乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)的基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2020年第16號(hào))
發(fā)布日期:2020-03-10 閱讀量:次
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乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)的基因突變檢測(cè)試劑
注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)的基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫,同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。
本指導(dǎo)原則是針對(duì)乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)的基因突變檢測(cè)試劑的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件,不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
(一)臨床背景
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染呈世界性流行,但不同地區(qū)HBV 感染的流行強(qiáng)度差異很大。全國2006年乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查表明,我國1-59歲一般人群乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)陽性率為7.18%,2014年中國疾病預(yù)防控制中心開展的全國1—29歲人群乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,1—4歲、5—14歲、15—29歲人群HBsAg陽性率分別為0.32%、0.94%和4.38%,我國現(xiàn)有HBV感染者約有8000萬。在臨床治療慢性乙型肝炎病毒感染的方案中,使用抗病毒藥物是最主要的手段??笻BV藥物主要包括干擾素α和核苷(酸)類似物兩大類,其中核苷(酸)類藥物服用便捷,抗病毒效力強(qiáng),不良反應(yīng)較小,但核苷(酸)類藥物在抗HBV治療中需要長(zhǎng)期服藥,一旦出現(xiàn)病毒耐藥,可能導(dǎo)致治療失敗、病毒DNA反彈、肝功能惡化甚至肝衰竭。因此,如何發(fā)現(xiàn)病毒耐藥突變,進(jìn)而合理調(diào)整治療方案,在慢性乙型肝炎臨床治療中具有極其重要的意義。
HBV屬于嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae),HBV基因組含有4個(gè)部分重疊的開放讀框(ORF),即前-S/S區(qū)、前-C/C 區(qū)、P區(qū)和X區(qū)。其中P區(qū)編碼聚合酶/逆轉(zhuǎn)錄酶,目前已知的核苷(酸)類藥物的耐藥突變均發(fā)生在HBV的P區(qū)。HBV雖然屬于DNA病毒,但其復(fù)制需經(jīng)過以前基因組RNA為復(fù)制中間體的逆轉(zhuǎn)錄過程。在此過程中,HBV逆轉(zhuǎn)錄酶由于缺乏嚴(yán)格的校正機(jī)制,導(dǎo)致HBV復(fù)制過程中核苷酸錯(cuò)配率較高。HBV復(fù)制的這種過程和特點(diǎn),導(dǎo)致同一患者體內(nèi)不同的HBV株基因序列之間也存在差異,因此,每一個(gè)患者體內(nèi)的病毒都是由不同基因序列的病毒株組成的動(dòng)態(tài)變化的病毒準(zhǔn)種,不同基因序列的病毒株在病毒準(zhǔn)種中所占的相對(duì)比例,一方面取決于病毒株自身的復(fù)制能力,另一方面也受到機(jī)體免疫系統(tǒng)或藥物的選擇壓力的影響。
抗病毒藥物核苷(酸)類似物進(jìn)入機(jī)體后,形成三磷酸活性成分,與機(jī)體天然的脫氧三磷酸核苷(dNTP)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合到HBV聚合酶上,使HBV的DNA鏈合成終止。如果患者體內(nèi)的HBV P區(qū)序列發(fā)生突變,導(dǎo)致產(chǎn)生的HBV聚合酶與核苷(酸)類似物結(jié)合力降低,突變的HBV即不受核苷(酸)類似物的抑制或抑制能力下降,在繼續(xù)應(yīng)用核苷(酸)類似物治療的情況下,突變株病毒由于對(duì)核苷(酸)類似物不敏感而逐漸成為優(yōu)勢(shì)株,從而導(dǎo)致患者對(duì)于核苷(酸)類似物的耐藥。
乙型肝炎病毒的耐藥突變分為原發(fā)性耐藥突變和補(bǔ)償性耐藥突變,原發(fā)性耐藥突變指藥物作用靶位的基因及其編碼的氨基酸發(fā)生突變,導(dǎo)致突變病毒株對(duì)治療藥物的敏感性下降。雖然原發(fā)性耐藥突變株對(duì)藥物的抵抗性增加,但也常導(dǎo)致突變病毒本身的復(fù)制能力下降。補(bǔ)償性耐藥突變指由于原發(fā)性耐藥突變病毒株復(fù)制能力下降,在原發(fā)性耐藥突變的基礎(chǔ)上,病毒株在其它位點(diǎn)發(fā)生突變,這些突變可部分恢復(fù)突變病毒的復(fù)制能力或可導(dǎo)致突變病毒對(duì)藥物敏感性的進(jìn)一步下降。
目前經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于抗HBV治療的核苷(酸)類似物有拉米夫定(LAM)、阿德福韋酯(ADV)、恩替卡韋(ETV)、替比夫定(LdT)、替諾福韋酯(TDF)和富馬酸丙酚替諾福韋(TAF)等。與拉米夫定常見耐藥相關(guān)的突變?yōu)閞tM204I/V和rtL180M,其中rtM204V多與rtL180M聯(lián)合出現(xiàn),rtM204I可單獨(dú)出現(xiàn)。與阿德福韋酯常見耐藥相關(guān)的突變?yōu)閞tN236T與rtA181V/T,兩個(gè)位點(diǎn)可單獨(dú)或聯(lián)合出現(xiàn)。與恩替卡韋常見耐藥相關(guān)的突變是在rtM204V+rtL180M基礎(chǔ)上,再聯(lián)合rtT184、rtS202或rtM250三個(gè)位點(diǎn)中至少一個(gè)位點(diǎn)的氨基酸替代突變。與替比夫定常見耐藥相關(guān)的突變?yōu)閞tM204I,其它位點(diǎn)如rtA181V/T等尚存在爭(zhēng)議。替諾福韋酯和富馬酸丙酚替諾福韋目前尚未發(fā)現(xiàn)確認(rèn)的耐藥突變。
HBV耐藥相關(guān)的檢測(cè)主要包括基因型耐藥檢測(cè)和體外表型分析等。
HBV基因型耐藥檢測(cè)是指采用分子生物學(xué)方法檢測(cè)已在體外表型分析中被證實(shí)與抗病毒藥物耐藥相關(guān)的HBV突變的臨床檢測(cè)。目前已批準(zhǔn)產(chǎn)品采用的方法主要包括:PCR-測(cè)序法(direct PCR sequencing)、基因芯片法(gene chip)、PCR-反向雜交法(PCR-reverse hybridization assay)、實(shí)時(shí)熒光PCR法(real-time PCR)等。
