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微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)注冊(cè)審查指導(dǎo)原則(2022年第40號(hào))

發(fā)布日期:2022-11-24 閱讀量:

附件:微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)注冊(cè)審查指導(dǎo)原則(2022年第40號(hào)).doc

微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑臨床評(píng)價(jià)
注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑臨床評(píng)價(jià)資料的準(zhǔn)備及撰寫,同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑臨床評(píng)價(jià)的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審查人員的指導(dǎo)性文件,但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善,以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于采用熒光PCR-毛細(xì)管電泳法檢測(cè)結(jié)直腸癌患者腫瘤組織細(xì)胞基因組DNA中的MSI狀態(tài),從而輔助鑒別結(jié)直腸癌中可能的林奇綜合征患者的體外診斷試劑。

對(duì)于采用其他檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行MSI檢測(cè)的產(chǎn)品,申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性考慮本指導(dǎo)原則的適用性,對(duì)不適用部分采用其他適當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)方法,但需闡述不適用的理由,并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。特別是采用NGS方法檢測(cè)MSI時(shí),在檢測(cè)位點(diǎn)、判讀方法等方面均與毛細(xì)管電泳法有顯著差異,應(yīng)從檢驗(yàn)原理的特點(diǎn)出發(fā),設(shè)計(jì)科學(xué)的評(píng)價(jià)方法對(duì)產(chǎn)品臨床性能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如申請(qǐng)其他預(yù)期用途,例如免疫治療藥物的伴隨診斷,申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)該預(yù)期用途提供充分的臨床性能評(píng)價(jià)資料。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)申請(qǐng)和變更注冊(cè)申請(qǐng)的產(chǎn)品,重點(diǎn)針對(duì)臨床評(píng)價(jià)資料的準(zhǔn)備及撰寫明確要求。

有關(guān)此類產(chǎn)品的背景信息以及本指導(dǎo)原則適用范圍確定的依據(jù)參見附件。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

(一)臨床評(píng)價(jià)資料

1.臨床評(píng)價(jià)路徑和基本要求

該類試劑應(yīng)通過臨床試驗(yàn)路徑進(jìn)行臨床評(píng)價(jià),臨床試驗(yàn)的開展應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》以及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求,如相關(guān)法規(guī)、規(guī)章、規(guī)范性文件有更新,臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。

2.臨床試驗(yàn)開展應(yīng)具備的基礎(chǔ)

臨床試驗(yàn)開展應(yīng)建立在充分的臨床前研究基礎(chǔ)之上,包括科學(xué)的產(chǎn)品設(shè)計(jì)、充分的分析性能研究、陽性判斷值研究等。

采用熒光PCR-毛細(xì)管電泳法進(jìn)行MSI DNA檢測(cè),一般對(duì)腫瘤組織與正常對(duì)照樣本分別進(jìn)行相應(yīng)微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測(cè),將兩者檢測(cè)峰圖進(jìn)行比較,確定腫瘤組織中是否發(fā)生了微衛(wèi)星序列長(zhǎng)度的變化(按照一定的陽性判斷值判定),同時(shí)通過設(shè)定適當(dāng)?shù)呐卸?biāo)準(zhǔn)(發(fā)生序列長(zhǎng)度變化的微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)量)確定腫瘤組織的MSI 狀態(tài)(MSI-H、MSI-L/MSS)。MSI檢測(cè)的靈敏度和特異度與位點(diǎn)選擇、反應(yīng)體系的確定、微衛(wèi)星序列長(zhǎng)度變化判定標(biāo)準(zhǔn)以及MSI-H判定標(biāo)準(zhǔn)等產(chǎn)品設(shè)計(jì)因素直接相關(guān),產(chǎn)品設(shè)計(jì)開發(fā)中應(yīng)進(jìn)行充分的驗(yàn)證。同時(shí),為了保證檢測(cè)準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,應(yīng)針對(duì)樣本質(zhì)量提出明確要求,例如組織樣本中腫瘤細(xì)胞比例,核酸提取純度和濃度等。

