呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2019年第80號(hào))
發(fā)布日期:2019-11-15 閱讀量:次
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呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)
審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫,同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)呼吸道病毒多重核酸測(cè)定試劑的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則未包含的研究?jī)?nèi)容,可自行補(bǔ)充。
如果申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)項(xiàng)目包括的病毒有相應(yīng)的指導(dǎo)原則,應(yīng)首先滿足指導(dǎo)原則要求的內(nèi)容。
本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件,不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
呼吸道感染(Respiratory tract infection,RTI)是人類最常見的一類疾病,可以在任何性別、年齡和地域中發(fā)生,是全球范圍內(nèi)引起人群發(fā)病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的臨床癥狀和體征都較為相似,其臨床表現(xiàn)主要為鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃體炎等癥狀,嚴(yán)重的可引起氣管炎、支氣管炎及肺炎等,但不同病原體引起的感染,其治療方法、療效和病程也不盡相同。目前已證明,大部分呼吸道疾病是由細(xì)菌外的病原體引起,其中以呼吸道病毒最常見。
本指導(dǎo)原則適用于呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑,適用樣本類型為鼻咽拭子、鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物樣本等,可包括但不限于:
甲型流感病毒(Influenza A,IFV A)、乙型流感病毒(Influenza B,IFV B)、呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)、副流感病毒(Parainfluenza Virus,PIV)、人偏肺病毒(Human Metapneumovirus,hMPV)、腺病毒(Adenovirus,Adv)、呼吸道感染腸道病毒(腸道病毒/鼻病毒)(Enterovirus,EV/ Rhinovirus, RhV)、冠狀病毒(Coronavirus,CoV)等。
本指導(dǎo)原則適用于利用熒光探針聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)或其他分子生物學(xué)方法,以特定的呼吸道病毒基因序列為檢測(cè)目標(biāo),對(duì)來源于人體樣本中的呼吸道病毒核酸進(jìn)行體外定性檢測(cè),臨床用于輔助診斷呼吸道病毒感染相關(guān)性疾病。涉及其他臨床用途的呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑可參考本指導(dǎo)原則。
二、注冊(cè)申報(bào)資料要求
(一)綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他內(nèi)容,其中的其他內(nèi)容包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市情況。與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述呼吸道病毒型別與臨床適應(yīng)癥的相關(guān)性及相關(guān)病毒在我國(guó)的流行特征;產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品所有可檢出的病毒型別、尚未驗(yàn)證的病毒型別,陳述應(yīng)科學(xué)、客觀且有依據(jù);與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的比較內(nèi)容應(yīng)著重從方法學(xué)、病毒種類及基因型檢出能力、檢出限等方面進(jìn)行比較。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào))和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào))的相關(guān)要求。
(二)主要原材料的研究資料
此類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分(如有)、企業(yè)參考品、質(zhì)控品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制,應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程;如主要原材料源于外購(gòu),應(yīng)提供資料包括:選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比試驗(yàn)資料、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告,以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。
1.引物和探針:應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則,提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議每種病毒設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選,針對(duì)所有預(yù)期適用的病毒種類及基因型別進(jìn)行檢出能力和特異性(如交叉反應(yīng))的評(píng)價(jià),選擇最佳組合,并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度及功能性實(shí)驗(yàn)等。
如為外購(gòu),引物和探針應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的質(zhì)檢證明,如純度(應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)或HPLC級(jí))、序列準(zhǔn)確性等,申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)引物、探針核酸序列準(zhǔn)確性、純度、濃度、探針標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物等進(jìn)行核實(shí),同時(shí)申請(qǐng)人應(yīng)進(jìn)行功能性驗(yàn)證,并提供相關(guān)資料。
2.脫氧三磷酸核苷(dNTP):包括dATP、dUTP、dGTP、dCTP、dTTP,應(yīng)提供對(duì)其純度、濃度、功能性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。