HBV體外表型分析(in vitro phenotypic analysis)是公認(rèn)的確認(rèn)耐藥的檢測(cè)方法,通過體外復(fù)制系統(tǒng)證實(shí)檢測(cè)到的HBV突變會(huì)降低其對(duì)抗病毒藥物的敏感性,常用半數(shù)有效濃度(50% effective concentration,EC50)或半數(shù)抑制濃度(50% inhibitory concentration,IC50)來評(píng)價(jià)耐藥程度的高低。其方法是將含有待檢測(cè)耐藥突變位點(diǎn)的HBV全基因組導(dǎo)入肝細(xì)胞來源的細(xì)胞系,再將不同濃度梯度的核苷(酸)類似物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中,經(jīng)過一定培養(yǎng)時(shí)間后檢測(cè)藥物作用下HBV DNA的復(fù)制情況,計(jì)算EC50,通過與野生株病毒的EC50比較,判斷該突變對(duì)核苷(酸)類似物的敏感性。當(dāng)抑制病毒復(fù)制所需的EC50與野生株相比增加l00倍以上稱為高度耐藥、l0—99倍為中度耐藥、2—9倍為輕度耐藥。
(二)本指導(dǎo)原則適用范圍
本指導(dǎo)原則所述乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)的基因突變檢測(cè)試劑是指利用分子生物學(xué)技術(shù),對(duì)人體血清/血漿樣本中乙型肝炎病毒耐藥突變位點(diǎn)進(jìn)行定性檢測(cè)的試劑。臨床適用人群為核苷(酸)類似物治療過程中出現(xiàn)病毒學(xué)突破的患者。除非有明確證據(jù)表明初治患者感染HBV來自接受核苷(酸)類似物抗病毒治療患者,一般不主張對(duì)初治患者進(jìn)行基因型耐藥檢測(cè)。
本指導(dǎo)原則是基于實(shí)時(shí)熒光PCR方法對(duì)產(chǎn)品相關(guān)申報(bào)資料提出要求,其他方法學(xué)的產(chǎn)品可依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是否適用,如不適用,可另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求或評(píng)價(jià)方法。
本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào))(以下簡(jiǎn)稱《辦法》)等相關(guān)法規(guī)要求。
二、注冊(cè)申報(bào)資料要求
(一)綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品批準(zhǔn)上市情況及異同比較等內(nèi)容,其中,預(yù)期用途應(yīng)明確所檢測(cè)的耐藥突變位點(diǎn),所檢測(cè)的耐藥突變位點(diǎn)與相應(yīng)藥物的相關(guān)性,該突變位點(diǎn)為原發(fā)性耐藥突變還是補(bǔ)償性耐藥突變,耐藥性突變對(duì)藥物敏感性的影響,相應(yīng)藥物累積耐藥發(fā)生率以及是否有交叉耐藥等。同類產(chǎn)品情況應(yīng)著重從所檢耐藥突變位點(diǎn)、相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況以及境內(nèi)外批準(zhǔn)上市情況等方面闡述申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與境內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。對(duì)于新的耐藥突變位點(diǎn),需要提供新位點(diǎn)與預(yù)期藥物敏感性之間關(guān)系的文獻(xiàn)資料,包括但不限于國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)<夜沧R(shí),以及基于中國人群的充分的臨床數(shù)據(jù)等。
綜述資料的撰寫應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào))(以下簡(jiǎn)稱44號(hào)公告)的相關(guān)要求。
(二)主要原材料研究資料
以實(shí)時(shí)熒光PCR方法為例,應(yīng)提供引物、探針、DNA聚合酶、dNTP、尿嘧啶糖基化酶(如有)等主要原材料的選擇與來源、制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料、質(zhì)控品的確認(rèn)試驗(yàn)資料以及企業(yè)參考品的原材料選擇、來源、質(zhì)量指標(biāo)、制備方法及陰陽性的確認(rèn)過程等的研究資料。
若主要原材料為企業(yè)自行生產(chǎn),其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定,并提交主要原材料制備過程的研究資料;如主要原材料購自其他供應(yīng)商,則需針對(duì)供應(yīng)商的選擇提供評(píng)價(jià)數(shù)據(jù),并提供供應(yīng)商出具的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告,以及申請(qǐng)人對(duì)該原材料進(jìn)行的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。
1. 核酸分離/純化組分(如有)的原理介紹、主要組成、主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)驗(yàn)證資料。
2. 引物和探針:包括申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)靶序列的引物和探針以及內(nèi)對(duì)照的引物和探針。應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)和篩選的過程,提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況,并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度檢查、濃度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。
3. 酶:需要的酶主要包括DNA聚合酶,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下:
3.1 DNA聚合酶應(yīng)包括DNA聚合酶活性、無核酸內(nèi)切酶活性、熱啟動(dòng)能力(如適用)、熱穩(wěn)定性等。
3.2如申報(bào)產(chǎn)品中包含尿嘧啶DNA糖基化酶,應(yīng)對(duì)其酶活性及熱穩(wěn)定性等質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)定,如使用其他工具酶,應(yīng)提供其詳細(xì)的研究資料。
