng)爭(zhēng)性干擾

申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品適用的樣本類型，充分考慮臨床上容易與猴痘病毒合并感染的病原體，在高濃度的情況下對(duì)低濃度（例如檢出限濃度）猴痘病毒核酸檢測(cè)的影響，進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性干擾研究。

7.檢出限

7.1檢出限的確定

將不同來(lái)源的至少3個(gè)樣本梯度稀釋于與適用樣本一致的基質(zhì)中，進(jìn)行檢出限的確定。每個(gè)濃度梯度最少重復(fù)3次檢測(cè)，以100%可檢出的最低濃度水平作為估計(jì)檢出限，在此濃度附近制備若干梯度濃度樣本，每個(gè)濃度至少重復(fù)20次檢測(cè)，將具有95%陽(yáng)性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。

7.2檢出限的驗(yàn)證

選擇另外3個(gè)不同來(lái)源的樣本在檢出限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%陽(yáng)性檢出率。

如包括多個(gè)檢測(cè)靶標(biāo)，應(yīng)分別進(jìn)行研究。

8.包容性

8.1應(yīng)當(dāng)采用生物信息學(xué)分析方法對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)的包容性進(jìn)行研究，應(yīng)當(dāng)包括所有已公布的猴痘病毒核酸序列。

8.2驗(yàn)證具有時(shí)間和區(qū)域特征性的至少10個(gè)不同來(lái)源的陽(yáng)性樣本，包含西非分支、剛果盆地分支和不同的變異株。研究應(yīng)包括檢出限和重復(fù)性的驗(yàn)證。注意包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復(fù)。

9.企業(yè)參考品驗(yàn)證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

（五）穩(wěn)定性研究

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

（六）陽(yáng)性判斷值研究

陽(yáng)性判斷值一般為申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)病毒核酸陽(yáng)性的Ct值。陽(yáng)性判斷值研究用樣本來(lái)源應(yīng)具有多樣性和代表性，考慮不同時(shí)間、地域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素，盡量納入較多弱陽(yáng)性和高陰性水平的樣本。在條件允許的情況下，建議覆蓋目前的流行株進(jìn)行陽(yáng)性判斷值研究。采用ROC曲線分析建立陽(yáng)性判斷值，并確定產(chǎn)品的判讀規(guī)則。如判定值存在灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對(duì)各樣本類型進(jìn)行陽(yáng)性判斷值的驗(yàn)證。

提交陽(yáng)性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來(lái)源機(jī)構(gòu)、檢測(cè)結(jié)果等信息。

提供內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。

（七）其他非臨床研究資料

1.主要原材料研究

該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過(guò)程；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。

1.1引物和探針：應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點(diǎn)及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議每種病毒設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，通過(guò)序列比對(duì)和功能性試驗(yàn)等方式，對(duì)病毒進(jìn)行包容性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評(píng)價(jià)，其中序列比對(duì)包括與已公布猴痘病毒序列的比對(duì)，及與易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的序列比對(duì)；功能性試驗(yàn)包括對(duì)不同來(lái)源、不同滴度的猴痘病毒核酸陽(yáng)性樣本，和不同的近緣病原體的檢測(cè)。通過(guò)篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度及功能性實(shí)驗(yàn)等。

1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，應(yīng)提供對(duì)其純度、濃度、功能性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。

1.3酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應(yīng)分別對(duì)酶活性、功能性等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。

1.4質(zhì)控品

試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品。陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)包含試劑盒檢測(cè)的靶序列，可采用假病毒制備，建議制備濃度為弱陽(yáng)性。質(zhì)控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測(cè)的全過(guò)程，以對(duì)整個(gè)提取和PCR擴(kuò)增過(guò)程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。提交試劑盒質(zhì)控品有關(guān)原料選擇、制備、定值過(guò)程、濃度范圍等試驗(yàn)資料，對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍做出明確的要求。

1.5內(nèi)標(biāo)

內(nèi)標(biāo)，又稱內(nèi)對(duì)照，可對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)與靶核酸一同提取及擴(kuò)增。申請(qǐng)人需對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針設(shè)計(jì)和相關(guān)反應(yīng)體系的濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。明確內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍。建議科學(xué)設(shè)置內(nèi)標(biāo)，對(duì)待測(cè)樣本的取樣質(zhì)量、試劑的反應(yīng)體系進(jìn)行監(jiān)控。