3.酶:需要的酶主要包括DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等,應(yīng)分別對(duì)酶活性、功能性等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。DNA聚合酶,應(yīng)具有DNA聚合酶活性,無核酸內(nèi)切酶活性,具熱穩(wěn)定性;逆轉(zhuǎn)錄酶,具逆轉(zhuǎn)錄酶活性,無核酸內(nèi)切酶活性;尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG),應(yīng)對(duì)酶活性及熱穩(wěn)定性有合理驗(yàn)證。
4.試劑盒內(nèi)質(zhì)控品
試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對(duì)照品(質(zhì)控品)來實(shí)現(xiàn),其參與樣本核酸的平行提取,以對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。質(zhì)控品濃度及成分的設(shè)置應(yīng)與待測(cè)樣本相近。申報(bào)資料應(yīng)對(duì)試劑盒對(duì)照品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗(yàn)資料詳細(xì)說明。
4.1陰性質(zhì)控品應(yīng)不含試劑盒所檢測(cè)的靶序列,應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過程。以對(duì)可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽性結(jié)果或擴(kuò)增反應(yīng)中背景值進(jìn)行質(zhì)量控制。陰性質(zhì)控品可來自非呼吸道病毒感染患者樣本、假病毒、含非靶向序列的生物樣本。建議采用與實(shí)際檢測(cè)樣本具有相同或相似性狀的基質(zhì)溶液作為陰性對(duì)照(質(zhì)控)品,不推薦采用水作為陰性對(duì)照(質(zhì)控)品。
4.2陽性質(zhì)控品
4.2.1全過程陽性質(zhì)控品應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過程,如核酸的平行提取等步驟。全過程陽性質(zhì)控品可用1~2個(gè)病毒株為代表,應(yīng)含有天然的或人工合成的包含試劑盒可檢測(cè)靶序列,可來自滅活病毒、假病毒、疫苗株等。企業(yè)應(yīng)對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果(如Ct值)做出明確的范圍要求。
4.2.2擴(kuò)增/檢測(cè)用陽性對(duì)照品(如有)可為濃度在最低檢出限附近的純化靶核酸,以對(duì)檢測(cè)過程進(jìn)行質(zhì)量控制。
4.3內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制,應(yīng)與靶核酸一同提取及擴(kuò)增,申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度做精確驗(yàn)證,既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。對(duì)內(nèi)對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果(如Ct值)亦應(yīng)做出明確的范圍要求。內(nèi)標(biāo)可設(shè)置為與待測(cè)病毒共提取的人核酸、人管家基因(如RNaseP、β-肌動(dòng)蛋白)或人工合成的外源片段。
5.企業(yè)參考品:應(yīng)詳細(xì)提供有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性確認(rèn)等試驗(yàn)資料。企業(yè)參考品的核酸性質(zhì)應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期檢測(cè)的靶物質(zhì)一致。建議企業(yè)參考品優(yōu)先采用病毒培養(yǎng)物,如病毒難以培養(yǎng),可采用假病毒、病毒株感染的細(xì)胞系等。
5.1陽性參考品和陰性參考品
陽性參考品應(yīng)覆蓋申報(bào)產(chǎn)品聲稱可檢出的主要呼吸道病毒亞型(詳見表1)。陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià),應(yīng)納入不在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)、易引發(fā)相似癥狀的其他呼吸道病原體樣品。
5.2檢測(cè)限參考品
申請(qǐng)人應(yīng)明確檢測(cè)限參考品中病毒核酸濃度的確定方法,明確檢測(cè)限參考品中病毒核酸濃度的確定依據(jù),檢測(cè)限參考品中呼吸道病毒核酸濃度應(yīng)為申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)限濃度或略高于檢測(cè)限濃度,檢測(cè)限參考品應(yīng)包含申報(bào)產(chǎn)品可檢出的呼吸道病毒主要亞型(詳見表1)。
5.3精密度參考品
可不包含所有涉及的呼吸道病毒亞型,但應(yīng)選擇多個(gè)臨床較常見的型別,針對(duì)所選型別應(yīng)至少包含3個(gè)水平:陰性水平、臨界陽性水平、(中或強(qiáng))陽性水平。
(三)主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
1.介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝,可用圖表方式表示,并說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。
2.反應(yīng)原理介紹。
3.詳述樣本采集、樣本處理方式的選擇和設(shè)置,提供相關(guān)的研究資料。
4.確定最佳反應(yīng)體系的研究資料,包括樣本用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。
5.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述,并提交驗(yàn)證資料。
6.如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑,應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過程進(jìn)行工藝優(yōu)化的研究資料。
(四)分析性能評(píng)估資料
申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)價(jià)的研究資料,對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、試驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn),包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源等。
針對(duì)不同的樣本類型,申請(qǐng)人應(yīng)分別完成性能評(píng)估,包括陰陽性符合率、最低檢測(cè)限、精密度、分析特異性等。
