基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2019年第80號(hào))
發(fā)布日期:2019-11-15 閱讀量:次
附件:基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2019年第80號(hào)).doc
基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常
檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)基于細(xì)胞熒光原位雜交法(Fluorescence In Situ Hybridization,F(xiàn)ISH)的人類染色體異常檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫,同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測(cè)試劑的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件,但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料,相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
本指導(dǎo)原則所述染色體異常的類型包括染色體數(shù)目異常、結(jié)構(gòu)異常(包括異位,倒位導(dǎo)致的基因斷裂和融合)、擴(kuò)增、缺失等,例如,產(chǎn)前羊水細(xì)胞中的染色體數(shù)目異常,白血病患者骨髓細(xì)胞中的BCR/ABL基因融合等。
檢測(cè)人類染色體異常的方法有染色體核型分析、原位雜交法、PCR法和高通量測(cè)序法等,不同方法在檢測(cè)染色體異常類型、片段大小、操作要求等方面具有不同特點(diǎn)。本指導(dǎo)原則適用于需進(jìn)行注冊(cè)審批方可上市的采用熒光原位雜交法檢測(cè)人類細(xì)胞樣本中染色體異常的檢測(cè)試劑。熒光原位雜交法是指根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,在與目標(biāo)DNA配對(duì)的核酸片段上標(biāo)記熒光染料(探針),該探針與待檢樣本中相應(yīng)的核酸片段在一定條件下特異結(jié)合(雜交),形成雙鏈核酸,借助于熒光顯微鏡觀察并記錄形成雜交雙鏈的類型、數(shù)量和所處染色體區(qū)帶位置,從而判斷待檢樣本中是否存在染色體異常的檢測(cè)方法。本指導(dǎo)原則是基于熒光原位雜交法撰寫而成,對(duì)于顯色原位雜交法和銀增強(qiáng)原位雜交法等亮視野原位雜交法不適用。
本指導(dǎo)原則適用樣本類型為人類細(xì)胞樣本,不適用于在石蠟包埋的細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)切片上進(jìn)行檢測(cè)的試劑和微生物檢測(cè)試劑。
本文是針對(duì)采用熒光原位雜交法檢測(cè)人類細(xì)胞樣本中染色體異常的檢測(cè)試劑的通用指導(dǎo)原則,申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合具體產(chǎn)品的特點(diǎn)進(jìn)行注冊(cè)申報(bào)。如果申報(bào)產(chǎn)品有具體指導(dǎo)原則,應(yīng)按照?qǐng)?zhí)行。
本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品,包括申報(bào)資料中部分項(xiàng)目要求,其他未盡事宜,應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào),以下簡(jiǎn)稱《辦法》)等相關(guān)法規(guī)要求。
二、注冊(cè)申報(bào)資料要求
注冊(cè)申報(bào)資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào))(以下簡(jiǎn)稱2014年第44號(hào)公告)的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括:
(一)綜述資料
1.產(chǎn)品預(yù)期用途。描述產(chǎn)品的預(yù)期用途,與預(yù)期用途相關(guān)的臨床背景情況。說明檢測(cè)的位點(diǎn)和靶序列(Target Sequence,TS),包括靶序列的長(zhǎng)度、異常類型和特異性信息。說明相關(guān)的臨床適應(yīng)癥,該異常在適應(yīng)癥中的發(fā)生情況和頻率,適應(yīng)癥的發(fā)生率、適用人群等。說明具體臨床意義,例如:是否用于診斷、分型、治療方案選擇、預(yù)后判斷、微量殘留病監(jiān)測(cè)等。介紹相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。
2.產(chǎn)品描述。描述產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理,包括雜交反應(yīng)和信號(hào)結(jié)果。描述主要原材料的來源及制備方法,主要生產(chǎn)工藝過程,參考品的制備和確認(rèn)方法。