1.6企業(yè)參考品制備

申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)定企業(yè)內(nèi)部參考品，包括陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢出限參考品、精密度參考品。應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來(lái)源、選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。

陽(yáng)性參考品應(yīng)包含不同濃度水平的目標(biāo)核酸陽(yáng)性樣本至少5例。

陰性參考品則主要涉及對(duì)分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況，建議包括水痘-帶狀皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒、人類皰疹病毒、天花病毒（假病毒）、痘苗病毒、牛痘病毒、化膿性鏈球菌、白色念珠菌等。

檢出限參考品應(yīng)包含95%陽(yáng)性檢出水平或略高于檢出限的水平，如100%陽(yáng)性檢出水平。

精密度參考品應(yīng)包括高、低兩個(gè)濃度的樣本，其中一個(gè)濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。

2.生產(chǎn)工藝研究資料

介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（八）臨床評(píng)價(jià)

1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)

建議申請(qǐng)人在相關(guān)流行病學(xué)多發(fā)區(qū)域選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，應(yīng)是經(jīng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)（包括各級(jí)疾病預(yù)防控制中心）。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量應(yīng)不少于3家，且具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)體外診斷試劑和對(duì)比方法均應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

2.臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1 與對(duì)比方法/試劑的比較研究

2.1.1申請(qǐng)人可采用核酸序列測(cè)定方法作為參比方法，驗(yàn)證試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)結(jié)果與核酸序列測(cè)定（測(cè)序）結(jié)果之間的一致性。臨床研究中應(yīng)對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹，并對(duì)委托測(cè)序服務(wù)的機(jī)構(gòu)（如涉及）資質(zhì)和選擇依據(jù)作簡(jiǎn)要說(shuō)明或提供相關(guān)資料。

同時(shí)申請(qǐng)人應(yīng)進(jìn)行部分與病毒分離培養(yǎng)鑒定進(jìn)行比對(duì)的臨床試驗(yàn)。

2.1.2 如有已上市同類產(chǎn)品，臨床試驗(yàn)可選擇已上市的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，對(duì)比試劑的選擇應(yīng)考慮樣本類型、產(chǎn)品性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑具有良好的可比性。

2.2 與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究

除上述比對(duì)試驗(yàn)外，還應(yīng)考慮試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)即按照國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件進(jìn)行病例診斷的方法。

3.臨床試驗(yàn)入組人群

臨床試驗(yàn)的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，該產(chǎn)品的適用人群為猴痘的疑似病例，申請(qǐng)人在進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)依據(jù)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《猴痘診療指南》中對(duì)“疑似病例”的定義，按照該定義入組病例進(jìn)行臨床研究。同時(shí)還應(yīng)入組部分需要進(jìn)行鑒別診斷的其它發(fā)熱出疹性疾病，如水痘、帶狀皰疹、單純皰疹、麻疹、登革熱等進(jìn)行特異性的評(píng)價(jià)。如試驗(yàn)體外診斷試劑包括血液樣本類型，應(yīng)注意針對(duì)該樣本類型，入組人群應(yīng)為急性期發(fā)病7日內(nèi)的病例。

4.臨床試驗(yàn)樣本類型

臨床樣本的采集建議按照《猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》進(jìn)行。臨床試驗(yàn)過(guò)程中，如臨床試驗(yàn)過(guò)程中樣本確實(shí)難以獲得，經(jīng)提取后的核酸提取液亦可作為樣本進(jìn)行臨床試驗(yàn)。如采用核酸提取液進(jìn)行臨床試驗(yàn)，建議臨床試驗(yàn)中明確該核酸提取液對(duì)應(yīng)的樣本類型及樣本保存液/采樣液（如適用），同時(shí)明確核酸提取試劑盒，臨床前應(yīng)對(duì)臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型、樣本保存液及核酸提取試劑進(jìn)行充分的性能評(píng)估，臨床試驗(yàn)中所用樣本保存液及核酸提取試劑應(yīng)嚴(yán)格滿足考核試劑及對(duì)比試劑要求。

如申報(bào)產(chǎn)品適用于不同的樣本類型，如皮膚病變標(biāo)本（包括皮疹/痘皰滲出物的拭子；痘皰液；痘痂等）、咽拭子、全血或血清樣本，應(yīng)在臨床試驗(yàn)中分別進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。針對(duì)全血和血清兩種樣本類型，申請(qǐng)人可通過(guò)同源比對(duì)的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)。樣本類型的選擇，應(yīng)參考國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。