2.1微衛(wèi)星位點(diǎn)選擇

MSI檢測(cè)試劑在產(chǎn)品設(shè)計(jì)中最關(guān)鍵的問題之一在于微衛(wèi)星位點(diǎn)的選擇。

1997年Bethesda指南中推薦的是一個(gè)簡(jiǎn)稱為“2B3D”的微衛(wèi)星位點(diǎn)組合(NCI panel),由 2個(gè)單核苷酸位點(diǎn)(BAT-25和BAT-26)和3個(gè)雙核苷酸位點(diǎn)(D2S123、D5S346和D17S250)組成。同時(shí),該指南中也推薦了針對(duì)這一組合的判定標(biāo)準(zhǔn):即5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中2個(gè)或2個(gè)以上發(fā)生序列長(zhǎng)度變化時(shí),判定為MSI-H,1個(gè)發(fā)生序列長(zhǎng)度變化時(shí),判定為MSI-L,若5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)均沒有發(fā)生序列長(zhǎng)度變化,則為微衛(wèi)星穩(wěn)定MSS。

2002年,NCI舉辦的第二次HNPCC研討會(huì)上對(duì)MSI的檢測(cè)進(jìn)行了修訂和補(bǔ)充,推薦了由5個(gè)單核苷酸微衛(wèi)星位點(diǎn)構(gòu)成的組合(Pentaplex Panel),經(jīng)過后續(xù)修訂,形成了包括BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、NR-27在內(nèi)的5個(gè)單核苷酸微衛(wèi)星位點(diǎn)組合。

目前臨床上還有BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24和MONO-27五個(gè)單核苷酸位點(diǎn)組合。

綜上,多項(xiàng)研究對(duì)MSI檢測(cè)提出了不同的微衛(wèi)星位點(diǎn)組合,以單核苷酸微衛(wèi)星位點(diǎn)為主,一般包括5個(gè)位點(diǎn),各個(gè)組合之間略有交叉和互補(bǔ)。

在MSI檢測(cè)試劑的設(shè)計(jì)過程中,申請(qǐng)人可依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料,結(jié)合自身的前期研究數(shù)據(jù),綜合考慮備選位點(diǎn)在MSI-H患者中的陽性率、微衛(wèi)星序列長(zhǎng)度變化易讀性等因素,選擇適當(dāng)?shù)奈稽c(diǎn)組合,并設(shè)定合理的判定標(biāo)準(zhǔn),從而對(duì)MSI-H實(shí)現(xiàn)靈敏和特異的檢測(cè)。申請(qǐng)人應(yīng)特別關(guān)注針對(duì)中國人群的研究數(shù)據(jù),位點(diǎn)組合應(yīng)適合中國人群特點(diǎn),滿足中國人群的臨床診斷需要。

最終臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)能夠證明該組合對(duì)于結(jié)直腸癌中LS患者輔助篩選具有較高的臨床靈敏度和良好的臨床特異度。申報(bào)資料中,申請(qǐng)人應(yīng)詳述位點(diǎn)組合的選擇依據(jù),提供相關(guān)文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)。

2.2結(jié)果判讀

每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)毛細(xì)管電泳峰圖的解讀、微衛(wèi)星序列長(zhǎng)度變化的判定標(biāo)準(zhǔn)以及MSI-H和MSI-L/MSS的判定標(biāo)準(zhǔn)是直接影響到產(chǎn)品臨床性能的關(guān)鍵要素,申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)充分的臨床前研究數(shù)據(jù),同時(shí)參考科研論文和文獻(xiàn)進(jìn)行科學(xué)的設(shè)定,并在說明書中詳細(xì)說明。特別是對(duì)于一些可能出現(xiàn)的不易判讀的峰形,可在說明書中結(jié)合具體的圖示和舉例進(jìn)行相應(yīng)的說明。臨床試驗(yàn)過程中嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行操作和判讀。

3.臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施的要求

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇不少于3家(含3家)符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展。臨床試驗(yàn)入組人群應(yīng)為結(jié)直腸癌患者,樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