分析性能評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于此類產(chǎn)品,性能評(píng)估中所用樣品(除非特別說明)可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求:
1.核酸分離/純化性能
在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前,應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外,還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用,盡可能去除PCR抑制物。無論檢測(cè)試劑是否含有核酸分離/純化的組分,企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測(cè)試劑的特性,對(duì)配合使用的核酸分離/純化試劑的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗(yàn)證,提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。
2.陽/陰性參考品符合率
陽性參考品的檢測(cè)旨在驗(yàn)證試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的各呼吸道病毒主要亞型均可被檢測(cè)到,陽性參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽性。陰性參考品旨在評(píng)價(jià)試劑特異性,陰性參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。
3.最低檢出限
申報(bào)產(chǎn)品最低檢測(cè)限的性能評(píng)估資料應(yīng)包含最低檢測(cè)限的確定及驗(yàn)證過程。
病毒原液濃度測(cè)定建議采用空斑形成單位(PFU)或半數(shù)組織培養(yǎng)感染/致死劑量(TCID50)為計(jì)量單位(最低檢出限建議的病毒亞型見表1)。建議建立PFU/TCID50與拷貝數(shù)之間的關(guān)系。
企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢出限驗(yàn)證的病毒株的來源、型別確認(rèn)及滴度確認(rèn)試驗(yàn)等信息。
用于最低檢測(cè)限確定和驗(yàn)證的病毒株如包括疫苗株,其應(yīng)能夠體現(xiàn)發(fā)病季的病毒特點(diǎn)。
3.1最低檢測(cè)限的確定
應(yīng)針對(duì)申報(bào)產(chǎn)品所能檢出的主要呼吸道病毒亞型分別進(jìn)行確定。在進(jìn)行最低檢測(cè)限的確定時(shí),參與研究的病毒各亞型應(yīng)至少包括不同來源的2個(gè)具有代表性的病毒株的系列稀釋梯度。建議采用培養(yǎng)后病毒原液、以混合陰性樣本基質(zhì)作為稀釋液進(jìn)行梯度稀釋,難以培養(yǎng)的病毒也可采用假病毒或其他適宜方法進(jìn)行最低檢出限的確定。配制系列稀釋的樣品每個(gè)稀釋度上重復(fù)制備3~5份樣本,系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間(0~100%),可通過概率計(jì)算或其他適當(dāng)方法進(jìn)行測(cè)算選取適當(dāng)檢出率水平的濃度作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn),如90-95%(n≥20)的陽性檢出率水平。
通過另制備至少5份最低檢測(cè)限濃度水平的病毒稀釋液對(duì)90%~95%的檢出率進(jìn)行確認(rèn)。
3.2最低檢測(cè)限的驗(yàn)證
申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢出限或接近最低檢出限的病毒濃度、對(duì)每種常見待測(cè)病毒亞型具有時(shí)間和區(qū)域特征性的至少3個(gè)不同來源的病毒(病毒株或臨床樣本)進(jìn)行驗(yàn)證,總測(cè)試數(shù)不少于20次。
4.包容性驗(yàn)證
建議申請(qǐng)人在病毒LoD水平上或附近對(duì)聲稱樣本進(jìn)行分析,證明試驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè)代表時(shí)間和地理多樣性的、每種病毒主要亞型至少3個(gè)不同來源的臨床樣本(推薦病毒亞型見表1)。包容性驗(yàn)證所用臨床樣本與最低檢測(cè)限驗(yàn)證的樣本不能重復(fù)使用。
企業(yè)應(yīng)能夠提供用于包容性驗(yàn)證的病毒株的來源、型別確認(rèn)、滴度確定等信息。
5.干擾試驗(yàn)(分析特異性)
在本項(xiàng)試驗(yàn)中,申請(qǐng)人應(yīng)充分評(píng)估整個(gè)系統(tǒng)即從核酸提取到擴(kuò)增的全過程的分析特異性。用于分析特異性驗(yàn)證的樣本應(yīng)使用聲稱的樣本類型基質(zhì),并包括每種申報(bào)的樣本類型。
5.1內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾
應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型,針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià),并針對(duì)有代表性的呼吸道病毒亞型,在病毒臨界陽性水平進(jìn)行干擾試驗(yàn)驗(yàn)證。檢測(cè)的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)(如血液、鼻腔分泌物或粘膜,及用于緩解淤血、鼻噪、刺激或哮喘和過敏癥狀的鼻腔和咽喉藥物)及在樣本采集和制備期間引入的物質(zhì)(推薦用于干擾性試驗(yàn)的物質(zhì)見表2)。由于體外試驗(yàn)不一定能完全反映藥物影響,在適用情況下可考慮替代性試驗(yàn)如評(píng)估臨床實(shí)驗(yàn)中所納入患者的用藥影響,因此申請(qǐng)人也應(yīng)評(píng)估其他常規(guī)或非處方藥物及其代謝物。
5.2競(jìng)爭(zhēng)性干擾
申請(qǐng)人應(yīng)充分考慮臨床上常見的呼吸道病毒混合感染情況下(如甲型流感病毒與呼吸道合胞病毒),高濃度分析物對(duì)低濃度分析物檢測(cè)的影響。建議申請(qǐng)人結(jié)合申報(bào)試劑的反應(yīng)模式,使用一種最低檢測(cè)限濃度的分析物和一種高濃度分析物評(píng)估競(jìng)爭(zhēng)性干擾,競(jìng)爭(zhēng)性感染的病毒組合建議為同一反應(yīng)體系內(nèi)病毒、常見重癥感染病毒及常見混合感染病毒(如IFV A和RhV、IFV B和RhV、IFV A和PIV、EV和RhV、PIV和HRV、以及其他的多重感染等)。競(jìng)爭(zhēng)性干擾試驗(yàn)可與最低檢測(cè)限、重復(fù)性或其他干擾試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。
6.交叉反應(yīng)
6.1與試劑盒中其他病毒的交叉反應(yīng)性
建議申請(qǐng)人充分驗(yàn)證試劑盒中可檢測(cè)病毒及亞型之間的交叉反應(yīng)性,應(yīng)使用病毒最高臨床水平濃度進(jìn)行。
6.2與不在試劑盒檢測(cè)范圍中的病原體的交叉反應(yīng)性