3.有關(guān)生物安全性方面的說明。
4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)。
5.其他。包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。對(duì)同類產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法、檢測(cè)位點(diǎn)、樣本類型、熒光信號(hào)標(biāo)記及臨床應(yīng)用等進(jìn)行對(duì)比分析,以闡明申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)和局限性。對(duì)于新研制的體外診斷試劑產(chǎn)品,需要提供被測(cè)物與預(yù)期臨床適應(yīng)癥之間關(guān)系的文獻(xiàn)資料。
(二)主要原材料研究資料
應(yīng)提供主要原材料的來源選擇、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等研究資料。如主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn),其生產(chǎn)工藝必須穩(wěn)定可控;如主要原材料為購(gòu)自其他供應(yīng)商,應(yīng)詳述每一原材料的外購(gòu)方來源,外購(gòu)方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告或性能指標(biāo)證書,以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。
1.探針:明確探針類型(序列特異性探針、著絲粒探針等),提供該探針序列的選擇依據(jù),明確結(jié)合位點(diǎn)的序列長(zhǎng)度和染色體區(qū)帶位置,可采用FISH分析結(jié)合染色體顯帶的方法進(jìn)行定位。如檢測(cè)位點(diǎn)存在多種異常形式(例如斷裂點(diǎn)不同),應(yīng)合理設(shè)計(jì)探針避免漏檢。探針結(jié)合位點(diǎn)的基因組圖譜位置應(yīng)具有特異性,檢索基因組數(shù)據(jù)庫(kù),如果發(fā)現(xiàn)靶序列與基因組其他區(qū)域的序列具有同源性,應(yīng)進(jìn)行評(píng)估,盡量避免交叉雜交信號(hào)的出現(xiàn)。應(yīng)對(duì)探針的濃度、純度及標(biāo)記的熒光信號(hào)基團(tuán)進(jìn)行核實(shí),并進(jìn)行功能性試驗(yàn)驗(yàn)證其檢測(cè)性能。探針如為企業(yè)自己生產(chǎn),應(yīng)描述克隆培養(yǎng)、鑒定、熒光標(biāo)記和純化等過程;如為外購(gòu),應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明。
2.熒光染料:描述熒光染料的名稱和詳細(xì)特征,例如其最大發(fā)射/吸收波長(zhǎng),標(biāo)記后持續(xù)被激發(fā)光源照射時(shí)的抗淬滅能力等。
3.雜交緩沖液:描述配方組成和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),確認(rèn)其可提供合適的離子和雜交環(huán)境。
4.背景信號(hào)封閉劑:描述采取的降低背景信號(hào)的方法,如果采用背景信號(hào)封閉劑(例如:人 Cot-1 DNA),應(yīng)確認(rèn)其封閉效果。
5.細(xì)胞核復(fù)染劑:一般包含二脒基苯基吲哚(DAPI)和抗褪色劑,用于細(xì)胞核DNA的染色,同時(shí)防止熒光信號(hào)淬滅。描述配方組成和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
6.質(zhì)控品(如有):建議試劑盒中包含經(jīng)驗(yàn)證的質(zhì)控品,以利于控制FISH試驗(yàn)的質(zhì)量,對(duì)試劑制備和雜交過程進(jìn)行質(zhì)控,并可統(tǒng)一結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn),輔助改善實(shí)驗(yàn)室間精密度和準(zhǔn)確度。質(zhì)控品可為質(zhì)控玻片,也可為經(jīng)固定的細(xì)胞懸液。如試劑盒中包含質(zhì)控品,應(yīng)詳述制備和確認(rèn)方法。質(zhì)控品樣本來源可為已知結(jié)果的臨床樣本或細(xì)胞系,各質(zhì)控品的結(jié)果要求應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證,予以明確。
7.企業(yè)參考品:應(yīng)包含陽(yáng)性參考品、陰性參考品、特異性參考品和精密度參考品,詳細(xì)說明參考品的樣本類型、組成、制備和保存情況。參考品應(yīng)經(jīng)染色體核型分析或其他合理方法確認(rèn)其陰陽(yáng)性。陽(yáng)性參考品應(yīng)涵蓋主要染色體異常信號(hào)類型,陰性參考品主要驗(yàn)證干擾和交叉反應(yīng)的情況,特異性參考品驗(yàn)證探針雜交位點(diǎn)的特異性,精密度參考品驗(yàn)證產(chǎn)品重復(fù)性。陽(yáng)性參考品、陰性參考品和精密度參考品可采用臨床樣本或細(xì)胞系,特異性參考品應(yīng)采用處于中期分裂相的正常外周血(或其培養(yǎng)液)淋巴細(xì)胞。如產(chǎn)品適用多種樣本類型,且各樣本類型間存在顯著性能差異,需分別設(shè)置企業(yè)參考品。