臨床試驗(yàn)應(yīng)按照說明書要求采集樣本、評(píng)價(jià)樣本質(zhì)量、完成樣本處理、檢測(cè)和結(jié)果解讀。試驗(yàn)中按要求進(jìn)行相應(yīng)的設(shè)盲操作,試驗(yàn)全過程注意避免引入偏倚。臨床試驗(yàn)產(chǎn)生的所有信息應(yīng)進(jìn)行詳實(shí)的記錄。

臨床性能評(píng)價(jià)應(yīng)至少包括以下三方面研究:

3.1腫瘤組織細(xì)胞基因組MSI狀態(tài)(MSI-H、MSI-L/MSS)判定的性能研究

3.1.1如果申報(bào)產(chǎn)品采用的微衛(wèi)星位點(diǎn)組合已經(jīng)得到臨床廣泛認(rèn)可,則可以選擇如下任一種方法進(jìn)行此部分臨床性能研究。

方法一:采用試驗(yàn)體外診斷試劑與MMR蛋白IHC檢測(cè)進(jìn)行比較研究,評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)結(jié)果的一致性。

作為對(duì)比方法的MMR蛋白IHC檢測(cè)應(yīng)采用已獲準(zhǔn)上市、經(jīng)臨床實(shí)踐認(rèn)為性能良好的檢測(cè)試劑盒,并在臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理下完成檢測(cè)。IHC檢測(cè)的MMR蛋白主要包括MLH1、MSH2、MSH6和PMS2,四種蛋白均為陽性表達(dá),則為pMMR,任一MMR蛋白缺失即為dMMR。檢測(cè)過程中,樣本處理和結(jié)果解讀應(yīng)符合相關(guān)操作規(guī)范和判讀標(biāo)準(zhǔn)的要求,試驗(yàn)全過程做好質(zhì)量控制。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)由有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生進(jìn)行判讀,并經(jīng)雙人復(fù)核。為避免機(jī)構(gòu)之間差異,試驗(yàn)開始前應(yīng)統(tǒng)一操作和判讀標(biāo)準(zhǔn),并進(jìn)行適當(dāng)?shù)臋C(jī)構(gòu)間一致性評(píng)價(jià)。臨床試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)總結(jié)IHC檢測(cè)過程中的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和結(jié)果。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)表中列出所有病理醫(yī)生的判讀結(jié)果和最終的結(jié)果解釋。

入組病例中dMMR和pMMR病例例數(shù)應(yīng)分別滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)可采用目標(biāo)值法公式對(duì)最低樣本量進(jìn)行估算。

比較研究的試驗(yàn)結(jié)果采用四格表方式進(jìn)行總結(jié),計(jì)算陽性/陰性符合率和總符合率及其95%置信區(qū)間。對(duì)于兩種方法檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本,可結(jié)合患者LS相關(guān)基因胚系突變檢測(cè)及其他臨床診斷信息進(jìn)行復(fù)核,也可以采用其他適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)差異原因進(jìn)行分析。

評(píng)價(jià)指標(biāo):與MMR蛋白IHC檢測(cè)的陽性符合率、陰性符合率95%置信區(qū)間下限一般分別不低于90%和95%。

方法二:采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn),評(píng)價(jià)兩種試劑判定MSI-H和MSI-L/MSS的一致性。其中MSI-H和MSI-L/MSS樣本例數(shù)應(yīng)分別滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)可采用目標(biāo)值法公式對(duì)最低樣本量進(jìn)行估算。兩種試劑判定MSI-H和MSI-L/MSS的陽性符合率、陰性符合率95%置信區(qū)間下限一般不低于95%。

3.1.2如果申報(bào)產(chǎn)品采用全新的微衛(wèi)星位點(diǎn)組合(包括全新的MSI-H判定標(biāo)準(zhǔn)),該組合在以往國內(nèi)、外權(quán)威指南、規(guī)范等文件中均未有推薦,且尚未受到行業(yè)廣泛認(rèn)可,則應(yīng)首選上述方法一進(jìn)行臨床性能評(píng)價(jià),如有必要,申請(qǐng)人可同時(shí)結(jié)合方法二對(duì)產(chǎn)品臨床性能進(jìn)行更加全面的評(píng)價(jià),證明申報(bào)產(chǎn)品對(duì)于MSI-H和MSI-L/MSS判定的性能能夠滿足臨床需求。