5.臨床試驗(yàn)樣本量

與對(duì)比方法/試劑比較研究的臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。臨床試驗(yàn)可依據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑相對(duì)于對(duì)比方法的陰陽(yáng)性符合率分別估算最低陰陽(yáng)性樣本例數(shù)。

臨床樣本量的估算建議采用如下樣本量公式計(jì)算，

公式中，n為樣本量；Z1-α、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P₀為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，P_T為試驗(yàn)體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

其中，陰陽(yáng)性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P₀）建議不低于90%。獲得臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)后，證明產(chǎn)品相對(duì)于對(duì)比方法的陰陽(yáng)性符合率（置信區(qū)間下限）不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P₀）。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如精確概率法等。

如申報(bào)試劑包含不同樣本類型，建議針對(duì)皮膚病變標(biāo)本、咽拭子、血液樣本分別按照上述方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)估算。皮膚病變標(biāo)本中，皮疹/痘皰滲出物的拭子、痘皰液、痘痂等均應(yīng)有一定例數(shù)。

病毒分離培養(yǎng)應(yīng)入組一定數(shù)量的陽(yáng)性及陰性病例，考察試驗(yàn)體外診斷試劑與病毒分離培養(yǎng)結(jié)果的一致性，納入的例數(shù)也應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)估算，可采用抽樣精度的公式進(jìn)行樣本量估算。

與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究，建議參考與對(duì)比方法/試劑比較研究部分的樣本量估算方法，設(shè)定合理的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。

6.臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析

此類產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)?zāi)康脑谟隍?yàn)證試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品及臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性，統(tǒng)計(jì)分析一般以四格表的形式對(duì)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)，并據(jù)此計(jì)算試驗(yàn)體外診斷試劑與對(duì)比方法的陽(yáng)性/陰性符合率、臨床靈敏度、臨床特異度及其置信區(qū)間。應(yīng)將試驗(yàn)體外診斷試劑與對(duì)比方法檢測(cè)結(jié)果一致性、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)結(jié)果與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)結(jié)果與病毒分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果的一致性分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以評(píng)價(jià)產(chǎn)品臨床性能。

臨床試驗(yàn)建議對(duì)入組人群的人口學(xué)進(jìn)行分析，包括年齡、性別、臨床診斷背景等。臨床試驗(yàn)中包含不同樣本類型的，應(yīng)在總樣本數(shù)（各樣本類型總和）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上，每個(gè)樣本類型分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

臨床試驗(yàn)中所有不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸等信息進(jìn)行充分的分析。

7. 境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的認(rèn)可

境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)符合《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。提交完整的臨床試驗(yàn)方案、報(bào)告和倫理審查意見(jiàn)，以及該數(shù)據(jù)適用于中國(guó)患者人群的論證資料、境內(nèi)外臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理差異的對(duì)比資料和臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理差異對(duì)于臨床試驗(yàn)結(jié)果影響的論證資料。

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)上述臨床試驗(yàn)技術(shù)審評(píng)要求，論證境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的充分性。

8. 臨床證據(jù)的形式要求

申請(qǐng)人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等法規(guī)文件要求提交各機(jī)構(gòu)倫理審查意見(jiàn)、臨床試驗(yàn)方案、臨床試驗(yàn)小結(jié)、臨床試驗(yàn)報(bào)告以及臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫(kù)。

臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總表作為臨床試驗(yàn)報(bào)告的附件提交。數(shù)據(jù)表中應(yīng)包括檢測(cè)病例的編號(hào)、年齡、性別、樣本類型、臨床診斷結(jié)果、發(fā)病時(shí)間、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)結(jié)果（含各基因的Ct值）、對(duì)比方法的檢測(cè)結(jié)果（各基因的Ct值）等，如臨床試驗(yàn)中所用樣本為核酸提取液，應(yīng)明確該樣本樣本保存液（如涉及）、核酸提取試劑等。臨床應(yīng)用的數(shù)據(jù)集中每一病例編號(hào)應(yīng)能夠溯源。