申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)可能出現(xiàn)在檢測(cè)樣本中的病原體(如采樣部位常見微生物、其他呼吸道感染病原體等)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣品,應(yīng)盡量采用滅活病原體或臨床樣本。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證,申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果。病原體種類主要考慮以下幾方面:試劑盒檢測(cè)范圍以外的其他呼吸道病原體、感染人群呼吸道樣本中的其他微生物(如EBV和CMV)、樣本中可能出現(xiàn)的其他病原體。
7.精密度
企業(yè)應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo),如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素,因此精密度評(píng)價(jià)中應(yīng)同時(shí)包含若干臨床樣本,且精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。
7.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證,除檢測(cè)試劑(包括核酸分離/純化組分)本身的影響外,還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測(cè)輪次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。
7.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期,例如:為期至少20天的檢測(cè),每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè),從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
7.3用于精密度評(píng)價(jià)的人工模擬樣品和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平:陰性樣品、臨界陽性樣品、(中或強(qiáng))陽性樣品,并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?,臨床樣本精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開始。
7.3.1陰性樣本:待測(cè)物濃度低于最低檢測(cè)限或?yàn)榱銤舛?,陰性檢出率應(yīng)≥95%(n≥20)。
7.3.2臨界陽性樣本:待測(cè)物濃度略高于試劑盒的最低檢測(cè)限,陽性檢出率應(yīng)≥95%(n≥20)。
7.3.3中/強(qiáng)陽性樣本:待測(cè)物濃度呈中度到強(qiáng)陽性,陽性檢出率為100%且CV≤10%(n≥20)。
(五)陽性判斷值確定資料
陽性判斷值確定資料主要指對(duì)每種聲稱可檢出的病毒核酸檢測(cè)的Ct值進(jìn)行確認(rèn),建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。陽性判斷值研究資料樣本來源應(yīng)考慮不同年齡、性別、地域等因素,盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。如存在判定值灰區(qū),應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。如采用其他方法對(duì)陽性判斷值進(jìn)行確認(rèn)研究,應(yīng)說明這種方法的合理性。提供內(nèi)標(biāo)值的確定方法和研究資料。
(六)穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容,申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性(有效期)、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究,申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究,應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
考慮到病毒RNA極易被降解的特性,企業(yè)也應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究,主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗(yàn)證,可以在合理的溫度范圍內(nèi),每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證,從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
對(duì)于樣本提取后不能立即進(jìn)行檢測(cè)的,應(yīng)明確核酸儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存時(shí)間等,同時(shí)應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。
(七)臨床評(píng)價(jià)資料
臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào))的要求。臨床試驗(yàn)應(yīng)能檢出所有聲稱可檢出的呼吸道病毒,每種呼吸道病毒檢測(cè)陽性例數(shù)可采用統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行計(jì)算,建議每種罕見病毒類型的陽性樣本例數(shù)不少于50例,每種病毒類型的陽性例數(shù)在滿足最低例數(shù)要求的基礎(chǔ)上還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,方案中需要給出明確的樣本量確定依據(jù),如每種病毒類型與對(duì)照方法的檢測(cè)陽性一致率95%的置信區(qū)間下限>90%。臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇不少于3家(含3家)能代表不同地域的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成。
1.病例選擇及樣本類型
申請(qǐng)人應(yīng)選擇體征/癥狀符合呼吸道感染的目標(biāo)人群,進(jìn)行前瞻性臨床試驗(yàn)。申請(qǐng)人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí),應(yīng)考慮到各年齡段人群的差異,盡量覆蓋各個(gè)年齡段人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析時(shí),除總體病例數(shù)的要求外,建議對(duì)各年齡段人群分層進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析(如<5、6-21、22-59和>60歲),總體病例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。臨床試驗(yàn)入組病例應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期用途中適用人群一致。臨床試驗(yàn)應(yīng)首選新鮮樣本,每種病毒應(yīng)有前瞻性陽性樣本檢出;某些呼吸道病毒在人群中具有低流行率,可用已知含特定病毒的樣本(即留存樣本)進(jìn)行補(bǔ)充。如果選擇留存樣本,則應(yīng)證明凍存或其他保存方法的樣本穩(wěn)定性,且應(yīng)使用盲法,避免檢測(cè)偏差。