(三)主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
應(yīng)描述主要生產(chǎn)工藝及確定依據(jù),詳述探針標(biāo)記、工作液配制、檢驗(yàn)、分裝、包裝等工序以及各個(gè)步驟的質(zhì)量關(guān)鍵控制點(diǎn),可用流程圖表示。
申請(qǐng)人應(yīng)建立適當(dāng)反應(yīng)體系,以獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。如果產(chǎn)品涉及樣本處理和檢測(cè)過程的不同方案,應(yīng)對(duì)各方案的一致性予以驗(yàn)證。應(yīng)對(duì)下述內(nèi)容進(jìn)行研究,評(píng)價(jià)指標(biāo)包括探針信號(hào)強(qiáng)度、雜交效率、交叉雜交、非特異性結(jié)合及背景強(qiáng)度。
1.樣本要求
1.1樣本采集:研究確定樣本采集時(shí)間(例如特定孕周范圍內(nèi)),最佳/最小采集體積和檢測(cè)用樣本量。如產(chǎn)品適用不同樣本類型(例如:羊水細(xì)胞、絨毛膜細(xì)胞、臍血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、外周血細(xì)胞,新鮮樣本或培養(yǎng)樣本),應(yīng)分別予以研究。明確檢測(cè)的細(xì)胞階段,例如:間期和/或中期。
1.2樣本固定和制片:應(yīng)對(duì)低滲時(shí)間、預(yù)固定時(shí)間、滴片細(xì)胞密度等進(jìn)行研究。如產(chǎn)品適用不同樣本或玻片類型,例如培養(yǎng)和未培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞懸液玻片、細(xì)胞涂片和經(jīng)流式細(xì)胞儀分選的細(xì)胞玻片,應(yīng)分別進(jìn)行研究。
1.3 玻片預(yù)處理:對(duì)預(yù)處理?xiàng)l件進(jìn)行研究,如需蛋白酶消化,應(yīng)對(duì)消化條件進(jìn)行重點(diǎn)研究,優(yōu)化蛋白酶的用量和消化時(shí)間,盡量減少消化不充分造成的非特異性結(jié)合,同時(shí)避免消化過強(qiáng)造成DNA損失。如產(chǎn)品適用不同樣本或玻片類型,應(yīng)分別進(jìn)行研究。
2.試劑用量:對(duì)探針等各試劑成分的用量進(jìn)行優(yōu)化。采用不同用量進(jìn)行試驗(yàn),通過平衡全部探針雜交信號(hào)強(qiáng)度和非特異信號(hào)/背景強(qiáng)度,選取最佳使用量。
3.反應(yīng)條件:雜交過程包括變性(樣本和探針DNA單鏈化)、雜交、洗滌和細(xì)胞核復(fù)染,過程中的各反應(yīng)條件對(duì)于提高雜交效率,減少交叉雜交至關(guān)重要。優(yōu)化變性溫度和時(shí)間,雜交溫度和時(shí)間,研究不同雜交儀或替代儀器的適用性,研究雜交后洗滌條件(主要包括洗滌液組分、洗滌溫度和洗滌時(shí)間)。試劑盒中包含多種探針時(shí),需對(duì)每種探針均進(jìn)行雜交反應(yīng)條件優(yōu)化,最終選擇試劑的最佳反應(yīng)條件。
4.計(jì)數(shù)細(xì)胞量:提供結(jié)果判讀需要計(jì)數(shù)的細(xì)胞量及確定依據(jù)。計(jì)數(shù)細(xì)胞量和適用樣本類型、預(yù)期用途、試劑的雜交效率、精密度、最低檢測(cè)限等因素有關(guān)。
(四)分析性能評(píng)估資料
申請(qǐng)人應(yīng)使用多批產(chǎn)品進(jìn)行研究,建立穩(wěn)定可靠的性能指標(biāo)。需提交在產(chǎn)品研制和成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)價(jià)的研究資料,包括方案設(shè)計(jì)、研究方法、材料和設(shè)備、試驗(yàn)數(shù)據(jù)(包括代表性彩色圖片)和結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。建議著重對(duì)以下性能指標(biāo)進(jìn)行研究:
1.探針敏感性
試劑中探針結(jié)合靶序列的能力,也稱為雜交效率??赏ㄟ^研究靶序列被檢測(cè)到的概率進(jìn)行評(píng)估,例如:分析n個(gè)細(xì)胞中的2n條染色體,顯示各熒光信號(hào)的染色體比例應(yīng)不低于95%,可采用處于中期分裂相的正常外周血(或其培養(yǎng)液)淋巴細(xì)胞進(jìn)行評(píng)估。
2.探針特異性
