核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(食藥監(jiān)辦械函[2013]3號(hào))
發(fā)布日期:2023-10-10 閱讀量:次
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核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則
(食藥監(jiān)辦械函[2013]3號(hào))
一、前言
本指導(dǎo)原則主要針對(duì)核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。
本指導(dǎo)原則系對(duì)核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用,若不適用,需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。
本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件,但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的,隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。
二、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的注冊(cè)技術(shù)審查,其他類核酸檢測(cè)試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。
三、基本要求
(一)基本原則
1.核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。
2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境,配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專用實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū),人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動(dòng),以最大限度地防止實(shí)驗(yàn)過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測(cè)的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。
3.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則(試行)》的要求,建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系,并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(試行)》的考核。
4.核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的引物設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測(cè)設(shè)計(jì)的要求,擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo),試劑需設(shè)置抗污染的特定措施,擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。
5.企業(yè)使用新型原材料時(shí),應(yīng)提供與通行原材料比對(duì)研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑,應(yīng)不低于分析純。
(二)原材料
應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來(lái)源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn),其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定;如主要原材料來(lái)自市場(chǎng)(從其他單位購(gòu)買),應(yīng)提供的資料包括:對(duì)物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購(gòu)買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告,以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料(包括生產(chǎn)工藝)或其供應(yīng)商發(fā)生變更,應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。
核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無(wú)脫氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶(RNase)污染。
1.脫氧三磷酸核苷(dNTP)
核酸的組成成分,包括:dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為高效液相色譜(HPLC)純、PCR級(jí),無(wú)DNase和RNase污染?!?0℃保存。
2.引物
由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列,通常采用脫氧核糖核酸(DNA)合成儀人工合成,合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。
凍干粉,序列正確,合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)(PAGE)或HPLC級(jí),不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明,如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。
應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間,可視為合格引物。-20℃保存。
3.探針
是指特定的帶有示蹤物(標(biāo)記物)的已知核酸片段(寡聚核苷酸片段),能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交,用于特定核酸序列的探測(cè)。通常采用DNA合成儀人工合成,合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化,在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記,如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物,在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán),并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。
凍干粉,純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明,如HPLC分析圖譜;應(yīng)對(duì)探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí),并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200—800nm掃描,在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外,根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同,還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長(zhǎng)處有吸收峰,如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰,雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰,檢定合格后入庫(kù)。避光、-20℃保存。
4.DNA聚合酶
如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性,無(wú)核酸內(nèi)切酶活性;具熱穩(wěn)定性,94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。-20℃保存。
5.尿嘧啶糖基化酶(UNG)
具有尿嘧啶糖基化酶活性,無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性,IU UNG在 37℃處理3分鐘后,103拷貝以下含U模板應(yīng)完全降解,不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。-20℃保存。
6.逆轉(zhuǎn)錄酶
具逆轉(zhuǎn)錄酶活性,無(wú)核酸內(nèi)切酶活性?!?0℃保存。
(三)生產(chǎn)工藝
核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括:配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求,原材料應(yīng)混合均勻,配制過程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。
工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容,如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期,提供確切的依據(jù)。
(四)質(zhì)量控制
1.半成品質(zhì)量控制
(1)按批號(hào)抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。
(2)以參考品/對(duì)照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品,應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品,應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品,企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序,以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控,其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。
(3)半成品檢定內(nèi)容包括:陰/陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。
(4)半成品檢定合格后,按試劑盒組成及時(shí)進(jìn)行分裝和包裝。
2.成品質(zhì)量控制
(1)每一批核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測(cè)及注冊(cè)檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。
(2)產(chǎn)品完成包裝后,應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。
(3)以參考品/對(duì)照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。結(jié)果應(yīng)符合要求。
(4)成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括:陰/陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍(定量產(chǎn)品)和穩(wěn)定性。
5.試劑批放行前,應(yīng)對(duì)需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分,在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。
四、名詞解釋
核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑:核酸擴(kuò)增技術(shù)泛指以擴(kuò)增脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)為手段,檢測(cè)特定核酸序列或篩查特定基因的檢測(cè)技術(shù),如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、連接酶鏈反應(yīng)(LCR)、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)(TMA)等。核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的體外診斷試劑,目前已經(jīng)用于病原體檢測(cè)、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。
五、參考文獻(xiàn)
1.《中國(guó)生物制品規(guī)程》(2000年版),化學(xué)工業(yè)出版社
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