2.參比方法
申請(qǐng)人應(yīng)選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑,采用擬申報(bào)產(chǎn)品(以下稱考核試劑)與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究,證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。
如無已上市產(chǎn)品可選用病毒分離培養(yǎng)鑒定或測(cè)序方法進(jìn)行比對(duì)。對(duì)于難以培養(yǎng)的呼吸道病毒(如人偏肺病毒)也可直接采用測(cè)序方法作為參比方法。
2.1測(cè)序試驗(yàn)中的核酸擴(kuò)增方法所測(cè)靶序列應(yīng)與申報(bào)產(chǎn)品所測(cè)靶序列不同,且申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)該靶序列/引物提供文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)室數(shù)據(jù)支持。申請(qǐng)人應(yīng)在臨床研究報(bào)告中對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹,并提供以下關(guān)于測(cè)序試驗(yàn)的詳細(xì)信息及資料:
2.1.1測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。
2.1.2測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息,如基因區(qū)段選擇、分子量、純度、功能性試驗(yàn)等資料。
2.1.3對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證,尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn),建議將所選測(cè)序方法與擬申報(bào)產(chǎn)品的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。
2.1.4測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。
2.1.5提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。
2.2病毒培養(yǎng)時(shí),除細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)外,申請(qǐng)人還應(yīng)進(jìn)行病毒鑒定如病毒特異性抗體染色或PCR擴(kuò)增后測(cè)序。單純的CPE無法提供準(zhǔn)確的病毒鑒別。申請(qǐng)人應(yīng)提供病毒分離培養(yǎng)的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)室流程,以及特定細(xì)胞系可作為分離某種病毒的文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)支持。
3.另外,對(duì)于流感病毒,申請(qǐng)人還應(yīng)根據(jù)病毒流行情況選擇新鮮采集樣本,使用考核試劑與流感病毒感染檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法—病毒分離培養(yǎng)鑒定方法進(jìn)行比較研究,每種樣本類型不少于30例經(jīng)病毒分離培養(yǎng)方法確定為陽性的樣本。
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法,如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、陰性/陽性符合率等。對(duì)于本類產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究,常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果,對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性,統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè),即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
申請(qǐng)人應(yīng)分別統(tǒng)計(jì)各病毒檢測(cè)的陰、陽性符合率,同時(shí)應(yīng)分別統(tǒng)計(jì)混合感染樣本使用考核試劑和參比試劑的檢測(cè)結(jié)果。如考核試劑存在灰區(qū),申請(qǐng)人還應(yīng)統(tǒng)計(jì)灰區(qū)樣本使用參比試劑的檢測(cè)結(jié)果。
在數(shù)據(jù)收集過程中,對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本,應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法或臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行復(fù)核,同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。
5.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫
根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求,臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述,應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述,并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。
5.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述
5.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。
5.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)、盲法的操作流程等。
5.1.3樣本類型,樣本的收集、處理及保存等。
5.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。
5.2具體的臨床試驗(yàn)情況
5.2.1臨床試驗(yàn)所用體外診斷試劑及儀器的名稱、批號(hào)、機(jī)型等信息。
5.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況、不同病毒分布情況進(jìn)行綜合,建議以列表或圖示方式列出各年齡組和不同病毒的樣本例數(shù)。
5.2.3質(zhì)量控制,試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控運(yùn)行情況。
5.2.4具體試驗(yàn)過程,樣本收集、樣本保存、樣本檢測(cè)、結(jié)果處理、結(jié)果不一致樣本的確認(rèn)等。
5.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