4. dNTP:質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括純度、濃度、保存穩(wěn)定性及功能性實(shí)驗(yàn)等。
5. 試劑盒質(zhì)控品
試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒質(zhì)控品來實(shí)現(xiàn)。對(duì)于此類產(chǎn)品,質(zhì)控體系主要包括陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品和內(nèi)對(duì)照。申請(qǐng)人應(yīng)明確質(zhì)控品的原料來源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控品陰陽性的確認(rèn)方法,并提交相關(guān)驗(yàn)證資料。各種質(zhì)控品均應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過程,如核酸的平行提取等步驟,并且與被測(cè)臨床樣本在整個(gè)試驗(yàn)過程中保持相同的檢測(cè)方式,質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際檢測(cè)樣本基質(zhì)一致或接近。
有關(guān)質(zhì)控品和內(nèi)對(duì)照的具體要求包括以下幾個(gè)方面:
5.1陽性質(zhì)控品中應(yīng)包含試劑盒所檢測(cè)的主要突變類型,建議采用含有滅活乙肝病毒或假病毒的樣本。企業(yè)應(yīng)對(duì)陽性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求(如Ct值)。
5.2陰性質(zhì)控品應(yīng)包含未發(fā)生耐藥突變的野生型乙肝病毒核酸,可采用含有滅活乙肝病毒或假病毒的樣本,對(duì)可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。
5.3內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制,申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度做精確驗(yàn)證,既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。對(duì)內(nèi)對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果亦應(yīng)做出明確的范圍要求(如Ct值)。
6. 企業(yè)參考品:應(yīng)提交有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性確認(rèn)等試驗(yàn)資料。企業(yè)參考品應(yīng)充分考慮產(chǎn)品性能驗(yàn)證的需要進(jìn)行設(shè)置。具體要求如下:
6.1陽性參考品
陽性參考品制備應(yīng)采用經(jīng)滅活的、待測(cè)乙肝病毒耐藥突變陽性的樣本,通過測(cè)序、同類已上市產(chǎn)品檢測(cè)或者其他恰當(dāng)?shù)姆椒ù_認(rèn)耐藥突變情況。陽性參考品應(yīng)包含試劑盒所能檢測(cè)的所有耐藥突變位點(diǎn),對(duì)于罕見突變型或復(fù)雜突變型可采用假病毒樣本。
6.2陰性參考品
陰性參考品制備應(yīng)采用經(jīng)滅活的、確認(rèn)靶序列未發(fā)生待測(cè)突變的乙肝病毒陽性樣本,樣本類型與適用樣本類型一致。同時(shí)應(yīng)盡量包含適用范圍以外的其它乙肝病毒基因突變陽性樣本,和其它病原體陽性樣本。
6.3檢測(cè)限參考品
可選擇最低檢測(cè)限水平或略高于檢測(cè)限的水平,明確參考品中乙肝病毒核酸濃度和乙肝病毒基因突變百分率,應(yīng)包含所有的耐藥突變位點(diǎn),采用適當(dāng)?shù)年栃詸z出率(如95%(n≥20))作為最低檢測(cè)限參考品的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。檢測(cè)限參考品可采用經(jīng)滅活的、待測(cè)乙肝病毒耐藥突變陽性樣本和假病毒等模擬核酸樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐渲啤?
6.4精密度參考品
精密度參考品應(yīng)包含申報(bào)產(chǎn)品聲稱的主要耐藥突變位點(diǎn),試劑盒包含不同反應(yīng)體系時(shí),精密度參考品應(yīng)至少包含每個(gè)反應(yīng)體系的代表性位點(diǎn),并至少包括弱陽性(低濃度突變)水平。精密度參考品制備應(yīng)采用經(jīng)滅活的、待測(cè)乙肝病毒耐藥突變陽性的樣本。
(三)主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
1. 介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝,可以圖表方式表示,并說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。
2. 反應(yīng)原理介紹。
3. 詳述樣本采集、樣本處理方式的選擇和設(shè)置,提供相關(guān)的研究資料。
4. 確定最佳反應(yīng)體系的研究資料,包括樣本類型、樣本用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。
5. 不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述,并提交驗(yàn)證資料。
6. 如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑,應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過程進(jìn)行工藝優(yōu)化的研究資料。
(四)分析性能評(píng)估資料
申請(qǐng)人應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)價(jià)的研究資料,對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、試驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn),包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)和臨床樣本來源等。
分析性能評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南(CLSI-EP)文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求。
1. 核酸分離/純化性能(如適用)