3.2每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測(cè)性能研究

采用試驗(yàn)體外診斷試劑與Sanger測(cè)序法或檢測(cè)相同微衛(wèi)星位點(diǎn)的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn),評(píng)價(jià)試驗(yàn)體外診斷試劑與對(duì)比方法檢測(cè)每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的一致性。

臨床試驗(yàn)前可采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)每種微衛(wèi)星位點(diǎn)預(yù)期陽性(即有序列長(zhǎng)度變化)例數(shù)和陰性(即無序列長(zhǎng)度變化)例數(shù)進(jìn)行最低樣本量估算,保證樣本量滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

針對(duì)每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果分別采用四格表方式進(jìn)行總結(jié),計(jì)算陽性/陰性符合率和總符合率及其95%置信區(qū)間。對(duì)于兩種方法檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本,可采用合理的方法進(jìn)行復(fù)核,并逐一列出試驗(yàn)體外診斷試劑、對(duì)比方法以及復(fù)核方法的檢測(cè)結(jié)果,如毛細(xì)管電泳圖、Sanger測(cè)序序列圖等,對(duì)差異原因進(jìn)行詳細(xì)分析。對(duì)于Sanger測(cè)序法,受到方法學(xué)限制,可能不能準(zhǔn)確讀出核苷酸重復(fù)個(gè)數(shù),但通過正常對(duì)照樣本和腫瘤組織樣本的測(cè)序圖譜對(duì)比應(yīng)能夠準(zhǔn)確判定是否存在序列長(zhǎng)度變化。

申請(qǐng)人應(yīng)詳述Sanger測(cè)序方法的建立、驗(yàn)證過程,特別是測(cè)序引物設(shè)計(jì)、測(cè)序靶序列選擇(包括與試驗(yàn)體外診斷試劑擴(kuò)增序列對(duì)比)、反應(yīng)體系驗(yàn)證、測(cè)序結(jié)果判讀以及該測(cè)序方法的最低檢測(cè)限等性能驗(yàn)證數(shù)據(jù),舉例說明測(cè)序圖譜的判讀方法,必要時(shí)標(biāo)示出串聯(lián)重復(fù)序列的位置。應(yīng)詳述判讀方法設(shè)定的依據(jù)。

評(píng)價(jià)指標(biāo):每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測(cè)陽性、陰性符合率95%置信區(qū)間下限一般不低于90%。

3.3 MSI檢測(cè)輔助鑒別結(jié)直腸癌中可能的LS患者的臨床性能研究

采用試驗(yàn)體外診斷試劑與結(jié)直腸癌中LS診斷的臨床參考標(biāo)準(zhǔn),即LS相關(guān)基因(主要為MLH1、MSH2、MSH6、PMS2,少部分為EPCAM)胚系突變檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較研究,評(píng)價(jià)產(chǎn)品臨床性能。胚系突變檢測(cè)可能涉及到NGS和MLPA(Multiplex Ligation- dependent Probe Amplification,多重連接探針擴(kuò)增技術(shù))(針對(duì)大片段缺失和插入)等方法;胚系突變的結(jié)果應(yīng)依據(jù)國際上公認(rèn)的指南和數(shù)據(jù)庫等進(jìn)行判定。臨床試驗(yàn)資料中應(yīng)針對(duì)胚系突變檢測(cè)方法的建立和性能評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)等進(jìn)行詳細(xì)描述,并明確結(jié)果判定的依據(jù)。

入組病例應(yīng)包括LS相關(guān)基因胚系突變陽性(包括致病性突變和可能致病性突變)和陰性病例。為了避免受試人群的選擇偏倚,建議針對(duì)符合入組標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)直腸癌患者進(jìn)行順序入組,如其中LS相關(guān)基因胚系突變陽性病例較少,可以采用適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行富集。應(yīng)注意:富集入組的LS相關(guān)基因胚系突變陽性病例應(yīng)不是依據(jù)MSI檢測(cè)進(jìn)行篩選、并最終確診的患者,或者所依據(jù)的MSI檢測(cè)微衛(wèi)星位點(diǎn)組合應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑不同。