5.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。
5.3.2結(jié)果的一致性分析
計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總體符合率,采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法,如四格表卡方檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。
5.4討論和結(jié)論
對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果,對(duì)本次臨床研究有無特別說明,最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。
(八)產(chǎn)品技術(shù)要求
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制情況、依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn),按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào))的有關(guān)要求,編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。
呼吸道病毒核酸檢測(cè)試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括:物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布,則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測(cè)要求。
按照《辦法》的規(guī)定,此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑,申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求,以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求,附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。
(九)產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告
應(yīng)提供該產(chǎn)品符合產(chǎn)品技術(shù)要求的、在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告;應(yīng)提供連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)合格報(bào)告。
(十)產(chǎn)品說明書
結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求,下面對(duì)呼吸道病毒核酸檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明,以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。
1.【預(yù)期用途】
1.1首段:本產(chǎn)品用于定性檢測(cè)人鼻咽拭子、咽拭子或其他樣本的××、××呼吸道病毒核酸。
適用樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究完成情況進(jìn)行確認(rèn)。應(yīng)明確所有可檢測(cè)的病毒種類及亞型。
1.2簡(jiǎn)單介紹待測(cè)目標(biāo)的特征,如病毒種系淵源、生物學(xué)性狀、宿主特性、致病性、感染后臨床表現(xiàn)、待測(cè)靶基因特征等。明確呼吸道病毒核酸試劑的臨床意義,通過對(duì)有呼吸道感染體征和癥狀的個(gè)體檢測(cè)和鑒別特異性病毒核酸,聯(lián)合其他臨床和實(shí)驗(yàn)室結(jié)果以輔助診斷呼吸道病毒感染。
1.3陰性結(jié)果不能排除呼吸道病毒感染,不能用作診斷、治療或其他管理決策的唯一依據(jù)。
1.4陽性結(jié)果不能排除檢測(cè)指標(biāo)外細(xì)菌感染或其他病毒混合感染情況。
1.5待測(cè)人群特征介紹:具有呼吸道病毒感染癥狀的患者、相關(guān)的密切接觸者、地域要求或年齡限制(如有)等,待測(cè)人群應(yīng)與申報(bào)產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中入組人群一致。
1.6應(yīng)強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測(cè)的專業(yè)培訓(xùn),具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護(hù)程序。
2.【檢驗(yàn)原理】
詳細(xì)說明試劑盒技術(shù)原理,及核酸分離/純化方法、原理。說明檢測(cè)的靶基因座位、序列長(zhǎng)度等;介紹引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)體系(管)組合、對(duì)照品(質(zhì)控品)設(shè)置及熒光信號(hào)標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分,也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。
3.【主要組成成分】
3.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息,陰性/陽性對(duì)照品(或質(zhì)控品)可能含有人源組分,應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性;明確不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。
3.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分,企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、貨號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)(如有)等詳細(xì)信息。
3.3如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分,則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。
4.【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等,應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。
5.【適用儀器】
所有適用的儀器型號(hào),提供儀器的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、型號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)(如有)等詳細(xì)信息,以指導(dǎo)用戶操作。
6.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容:
6.1樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇:是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。