在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前,應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外,還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用,盡可能去除PCR抑制物。無論檢測(cè)試劑是否含有核酸分離/純化的組分,企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測(cè)試劑的特性,對(duì)配合使用的核酸分離/純化試劑針對(duì)聲稱樣本類型的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗(yàn)證,提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。
2. 準(zhǔn)確度
采用多份包含及不包含待測(cè)突變位點(diǎn)的HBV核酸陽性臨床樣本,將試驗(yàn)用體外診斷試劑與Sanger測(cè)序或已上市同類產(chǎn)品等進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn),評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果一致性。樣本應(yīng)包括所有陽性突變位點(diǎn),并包含不同濃度水平。
考慮到同一耐藥突變發(fā)生在不同基因型毒株時(shí)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確度的影響,準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)中應(yīng)適當(dāng)納入各種HBV基因型(至少包括B、C、D型)樣本,若某些基因型的耐藥突變較為罕見,可以采用假病毒樣本。
3. 最低檢測(cè)限
針對(duì)所有待測(cè)突變位點(diǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià),建議采用95%(n≥20)的陽性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于此類產(chǎn)品,擴(kuò)增反應(yīng)終體系中的耐藥突變序列所占百分率和總核酸濃度兩個(gè)因素對(duì)最低檢測(cè)限的影響較大,終體系中耐藥突變序列所占百分率越高、所含的總DNA量越多,則越容易檢出。因此,試劑盒最低檢測(cè)限評(píng)價(jià)主要考慮以下兩個(gè)方面。
3.1在擴(kuò)增反應(yīng)終體系特定核酸濃度下,耐藥突變序列所占百分率的最低檢測(cè)限。
采用野生型臨床樣本和具有目標(biāo)基因突變的假病毒樣本提取的核酸儲(chǔ)備液進(jìn)行不同比例混合,確定擴(kuò)增反應(yīng)終體系中的核酸濃度,并逐漸調(diào)整野生型和耐藥突變型核酸儲(chǔ)備液的比例以得到含不同突變序列百分率的混合液。對(duì)各份混合液進(jìn)行不少于20次的重復(fù)檢測(cè),確定95%陽性檢出率水平下的最低百分率,作為在固定的核酸濃度條件下,可以檢測(cè)到的最低的突變序列百分率。
3.2在特定突變序列百分率下,反應(yīng)終體系中核酸濃度的最低檢測(cè)限。
采用野生型臨床樣本和具有目標(biāo)基因突變的假病毒樣本提取的核酸儲(chǔ)備液進(jìn)行特定比例混合,再逐級(jí)稀釋成不同核酸濃度樣本,分別對(duì)各梯度濃度樣本進(jìn)行不少于20次的重復(fù)檢測(cè),確定95%陽性檢出率的最低核酸濃度。
4.精密度
應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度評(píng)價(jià)指標(biāo)的接受標(biāo)準(zhǔn)做出合理規(guī)定,如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求:
4.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證,除檢測(cè)試劑(包括核酸分離/純化組分)本身的影響外,還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、時(shí)間、地點(diǎn)、檢測(cè)輪次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。
4.2應(yīng)針對(duì)所有待測(cè)突變位點(diǎn)進(jìn)行精密度驗(yàn)證。使用臨床樣本進(jìn)行評(píng)價(jià),樣本濃度水平應(yīng)至少包含弱陽性和中/強(qiáng)陽性,并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?,精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開始。
4.3合理的精密度評(píng)價(jià)周期,例如:為期至少20天的連續(xù)檢測(cè),每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè),從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件,申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
5.分析特異性
5.1交叉反應(yīng)
HBV耐藥突變檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證應(yīng)考慮HBV各種基因突變及其它病原體的交叉反應(yīng)性,申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體、臨床樣本的來源、種屬、型別、基因突變情況和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。
5.1.1核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀的其它病原體,或待檢測(cè)樣本中可能共存的其它病原體核酸的交叉反應(yīng),應(yīng)采用待測(cè)核酸序列陰性、其它核酸高濃度樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證,如:人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人巨細(xì)胞病毒、E-B病毒、梅毒螺旋體、人類皰疹病毒6型、單純皰疹病毒1型、單純皰疹病毒2型、甲型流感病毒、痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等。
5.1.2申報(bào)產(chǎn)品包含的不同耐藥突變位點(diǎn)之間的交叉反應(yīng),以及申報(bào)產(chǎn)品不包含的其它HBV基因突變對(duì)被檢測(cè)位點(diǎn)的影響等。如:rtL180M、rtA181V/T、rtT184、rtS202、rtM204I/V、rtN236T、rtM250等突變位點(diǎn)之間的交叉反應(yīng)。