試劑區(qū)分樣本中靶序列與其他序列的能力。可通過研究雜交信號(hào)是否特異結(jié)合到靶序列進(jìn)行評(píng)估,例如:分析n個(gè)細(xì)胞中的2n條染色體,特異雜交到染色體正確位置的比例應(yīng)不低于95%,可采用處于中期分裂相的正常外周血(或其培養(yǎng)液)淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),結(jié)合顯帶技術(shù)進(jìn)行觀察。
如果出現(xiàn)交叉雜交,應(yīng)考慮靶序列與交叉雜交序列的同源性程度,是否存在其他相似染色體異常類型等問題。應(yīng)按照下述規(guī)則報(bào)告交叉雜交的結(jié)果:
A.在靶序列之外其他位置檢測(cè)到信號(hào)的細(xì)胞比例;
B.每個(gè)細(xì)胞/每份樣本中不同交叉雜交染色體/區(qū)域的數(shù)量;
C.使用標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)命名,確定所有交叉雜交的染色體位置,并描述這些非靶序列。
3.陰、陽(yáng)性符合率
采用多例已知結(jié)果的臨床樣本進(jìn)行制片檢測(cè)。陽(yáng)性樣本應(yīng)包括靶序列的所有染色體異常類型/信號(hào)類型。陰性樣本應(yīng)包括野生型和易混淆異常。陰、陽(yáng)性樣本的檢測(cè)結(jié)果均應(yīng)在各自的閾值范圍內(nèi)。
4.精密度
研究試劑在各種條件下,不同染色體異常類型和比例(尤其是醫(yī)學(xué)相關(guān)水平附近)的精密度。應(yīng)對(duì)批內(nèi)和批間差異進(jìn)行研究,考慮運(yùn)行內(nèi)、運(yùn)行間、日間、人員間、實(shí)驗(yàn)室間等因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,檢測(cè)結(jié)果應(yīng)一致或者變異系數(shù)(CV)在合理范圍內(nèi)。
5.最低檢出限
試劑檢測(cè)陽(yáng)性信號(hào)細(xì)胞占規(guī)定計(jì)數(shù)細(xì)胞的最小百分比。最低檢出限與計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)密切相關(guān),可通過設(shè)置不同計(jì)數(shù)細(xì)胞量,確定產(chǎn)品的最低檢出限。可采用經(jīng)合理方法確定陽(yáng)性細(xì)胞比例的不同樣本,或采用陰、陽(yáng)性細(xì)胞按不同比例混合的方法,設(shè)置多個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞比例的梯度進(jìn)行研究。
6.干擾物質(zhì)
說明樣本中潛在的干擾物質(zhì),樣本處理和制片過程中的干擾物質(zhì),采集過程中可能的其它細(xì)胞污染等,研究干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。
如果產(chǎn)品適用多種樣本類型,應(yīng)進(jìn)行樣本適用性研究,應(yīng)盡量采用臨床樣本,分別提供每種樣本類型的性能評(píng)估資料。
(五)陽(yáng)性判斷值確定資料
對(duì)于此類試劑,陽(yáng)性判斷值即為能夠區(qū)分染色體異常與否的閾值。應(yīng)入組已知靶序列異常狀態(tài)的臨床樣本,包括陽(yáng)性、陰性和陽(yáng)性判斷值附近的樣本,研究預(yù)設(shè)陽(yáng)性判斷值,建議采用受試者工作特征曲線(ROC)的分析方法。申請(qǐng)人應(yīng)采用臨床樣本對(duì)預(yù)設(shè)陽(yáng)性判斷值進(jìn)行驗(yàn)證。不同樣本類型可能會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性判斷值的差異,如果試劑盒適用不同的樣本類型,應(yīng)對(duì)所有樣本類型的陽(yáng)性判斷值進(jìn)行驗(yàn)證。如果涉及不同染色體異常類型和/或信號(hào)類型,可能需要設(shè)置兩個(gè)或多個(gè)陽(yáng)性判斷值,此時(shí)應(yīng)分別進(jìn)行研究和驗(yàn)證。
(六)穩(wěn)定性研究資料
1.試劑穩(wěn)定性:申請(qǐng)人應(yīng)充分考慮產(chǎn)品在儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用過程中的不利條件,進(jìn)行實(shí)時(shí)穩(wěn)定性(有效期)、開瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性和光照穩(wěn)定性的研究,申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、研究數(shù)據(jù)及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究,應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
2.樣本穩(wěn)定性:申請(qǐng)人應(yīng)充分考慮樣本采集、處理、運(yùn)輸、儲(chǔ)存等各個(gè)階段的條件,研究確定樣本的保存條件和時(shí)間,包括采集后樣本保存和處理后細(xì)胞、玻片保存。雜交后玻片的信號(hào)會(huì)隨著溫度升高、時(shí)間延長(zhǎng)而減弱,應(yīng)研究在何種保存條件和時(shí)間內(nèi)熒光信號(hào)強(qiáng)度不受影響。