關(guān)于測(cè)序試驗(yàn)，申請(qǐng)人應(yīng)提供以下關(guān)于測(cè)序部分的詳細(xì)試驗(yàn)資料，需有臨床試驗(yàn)單位的簽章確認(rèn)。

（九）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。新冠病毒核酸檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】

本試劑盒用于體外定性檢測(cè)猴痘疑似病例、其他需要進(jìn)行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的xx樣本中猴痘病毒核酸。

有關(guān)“疑似病例”等人群的定義參照《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件執(zhí)行。

該產(chǎn)品在使用上應(yīng)當(dāng)遵守《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。

開(kāi)展猴痘病毒核酸檢測(cè)，應(yīng)符合《猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》等的要求，做好生物安全工作。

本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。

2.【檢驗(yàn)原理】

簡(jiǎn)述產(chǎn)品的核酸提取和擴(kuò)增原理，檢測(cè)能夠覆蓋的目標(biāo)基因序列特征。明確內(nèi)標(biāo)基因名稱及其作用。如采用了防污染措施，進(jìn)行簡(jiǎn)要描述。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料，例如核酸提取試劑，病毒保存液等的產(chǎn)品名稱，生產(chǎn)廠家，貨號(hào)及注冊(cè)證號(hào)、備案號(hào)等信息。

4.【樣本要求】

需詳細(xì)描述樣本采集和處理方式，包括采樣步驟，適用的拭子材質(zhì)（如適用），保存液及使用體積、適用的抗凝劑類型（如適用），滅活方式等。描述樣本及核酸提取液的保存穩(wěn)定性。

5.【檢驗(yàn)方法】

明確核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰、陽(yáng)性質(zhì)控品與待測(cè)樣本同步進(jìn)行核酸提取操作。明確各適用機(jī)型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置。明確質(zhì)控品和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍，作為實(shí)驗(yàn)有效性的標(biāo)準(zhǔn)。

6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

通過(guò)擴(kuò)增曲線和Ct值進(jìn)行結(jié)果陰陽(yáng)性的判斷，列明結(jié)果陰性、陽(yáng)性、復(fù)測(cè)、無(wú)效等所有情形。

7.【檢驗(yàn)方法的局限性】

7.1本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

7.2有關(guān)假陽(yáng)性結(jié)果的可能性分析

7.2.1 如果樣本在運(yùn)輸、處理過(guò)程中發(fā)生交叉污染，則可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

7.2.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境有PCR產(chǎn)物等氣溶膠污染，則可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

7.2.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的耗材、設(shè)備等受污染，則可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。

7.3有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

7.3.1不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存及處理、樣本中病原體含量過(guò)低均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

7.3.2該病原體待測(cè)靶序列的變異或其他原因?qū)е碌男蛄懈淖兛赡軙?huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

7.3.3 未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

8.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

簡(jiǎn)述以下性能指標(biāo)：

8.1國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（如有）和企業(yè)參考品的符合率。

8.2檢出限：簡(jiǎn)要介紹評(píng)價(jià)方法、所用樣本情況以及評(píng)價(jià)結(jié)果。

8.3對(duì)包容性的研究情況進(jìn)行總結(jié)。包括不同分支樣本和猴痘病毒變異株的檢出限和重復(fù)性性能并描述猴痘病毒變異株生物信息學(xué)分析結(jié)果。

8.4對(duì)精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。

8.5分析特異性

8.5.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無(wú)交叉反應(yīng)的濃度水平。

8.5.2干擾試驗(yàn)：說(shuō)明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無(wú)干擾反應(yīng)的濃度水平。

8.6臨床試驗(yàn)：簡(jiǎn)要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

9.【注意事項(xiàng)】

9.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

9.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室要求。

9.3試劑保存運(yùn)輸及使用過(guò)程中多種因素可能導(dǎo)致性能變化，如保存運(yùn)輸不當(dāng)、樣本采集、樣本處理及檢測(cè)過(guò)程操作不規(guī)范等，請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。因拭子等樣本采集過(guò)程及病毒感染過(guò)程本身的特點(diǎn)，可能存在采集到的樣本量不足等原因帶來(lái)的假陰性結(jié)果，應(yīng)結(jié)合臨床其他診療信息綜合判斷，必要時(shí)復(fù)測(cè)。

9.4生物安全防護(hù)相關(guān)內(nèi)容

9.5避免實(shí)驗(yàn)室污染的措施