5.2干擾物質(zhì)
潛在的干擾物質(zhì)主要包括:內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物質(zhì)。
5.2.1內(nèi)源性干擾物質(zhì):樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,如血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素等。
5.2.2外源性干擾物質(zhì):常用抗凝劑,臨床常用抗病毒藥物如:干擾素、拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋酯和富馬酸丙酚替諾福韋等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。
5.2.3建議在待測(cè)核酸的臨界值水平對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè),并針對(duì)各種耐藥突變序列分別進(jìn)行評(píng)價(jià)。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。應(yīng)注明不同干擾物質(zhì)對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)無干擾的最高限值。
(五)陽性判斷值確定資料
對(duì)于此類試劑,陽性判斷值即為針對(duì)每個(gè)突變基因能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值(Cutoff),對(duì)于熒光探針PCR方法即為Ct值的確定資料。建議采用受試者工作特征曲線(ROC)的方式進(jìn)行相關(guān)研究。申請(qǐng)人應(yīng)選取適當(dāng)?shù)淖銐驍?shù)量的臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)以確定陽性判斷值。
(六)穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容,申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性(有效期)、開瓶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)限制等研究,申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究,應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
樣本穩(wěn)定性研究,可以在合理的溫度范圍內(nèi),每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行分析驗(yàn)證,從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
對(duì)于樣本進(jìn)行核酸提取后不能立即進(jìn)行檢測(cè)的,應(yīng)明確提取核酸的儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存時(shí)間等內(nèi)容,同時(shí)應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。
(七)產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料
申請(qǐng)人應(yīng)參考YY/T 0316《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》規(guī)定的過程和方法,在產(chǎn)品生命周期內(nèi)可能造成的危害進(jìn)行識(shí)別,對(duì)每一危害處境的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行判定和評(píng)價(jià),形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告,控制這些風(fēng)險(xiǎn)并監(jiān)視控制的有效性,充分保證產(chǎn)品的安全性和有效性。
(八)臨床試驗(yàn)
臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào))的要求,如相關(guān)法規(guī)、文件有更新,臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗(yàn)方法
1.1已有同類產(chǎn)品上市的情形
選擇已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑,進(jìn)行比較研究,評(píng)價(jià)耐藥突變位點(diǎn)的檢測(cè)性能。
對(duì)比試劑的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測(cè)性能等方面,確認(rèn)其與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性,并提交相應(yīng)的比對(duì)資料。
1.2無同類產(chǎn)品上市的情形
1.2.1如新的乙肝病毒耐藥突變位點(diǎn)用于乙肝用藥指導(dǎo)已獲行業(yè)認(rèn)可(包括:國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)<夜沧R(shí)、相關(guān)藥物說明書、臨床應(yīng)用等的認(rèn)可),在無同類產(chǎn)品上市的情況下,臨床試驗(yàn)中可選擇Sanger測(cè)序法或其他適當(dāng)?shù)姆椒ㄗ鳛閷?duì)比方法進(jìn)行比較研究,評(píng)價(jià)耐藥突變位點(diǎn)的檢測(cè)性能。
1.2.2如新的乙肝病毒耐藥突變位點(diǎn)用于乙肝用藥指導(dǎo)尚未獲行業(yè)認(rèn)可,臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩個(gè)試驗(yàn)?zāi)康?,耐藥突變位點(diǎn)檢測(cè)性能評(píng)價(jià)及耐藥突變與抗病毒藥物敏感性的相關(guān)性評(píng)價(jià)。耐藥突變位點(diǎn)檢測(cè)性能評(píng)價(jià)可參考1.2.1的試驗(yàn)方法,耐藥突變與抗病毒藥物敏感性的相關(guān)性評(píng)價(jià),應(yīng)以體外表型分析作為參考標(biāo)準(zhǔn),評(píng)價(jià)突變位點(diǎn)與體外表型分析的一致性。
針對(duì)Sanger測(cè)序和體外表型分析方法的建立、驗(yàn)證和質(zhì)量控制,應(yīng)提交詳細(xì)的研究論述,相關(guān)內(nèi)容納入臨床試驗(yàn)報(bào)告中。
2.受試者選擇和樣本例數(shù)