(七)臨床評(píng)價(jià)資料
臨床試驗(yàn)總體要求及臨床試驗(yàn)資料的內(nèi)容應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則的規(guī)定,申請(qǐng)人應(yīng)在符合要求的臨床機(jī)構(gòu),在滿足臨床試驗(yàn)最低樣本量要求的前提下,根據(jù)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途、相關(guān)疾病的流行率和統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,制定能夠證明其臨床性能的臨床試驗(yàn)方案,同時(shí)最大限度地控制試驗(yàn)誤差,提高試驗(yàn)質(zhì)量并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)合理的分析。
1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選定不少于3家(含3家)已備案的醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu),按照有關(guān)規(guī)定開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具備完善的細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)能力,操作者、閱片者應(yīng)在熒光原位雜交技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域具有豐富經(jīng)驗(yàn)。不同產(chǎn)品對(duì)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和操作人員的要求可能不同,申請(qǐng)人應(yīng)綜合產(chǎn)品預(yù)期用途進(jìn)行考慮,例如:基于產(chǎn)前診斷用途,臨床研究機(jī)構(gòu)應(yīng)為已取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu),機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》和《母嬰保健專項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》。
2.臨床試驗(yàn)方案
2.1臨床試驗(yàn)實(shí)施前,研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮,設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致,且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施,不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成,申報(bào)機(jī)構(gòu)的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外,不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程,尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
2.2對(duì)于臨床樣本應(yīng)在方案中明確采集時(shí)間、樣本類型和樣本質(zhì)量的要求,該類要求應(yīng)與產(chǎn)品說明書中相應(yīng)內(nèi)容一致。
2.3試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例入選/排除標(biāo)準(zhǔn),任何已經(jīng)入選的病例在被排除出臨床試驗(yàn)時(shí)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。
2.4臨床試驗(yàn)過程中,各家機(jī)構(gòu)應(yīng)按照說明書描述,遵循一致的判讀標(biāo)準(zhǔn),包括細(xì)胞選擇、判讀分析和結(jié)果解釋等。
2.5如需提供隨訪資料,應(yīng)包括但不限于如下內(nèi)容:隨訪操作及記錄人員、復(fù)核人員、隨訪方式、隨訪項(xiàng)目、判定依據(jù)、隨訪時(shí)間周期及間隔、隨訪終點(diǎn)等。
3.試驗(yàn)方法
3.1申請(qǐng)人應(yīng)綜合考慮產(chǎn)品預(yù)期用途,反應(yīng)原理和檢測(cè)方法等因素,選擇合理的臨床試驗(yàn)方法。建議采用染色體核型分析和跟蹤隨訪等金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究,評(píng)價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑(以下稱考核試劑)的臨床敏感性和臨床特異性,從而證明其臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。染色體數(shù)目檢測(cè)試劑,染色體核型分析可辨識(shí)的其他染色體異常檢測(cè)試劑,均應(yīng)采用上述方法進(jìn)行臨床試驗(yàn)。