6.2對(duì)采樣拭子、容器及保存液的要求:對(duì)采樣拭子的材質(zhì)要求(包括對(duì)拭子頭和拭子桿的要求)、保存容器、轉(zhuǎn)運(yùn)保存液的要求、轉(zhuǎn)運(yùn)條件等。
6.3樣本采集:具體采集部位及類型,詳述具體的操作方法或列出相關(guān)操作指南文件以指導(dǎo)使用者(最好能夠給出具體圖示),盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響。樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南,則應(yīng)遵循,并在此處引用。
6.4樣本處理及保存:核酸提取前的預(yù)處理、保存條件及期限(短期、長(zhǎng)期)等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫,凍融次數(shù)限制。有關(guān)描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評(píng)價(jià)及穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上。
7.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟,包括:
7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。
7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。對(duì)照品(質(zhì)控品)參與樣本核酸的平行提取要求等。應(yīng)對(duì)核酸濃度、純度等指標(biāo)提出質(zhì)量要求。
7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備:各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。
7.4逆轉(zhuǎn)錄過程的溫度和時(shí)間設(shè)置、PCR各階段的溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。
7.5儀器設(shè)置:特殊參數(shù),待測(cè)基因、內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇等。
7.6質(zhì)量控制:說明對(duì)照品(質(zhì)控品)的檢測(cè)要求。質(zhì)控品如不與申報(bào)產(chǎn)品一同提供,應(yīng)說明質(zhì)控品規(guī)格,包括病毒水平、病毒來源、滅活方法和生物安全性測(cè)定方法。
8.【陽性判斷值】
簡(jiǎn)要總結(jié)陽性判斷值研究方法及結(jié)論。
9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
結(jié)合對(duì)照品(質(zhì)控品)以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果,對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療或篩查指南,則應(yīng)在此項(xiàng)下引用,相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。
10.【檢驗(yàn)方法的局限性】
應(yīng)至少包括如下描述:
10.1本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析,不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。
10.2檢驗(yàn)的病毒核酸出現(xiàn)序列變異時(shí)會(huì)存在假陰性風(fēng)險(xiǎn)。
10.3不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。
10.4申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。
10.5取標(biāo)本期間,接種減毒活疫苗的患者可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果呈陽性。
10.6陽性和陰性預(yù)測(cè)值很大程度上取決于流行率。該檢驗(yàn)性能是在流行季節(jié)期間(如2018/2019)確立。對(duì)某些病毒的檢驗(yàn)性能可能隨檢測(cè)流行率和檢測(cè)人群變化。
10.7待檢核酸序列可能長(zhǎng)時(shí)間出現(xiàn)在體內(nèi),而與病毒活性無關(guān)。核酸檢測(cè)陽性并一定不意味著目前感染了相應(yīng)病毒或其為臨床癥狀的致病因子。
11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
依據(jù)分析性能評(píng)估資料,詳述以下性能指標(biāo):
11.1對(duì)相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品(如有)檢測(cè)的符合情況。
11.2最低檢測(cè)限
11.3企業(yè)內(nèi)部陽性/陰性參考品符合率
11.4精密度:精密度評(píng)價(jià)結(jié)果可采用列表形式描述。
11.5分析特異性:建議以列表方式說明驗(yàn)證的其他呼吸道病毒亞型、相關(guān)病原體等的交叉反應(yīng)性及其驗(yàn)證濃度水平??偨Y(jié)潛在干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)濃度水平及干擾情況。
11.6簡(jiǎn)要描述臨床試驗(yàn)的基本信息、試驗(yàn)方法和結(jié)論。
12.【注意事項(xiàng)】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容:
12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì),應(yīng)給出生物安全性的警告。
12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》(衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)或現(xiàn)行有效版本)等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
12.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對(duì)聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說明的樣本采集和處理方法(包括樣本采集液等)進(jìn)行了驗(yàn)證,其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。
三、名詞解釋
PCR-熒光探針法:在PCR過程中利用熒光標(biāo)記的特異性探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,并通過對(duì)熒光的采集和分析以達(dá)到對(duì)原始模板量進(jìn)行分析的PCR。
四、起草單位
國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。
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