2.1受試者選擇:臨床試驗(yàn)受試者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品聲稱的適用人群進(jìn)行選擇,應(yīng)包含各種突變型樣本,以及各種可能的干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本(其它病原體陽性)等。
2.2樣本例數(shù)
臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì),本臨床試驗(yàn)可依據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑相對(duì)于對(duì)比試劑的陰、陽性符合率或相對(duì)于臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的靈敏度和特異度分別估算最低陰、陽性樣本例數(shù)。
2.2.1耐藥突變位點(diǎn)檢測(cè)性能評(píng)價(jià)的樣本量估算
對(duì)于耐藥突變位點(diǎn)檢測(cè)性能的評(píng)價(jià),臨床樣本量的估算建議采用如下樣本量公式計(jì)算,
公式中,n為樣本量;Z1-α、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位,P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn),PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。
以已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑的比較研究中,陰陽性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)(P0)建議不低于95%,若以Sanger測(cè)序法作為對(duì)比方法,臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)(P0)可適當(dāng)降低。應(yīng)證明產(chǎn)品與對(duì)比試劑/方法的陰陽性符合率(可信區(qū)間下限)不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)(P0)。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí),上述樣本量估算方法可能不適用,應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,如精確概率法等。
如申報(bào)產(chǎn)品為多突變位點(diǎn)檢測(cè)試劑,則其中常見的突變位點(diǎn)陽性樣本例數(shù)應(yīng)分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,罕見的突變位點(diǎn)應(yīng)有一定的陽性樣本例數(shù),保證臨床性能得到充分的確認(rèn)。
2.2.2新基因突變位點(diǎn)與抗病毒藥物敏感性的相關(guān)性評(píng)價(jià)的樣本量估算
樣本量的估算可采用如下抽樣調(diào)查的公式計(jì)算:
公式中n為樣本量,Z1-α/2為置信度標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù),P為評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值,Δ為P的允許誤差大小。應(yīng)注意,P和Δ的取值應(yīng)有充分依據(jù),其中Δ的常用取值為0.05,但當(dāng)預(yù)期值更高時(shí)應(yīng)考慮更優(yōu)的精度。
2.2.3臨床試驗(yàn)總體樣本量確定時(shí)應(yīng)在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上,同時(shí)考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及可能需要納入的干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本等情況適當(dāng)增加入組樣本量。
此類產(chǎn)品的檢測(cè)樣本類型一般為血清或血漿,如果樣本類型同時(shí)包括血清和血漿,且臨床前研究證明兩種樣本類型檢測(cè)一致性較好,則臨床試驗(yàn)可以其中一種樣本類型為主完成如上臨床試驗(yàn),同時(shí)另一種樣本類型采用一定數(shù)量樣本進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)(同源樣本對(duì)比或同類產(chǎn)品對(duì)比)驗(yàn)證即可,其中應(yīng)包括一定數(shù)量的陽性和陰性樣本,陽性樣本中盡量包含預(yù)期適用的所有突變位點(diǎn)。
3.臨床研究單位的選擇
應(yīng)選擇不少于3家(含3家)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu),按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)充分考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途,綜合流行病學(xué)背景,使臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和受試者的選擇具有一定的地域代表性。實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié),熟悉臨床試驗(yàn)方案。
4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,對(duì)于試驗(yàn)用體外診斷試劑與對(duì)比試劑(方法)/參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性評(píng)價(jià),常選擇交叉四格表形式總結(jié)兩種試劑/方法的檢測(cè)/診斷結(jié)果,評(píng)價(jià)指標(biāo)一般包括臨床靈敏度、臨床特異度、陽性符合率和陰性符合率等。
對(duì)于此類產(chǎn)品,每種突變類型均應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)于不一致樣本,應(yīng)進(jìn)行可能的原因分析,如臨床試驗(yàn)方案規(guī)定采用其他方法進(jìn)行確認(rèn),則確認(rèn)結(jié)果不應(yīng)納入統(tǒng)計(jì)分析。
5.倫理學(xué)要求
臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn),提請(qǐng)倫理委員會(huì)審查,并獲得倫理委員會(huì)的同意。注冊(cè)申報(bào)時(shí)應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見。
6.臨床試驗(yàn)方案