對(duì)于適用樣本類型難以培養(yǎng)獲得中期分裂相的試劑,染色體核型分析難以辨識(shí)的染色體異常檢測(cè)試劑,可選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)已建立的其他臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床試驗(yàn),例如:疾病診斷、參考方法等。應(yīng)詳細(xì)描述所采用的臨床參考標(biāo)準(zhǔn),確保其選擇的合理性。
3.2申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合具體產(chǎn)品的預(yù)期用途進(jìn)行臨床試驗(yàn),該類產(chǎn)品可作為胎兒遺傳性疾病、白血病等疾病的診斷方法之一;如果申報(bào)產(chǎn)品具有指導(dǎo)用藥的預(yù)期用途,應(yīng)提供指導(dǎo)用藥相關(guān)證據(jù);如申報(bào)產(chǎn)品具有治療監(jiān)測(cè)、預(yù)后判定等預(yù)期用途,應(yīng)設(shè)計(jì)相應(yīng)試驗(yàn)方案,例如治療前后的跟蹤研究,必要時(shí)進(jìn)行隨訪研究等。如申報(bào)產(chǎn)品有具體指導(dǎo)原則,應(yīng)參照?qǐng)?zhí)行。
4.受試者選擇及陽(yáng)性例數(shù)
臨床試驗(yàn)應(yīng)以申報(bào)產(chǎn)品適用人群作為研究對(duì)象,疾病類型應(yīng)涵蓋申報(bào)產(chǎn)品聲稱的疾病種類,例如疾病的不同類型和病程分期等,應(yīng)納入一定數(shù)量的醫(yī)學(xué)決定水平附近樣本。對(duì)于陰性病例的選擇,應(yīng)考慮驗(yàn)證干擾因素和交叉反應(yīng)的需要,應(yīng)包括易混淆疾病、其他染色體區(qū)域和其他異常類型等,以從臨床角度考察其分析特異性。
明確給出樣本量的確定依據(jù),建議從統(tǒng)計(jì)學(xué)原則和陽(yáng)性樣本獲得可行性角度綜合計(jì)算陽(yáng)性例數(shù),臨床試驗(yàn)陽(yáng)性樣本量原則上應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。如產(chǎn)品檢測(cè)多個(gè)靶序列,每個(gè)靶序列應(yīng)單獨(dú)估算陰性/陽(yáng)性例數(shù);如申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)的某一靶序列異常形式存在差異且均具有臨床意義(例如主要斷裂點(diǎn)和次要斷裂點(diǎn)),每種異常形式均應(yīng)有一定量的陽(yáng)性例數(shù)。
若產(chǎn)品適用于多種細(xì)胞樣本類型,應(yīng)對(duì)所有樣本類型分別進(jìn)行臨床驗(yàn)證。
5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法與指標(biāo),如靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度及其95%置信區(qū)間等。常選擇交叉四格表的形式總結(jié)該檢測(cè)結(jié)果,采用kappa檢驗(yàn)驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的一致性,同時(shí)給出一致性檢驗(yàn)的結(jié)果。在臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè),即評(píng)價(jià)考核試劑與參比方法是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
應(yīng)詳細(xì)描述不一致的檢測(cè)結(jié)果,在方案中明確是否需進(jìn)一步復(fù)測(cè)或確認(rèn),并對(duì)不一致原因進(jìn)行分析。
(八)產(chǎn)品技術(shù)要求
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及指導(dǎo)原則的規(guī)定。對(duì)于此類試劑,性能指標(biāo)主要包括:外觀、熒光信號(hào)強(qiáng)度、敏感性、特異性、陽(yáng)性符合率、陰性符合率、精密度等。如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家參考品/標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布,則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測(cè)要求。