樣本量可采用如下公式進(jìn)行估算:

微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)注冊(cè)審查指導(dǎo)原則(2022年第40號(hào))(圖1)

公式中n為樣本量,Z1-α/2為置信度標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù),P為評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值,Δ為P的允許誤差大小。

例如,根據(jù)已有文獻(xiàn)和數(shù)據(jù),靈敏度預(yù)期值設(shè)為95%,特異度預(yù)期值設(shè)為85%,允許誤差Δ取值0.05。則陽性組最低樣本量為73例,陰性組最低樣本量195例。

為保證臨床性能評(píng)價(jià)的充分性,臨床試驗(yàn)樣本量建議不低于上述估算樣本量,同時(shí)充分考慮可能的脫落率和臨床性能評(píng)價(jià)的需要,設(shè)定入組樣本量要求。

試驗(yàn)結(jié)果采用四格表方式進(jìn)行總結(jié),計(jì)算試驗(yàn)體外診斷試劑的臨床靈敏度和特異度及其95%置信區(qū)間。應(yīng)針對(duì)總樣本、順序入組樣本和富集入組樣本試驗(yàn)結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,其中順序入組樣本中,按照相關(guān)流行病學(xué)規(guī)律,應(yīng)有一定數(shù)量LS相關(guān)基因胚系突變陽性樣本。

對(duì)于假陰性和假陽性結(jié)果,應(yīng)充分結(jié)合臨床診斷的其他信息(例如基因胚系突變的具體情況、體細(xì)胞基因突變情況等)進(jìn)行解釋和分析。

4.臨床試驗(yàn)方案、小結(jié)和報(bào)告

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)采用同一方案,并在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中嚴(yán)格執(zhí)行,不可隨意改動(dòng)。方案中對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)類型、對(duì)比方法選擇、受試者選擇、評(píng)價(jià)指標(biāo)、統(tǒng)計(jì)分析方法、樣本量估算和質(zhì)量控制要求等做出明確的規(guī)定,并根據(jù)各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)情況合理確定樣本量分配計(jì)劃。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比方法應(yīng)保持一致,以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)施情況進(jìn)行總結(jié),出具臨床試驗(yàn)小結(jié)。

臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)對(duì)整體臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、試驗(yàn)結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述,并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

(二)產(chǎn)品說明書

根據(jù)前文所述本指導(dǎo)原則適用產(chǎn)品的預(yù)期用途限定,產(chǎn)品說明書中【預(yù)期用途】項(xiàng)下建議描述為:本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)結(jié)直腸癌患者腫瘤組織FFPE樣本基因組DNA中的微衛(wèi)星位點(diǎn)……(列出待測(cè)微衛(wèi)星位點(diǎn)名稱),通過與正常對(duì)照樣本檢測(cè)結(jié)果對(duì)比,確定是否發(fā)生了微衛(wèi)星序列長(zhǎng)度變化。根據(jù)發(fā)生序列長(zhǎng)度變化的微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)量,將結(jié)直腸癌分為微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定(MSI-H)、微衛(wèi)星低度不穩(wěn)定(MSI-L)以及微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)三種微衛(wèi)星狀態(tài)。檢測(cè)結(jié)果用于輔助鑒別結(jié)直腸癌中可能的林奇綜合征患者。

同時(shí)應(yīng)注明:此類產(chǎn)品的應(yīng)用應(yīng)參考臨床相關(guān)診療指南的要求,檢測(cè)結(jié)果的解讀應(yīng)結(jié)合其他臨床診斷信息、疾病家族史及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)信息進(jìn)行綜合分析。

如未進(jìn)行用藥指導(dǎo)相關(guān)的臨床試驗(yàn),還應(yīng)在說明書中注明:該產(chǎn)品尚未進(jìn)行有關(guān)用藥指導(dǎo)的臨床性能評(píng)價(jià)。

三、參考文獻(xiàn)