臨床試驗(yàn)實(shí)施前,研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮,設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行統(tǒng)一的臨床試驗(yàn)方案,且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施,不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成,申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外,不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn),任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。
7.質(zhì)量控制
臨床試驗(yàn)開始前,建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn),以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等,最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下,最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及精密度。
8.臨床試驗(yàn)報(bào)告撰寫
臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述,應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述,并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法,最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。臨床試驗(yàn)報(bào)告的撰寫參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。
(九)產(chǎn)品技術(shù)要求
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期性能評(píng)估等結(jié)果,依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn),按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào))的有關(guān)要求,編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。
該試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括:物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。性能指標(biāo)應(yīng)依據(jù)分析性能評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果確定,檢驗(yàn)方法應(yīng)明確具體操作方法和使用的樣本及參考品情況。
該產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑,申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求,以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求,附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。
(十)產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告
應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品技術(shù)要求,在符合《辦法》要求的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn),提供檢驗(yàn)合格報(bào)告。
(十一)產(chǎn)品說明書
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息,是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù),因此產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào))的要求,進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外,其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性,翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致,如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn),則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注,并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。
結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求,下面對(duì)乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)的基因突變檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明,以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。
1.【預(yù)期用途】
1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)來自乙型肝炎病毒核酸陽性患者的血清/血漿樣本中的×××(具體的突變型)耐藥突變。本產(chǎn)品用于對(duì)×××藥物耐藥的輔助診斷。
1.2適用人群:應(yīng)為核苷(酸)類似物治療過程中出現(xiàn)病毒學(xué)突破的乙型肝炎患者,除非有明確證據(jù)表明初治患者感染乙肝病毒來自于接受核苷(酸)類似物抗病毒治療患者。一般不主張對(duì)初治患者進(jìn)行基因型耐藥檢測(cè)。
1.3簡(jiǎn)要介紹乙型肝炎病毒耐藥突變位點(diǎn)的特征,包括突變位點(diǎn)的描述,所檢測(cè)的耐藥突變位點(diǎn)與相應(yīng)藥物的相關(guān)性。
1.4強(qiáng)調(diào)該試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考,不應(yīng)作為治療藥物調(diào)整的唯一依據(jù),臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等因素對(duì)患者治療進(jìn)行綜合判斷。
2.【檢驗(yàn)原理】
