附件：金標類檢測試劑注冊技術審查指導原則（食藥監(jiān)辦械函[2013]3號）.doc

金標類檢測試劑注冊技術審查指導原則
（食藥監(jiān)辦械函[2013]3號）

一、前言

本指導原則主要針對金標類檢測試劑的主要原材料、生產工藝及反應體系、產品質量控制等環(huán)節(jié)提出指導性技術要求。

本指導原則系對金標類檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產品特性確定其中的具體內容是否適用，若不適用，需詳細闡述其理由及相應的科學依據(jù)。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學技術的不斷發(fā)展，其相關內容也將進行適時的調整。

二、適用范圍

本指導原則適用于第三類體外診斷試劑中金標類試劑的注冊技術審查，其他類金標試劑可作參考。

三、基本要求

（一）基本原則

1.診斷試劑的研制、生產用的各種原料、輔料應當制定相應的質量指標，并應符合有關法規(guī)的要求。

2.診斷試劑的生產企業(yè)應具備相應的專業(yè)技術人員、儀器設備以及適宜的生產環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產許可證》；同時，生產企業(yè)應按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求建立相應的質量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產企業(yè)還應該通過《體外診斷試劑生產企業(yè)質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。

3.診斷試劑的研制應當按照科學、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。

4.研制生產過程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產和質量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質量控制

1.主要生物原料

與生產的產品質量最密切相關的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標記、包被硝酸纖維膜及用于制備質控線的抗原或抗體等。使用前應按照工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質量標準。主要生物原料若為企業(yè)自己生產，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進行變更申請。

主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：

（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質；特殊生物原料應具備相應外觀標準。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜的聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為5μg；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質量標準，分子量大小應在正確的條帶位置。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。

（4）效價

效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規(guī)定的要求。

（5）功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關性。用于制備質控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進行功能性實驗。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。這些生物原料的質量標準應符合《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》規(guī)定的質量標準要求并檢驗合格，達到相應的質量標準后方可用于生產。

建議對牛血清白蛋白作以下檢驗：

外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其他雜質顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時間在18~26℃時應不大于15分鐘，pH值應為6.5~7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，其標準為大于等于95%。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量，其標準為≥90%。

生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。

3.化學原材料

化學原材料的質量標準參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標包括：外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。

主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更。化學原材料在購入時，原材料的生產商必須提供該批次化學原材料的質量保證材料和質量檢驗報告，其質量標準應達到生產所需的質量標準。

4.其他物料

硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙、玻璃纖維膜等在購入時，其生產商必須提供該批次材料的質量保證材料和質量檢驗報告，其質量標準應達到生產所需的質量標準。

（1）硝酸纖維素膜

硝酸纖維素膜應具有厚度、孔徑大小等要求，毛細遷移速度，韌性（切割時膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細遷移速度偏差范圍）應達到規(guī)定的要求。

（2）玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙

玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應具有厚度、毛細遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應達到規(guī)定的要求。

（3）玻璃纖維膜

適用于全血檢測的金標試劑，過濾紅細胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質的特點，應具有厚度、孔徑大小等要求。

（4）塑料襯片

塑料襯片應具有厚度、硬度（切割時一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標識吻合）、粘性（切割時造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。

（5）其他

粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等，應參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫(yī)療器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定》建立相應質量控制標準。

（三）試劑盒的制備

本類試劑的生產包括膠體金及膠體金標記抗原或抗體的制備，膠體金標記的包被，檢測線及質控線的制備，膠體金標記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過產品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質控過程來保證其質量符合規(guī)定。

1.膠體金標記物的制備

采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應符合規(guī)定，膠體金標記物在510~560nm波長處應有最大吸收值，置2~8℃保存，應在規(guī)定的保存期內使用。采用合適的方法確定膠體金標記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。

2.檢測線及質控線的制備

取已確定使用濃度的相關抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應用同樣方法制備質控線，根據(jù)生產工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質控線應具有間隔距離要求，應對所用的金標用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進行質量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號、數(shù)目、標識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。

3.貼膜、切割、裝袋

貼膜、切割及裝袋應在具有相應濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應有寬度要求。

（四）質量控制

用于半成品及成品質量控制的質控品包括靈敏度、特異性、精密度等指標，如具有國家標準品（參考品）的產品應使用國家標準品（參考品）或經(jīng)國家標準品（參考品）標化的企業(yè)參考品進行檢驗。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產品的質量。

1.半成品質量控制

（1）半成品抽樣

檢驗人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號標記，待檢。

（2）半成品檢驗

對所抽樣的半成品做陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質量標準。

企業(yè)應該對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究，并制定相應的質量標準。穩(wěn)定性試驗可在在特定溫度或特定條件下完成。

2.成品質量控制

每一批金標類檢測試劑的試生產量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。

一般使用國家標準品（參考品）對成品進行檢驗，并達到相應質量要求。若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質量控制程序，以保證產品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產品的質量。

（1）物理檢查

應進行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應符合質量標準。

（2）性能方面的檢測

陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質量標準。

每批試劑批放行前，應完成穩(wěn)定性試驗，并達到相應的質量標準。穩(wěn)定性試驗可在特定溫度或特定條件下完成。

四、名詞解釋

金標類檢測試劑：利用膠體金免疫技術，采用膠體金標記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應用層析法的原理檢測樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。

五、參考文獻：

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學工業(yè)出版社