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附件

關(guān)于微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)檢測(cè)試劑
的背景介紹

一、微衛(wèi)星與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性

微衛(wèi)星(microsatellite,MS)是指細(xì)胞基因組中以少數(shù)幾個(gè)核苷酸(一般為1~6個(gè),多為單堿基或雙堿基)為單位串聯(lián)重復(fù)的DNA序列,又稱短串聯(lián)重復(fù)(short tandem repeat,STR)。微衛(wèi)星位點(diǎn)廣泛存在于人類基因組中,約占基因組3%。

在正常狀態(tài)下,微衛(wèi)星的長(zhǎng)度保持不變,并且穩(wěn)定遺傳;DNA錯(cuò)配修復(fù)(mismatch repair,MMR)功能出現(xiàn)異常時(shí),微衛(wèi)星出現(xiàn)的復(fù)制錯(cuò)誤得不到糾正并不斷累積,使得微衛(wèi)星序列長(zhǎng)度發(fā)生改變,稱為微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI)。MSI根據(jù)程度可以被分成3類:微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定(MSI-high,MSI-H)、微衛(wèi)星低度不穩(wěn)定(MSI-low,MSI-L)、微衛(wèi)星穩(wěn)定(microsatellite stability,MSS)。

MSI現(xiàn)象于1993年在結(jié)直腸癌中首次發(fā)現(xiàn)。隨著研究深入,發(fā)現(xiàn)MSI現(xiàn)象不止存在于結(jié)直腸癌,在子宮內(nèi)膜癌、胃癌、卵巢癌等實(shí)體瘤中均有發(fā)生。

二、MSI檢測(cè)在結(jié)直腸癌中的臨床意義

MSI是錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷導(dǎo)致的結(jié)果。在臨床實(shí)踐中,錯(cuò)配修復(fù)功能狀態(tài)可以通過MMR蛋白免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry, IHC)檢測(cè)和MSI DNA檢測(cè)來反映。IHC檢測(cè)中錯(cuò)配修復(fù)蛋白均有表達(dá)即為錯(cuò)配修復(fù)功能完整(proficient mismatch repair,pMMR),任一錯(cuò)配修復(fù)蛋白缺失即為錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷(deficient mismatch repair,dMMR);MSI DNA檢測(cè)中,MSI-H通常提示為dMMR,MSI-L或MSS通常提示為pMMR。大量數(shù)據(jù)顯示,MMR蛋白IHC檢測(cè)和MSI DNA檢測(cè)結(jié)果一致性可以達(dá)到90%以上。

根據(jù)國內(nèi)、外結(jié)直腸癌診療指南推薦,在結(jié)直腸癌病理學(xué)診斷過程中,應(yīng)進(jìn)行MMR蛋白IHC或MSI DNA檢測(cè),從而確認(rèn)患者的錯(cuò)配修復(fù)狀態(tài)。其臨床意義有以下幾方面。

(一)MSI檢測(cè)用于結(jié)直腸癌預(yù)后評(píng)價(jià)和用藥指導(dǎo)

根據(jù)美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)結(jié)腸癌、直腸癌臨床實(shí)踐指南及中國臨床腫瘤學(xué)會(huì)(Chinese Society of Clinical Oncology,CSCO)結(jié)直腸癌診療指南,MSI可能是結(jié)直腸癌的預(yù)后因子,并與結(jié)直腸癌患者化療或免疫治療效果有關(guān)。有研究表明,dMMR/MSI-H的II期結(jié)直腸癌患者預(yù)后良好,且不會(huì)從單藥氟尿嘧啶類藥物的輔助化療中獲益。dMMR/MSI-H的晚期/轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者可能從免疫治療(PD-1單抗)中獲益。

(二)MSI檢測(cè)用于輔助鑒別結(jié)直腸癌中可能的林奇綜合征患者

林奇綜合征(Lynch syndrome,LS)是一種常染色體顯性遺傳性腫瘤綜合征,2010年之前又被稱為遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌( hereditary non-polyposis colorectal cancer,HNPCC)。LS是最常見的遺傳性結(jié)直腸癌綜合征,約占結(jié)直腸癌發(fā)生率的3%。LS患者結(jié)直腸及其他多部位罹患惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高,且平均發(fā)病年齡較輕。LS相關(guān)的致病基因主要包括MMR家族中的MLH1、MSH2、MSH6或PMS2基因,此外EPCAM基因胚系突變引起MSH2不表達(dá)也是導(dǎo)致LS的機(jī)理之一。由于MMR基因的功能失活性改變,LS患者往往表現(xiàn)為dMMR和(或)MSI-H表型。