詳細(xì)說明試劑盒檢測(cè)技術(shù)原理,包括核酸分離/純化方法、原理。說明檢測(cè)的耐藥突變位點(diǎn)信息;介紹引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)體系(管)組合、質(zhì)控品設(shè)置及熒光信號(hào)標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分(如尿嘧啶DNA糖基化酶,即UDG/UNG等),也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。
3.【主要組成成分】
詳細(xì)說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息,如含有生物源性物質(zhì),應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性;說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。
試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分,應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、貨號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)(如有)等詳細(xì)信息。當(dāng)試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分時(shí),應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后可以配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。
4.【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等,應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。注明“生產(chǎn)日期及有效期至(或失效日期)見標(biāo)簽?!?
5.【適用儀器】
明確所有適用的儀器型號(hào),提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。
6.【樣本要求】
明確適用的樣本類型,并詳細(xì)描述樣本采集及預(yù)處理要求、運(yùn)輸要求、保存條件及期限等。
7.【檢驗(yàn)方法】
詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟,包括:
7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。
7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。質(zhì)控品參與樣本核酸的平行提取的要求等。
7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備:各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。
7.4 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。
7.5儀器設(shè)置:特殊參數(shù),待測(cè)基因、內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇等。
7.6質(zhì)量控制:說明質(zhì)控品的檢測(cè)要求。
8.【陽性判斷值】
簡(jiǎn)要總結(jié)陽性判斷值研究方法及結(jié)論。明確說明樣本的陽性判斷值。
9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
說明質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)的正確結(jié)果要求,結(jié)合質(zhì)控品以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果,對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。
10.【檢驗(yàn)方法的局限性】
應(yīng)至少包括如下描述:
10.1本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析,不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。
10.2本產(chǎn)品僅檢測(cè)靶標(biāo)區(qū)域內(nèi)突變引起的耐藥。由其他基因或基因區(qū)域的突變、以及其他耐藥機(jī)制引起的耐藥本產(chǎn)品不能檢出。
10.3不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。
10.4未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
詳述分析性能評(píng)估的試驗(yàn)結(jié)果并簡(jiǎn)要描述臨床試驗(yàn)的基本信息、試驗(yàn)方法和結(jié)論。
12.【注意事項(xiàng)】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容:
12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì),應(yīng)給出生物安全性的警告。
12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》(衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)或現(xiàn)行有效版本)等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
12.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對(duì)聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說明的樣本采集和處理方法進(jìn)行了驗(yàn)證,其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。
12.4強(qiáng)調(diào):實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測(cè)的專業(yè)培訓(xùn),具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護(hù)程序。
三、參考文獻(xiàn):
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四、起草單位
國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。
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