以往依據(jù)阿姆斯特丹標(biāo)準(zhǔn)( Amsterdam criteria)和Bethesda 指南(Bethesda criteria guidelines),結(jié)直腸癌中LS患者的識(shí)別和診斷主要依靠先證者的發(fā)病年齡、相關(guān)腫瘤家族史、組織病理學(xué)特征等,這種篩查策略的靈敏度較低。目前MMR蛋白IHC檢測(cè)和(或)MSI DNA檢測(cè)成為主流的LS篩查策略,CSCO結(jié)直腸癌診療指南推薦對(duì)于70歲以下(含70歲)結(jié)直腸癌患者均可進(jìn)行MMR蛋白IHC檢測(cè)和(或)MSI DNA檢測(cè)以篩查可能的LS患者(二級(jí)推薦),dMMR/MSI-H 患者進(jìn)行LS相關(guān)基因的胚系突變檢測(cè),以明確診斷。NCCN結(jié)腸癌、直腸癌臨床實(shí)踐指南等基于成本效益分析,認(rèn)為可以對(duì)所有結(jié)直腸癌患者進(jìn)行MMR蛋白IHC檢測(cè)或MSI DNA檢測(cè),以篩查L(zhǎng)S患者。

(三)指導(dǎo)原則適用范圍的考慮

綜合以上背景信息,MSI檢測(cè)對(duì)于結(jié)直腸癌患者預(yù)后評(píng)價(jià)、用藥指導(dǎo)和LS的輔助篩選有重要的臨床意義。基于目前臨床實(shí)踐和體外診斷試劑審評(píng)經(jīng)驗(yàn),本指導(dǎo)原則適用的產(chǎn)品主要指預(yù)期用途限定為結(jié)直腸癌患者LS輔助篩選的診斷試劑,檢測(cè)方法學(xué)主要針對(duì)熒光PCR-毛細(xì)管電泳法。

三、MMR蛋白IHC檢測(cè)和MSI DNA檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)和局限

MMR蛋白IHC檢測(cè)和MSI DNA檢測(cè)在評(píng)價(jià)錯(cuò)配修復(fù)功能狀態(tài)中各有優(yōu)勢(shì)和局限。

IHC檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)是操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)平臺(tái)普及性高,并可以直接反映可能導(dǎo)致MSI-H發(fā)生的MMR缺陷基因,存在的問題是IHC影響因素較為復(fù)雜,常因樣本前處理不規(guī)范和結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)掌握不當(dāng)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。此外,罕見的情況下,MMR基因的錯(cuò)義突變可能導(dǎo)致MMR蛋白的氨基酸序列發(fā)生改變,蛋白功能障礙,但抗原性完整,表現(xiàn)為MMR功能缺陷但I(xiàn)HC染色仍呈現(xiàn)正常表達(dá)的“假陰性”結(jié)果。

MSI的DNA檢測(cè)更易標(biāo)準(zhǔn)化,可以實(shí)現(xiàn)較好的重復(fù)性。但只能選擇若干確定的微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),有可能由于位點(diǎn)代表性問題造成“假陰性”,且檢測(cè)條件要求較高、常需要配對(duì)受試者的正常對(duì)照樣本。組織樣本中腫瘤細(xì)胞比例低、腫瘤組織異質(zhì)性等問題可能會(huì)影響檢測(cè)質(zhì)量,造成“假陰性”結(jié)果。此外,有研究表明,某些MSH6胚系突變發(fā)生時(shí)PCR檢測(cè)可能表現(xiàn)為MSS,從而造成MSI檢測(cè)針對(duì)LS的假陰性結(jié)果。

NCCN結(jié)直腸癌遺傳高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南中指出,對(duì)于LS患者,IHC和MSI檢測(cè)分別有5~10%的假陰性。

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