(九)產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則的要求,境外試劑的中文說明書除格式要求外,其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書一致,翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對(duì)基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行說明。
1.【預(yù)期用途】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容:
1.1說明產(chǎn)品的預(yù)期用途,描述樣本類型、檢測(cè)位點(diǎn)和異常類型。
例如:本產(chǎn)品用于檢測(cè)羊水細(xì)胞中的13、18和21號(hào)染色體的數(shù)目。本產(chǎn)品用于定性檢測(cè)白血病患者骨髓樣本中的BCR/ABL融合基因。
1.2說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況,說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。應(yīng)包括對(duì)適用人群特征的介紹,例如高危人群,臨床疑似或已診斷患有某疾病的人群。
1.3 根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途,進(jìn)行合理限制,例如:本產(chǎn)品僅檢測(cè)靶向染色體數(shù)目異常,不能檢測(cè)其他染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常。
1.4本檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考,如需確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀及其他檢測(cè)手段,不得作為臨床診斷或排除的唯一標(biāo)準(zhǔn)。
2.【檢測(cè)原理】
詳細(xì)說明產(chǎn)品的檢測(cè)原理,應(yīng)包括探針、熒光信號(hào)標(biāo)記和結(jié)果觀察等信息,建議結(jié)合文字和圖示對(duì)探針類型、長(zhǎng)度及位點(diǎn)進(jìn)行描述。
3.【主要組成成分】
3.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息,應(yīng)包括探針信息和質(zhì)控品(如有)的樣本信息。說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。
3.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分,應(yīng)列出相關(guān)試劑和儀器的名稱,質(zhì)控品(如適用)的名稱與貨號(hào),化學(xué)制劑的純度和濃度(如適用),儀器的配置和功能要求,耗材的規(guī)格(材質(zhì))要求。
4.【儲(chǔ)存條件及有效期】
對(duì)試劑的儲(chǔ)存條件、有效期、開瓶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)限制等信息做詳細(xì)介紹,應(yīng)包括避光的要求。如試劑盒包含質(zhì)控品還應(yīng)在此處明確質(zhì)控品的穩(wěn)定性。應(yīng)注明生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期。
5.【適用儀器】
明確配套熒光顯微鏡的配置要求,應(yīng)具備合適放大倍數(shù)的目鏡、物鏡和油鏡,具備相應(yīng)激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的濾片組/濾塊。
6.【樣本要求】
6.1樣本的類型和采集:明確適用樣本類型,采集時(shí)間和采集體積,所用抗凝劑(如適用)。應(yīng)明確說明在取樣過程中如何避免被其他細(xì)胞或外源DNA污染。如需培養(yǎng),應(yīng)說明細(xì)胞培養(yǎng)的具體方式。
6.2樣本的穩(wěn)定性:明確樣本采集后和處理后(固定細(xì)胞懸液和/或玻片)的保存條件和保存時(shí)間。
7.【檢驗(yàn)方法】
7.1試劑配制:描述方法步驟,配制后的保存條件和有效期,試劑的反復(fù)使用次數(shù),何種情況下即表明試劑變質(zhì),DAPI等致癌物的操作注意事項(xiàng)等。
7.2樣本處理及玻片制備:詳述低滲、固定、滴片、老化、預(yù)處理等步驟,應(yīng)與前期研究資料一致。不同樣本或玻片類型可能操作不同,應(yīng)分別予以描述。
7.3變性、雜交、洗滌、復(fù)染:詳述操作步驟,包括處理時(shí)間、溫度、注意事項(xiàng)等內(nèi)容。
7.4玻片儲(chǔ)存:說明在何種保存條件和時(shí)間內(nèi)熒光信號(hào)強(qiáng)度不受影響。
7.5觀察和結(jié)果分析:
描述可讀取樣本玻片,例如:探針雜交信號(hào)應(yīng)明亮、清晰、易分辨,背景應(yīng)為黑色,無(wú)點(diǎn)狀或朦朧熒光。
描述可讀取細(xì)胞,例如:細(xì)胞分布合理,無(wú)重疊,細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,邊界清晰等。
細(xì)胞計(jì)數(shù):計(jì)數(shù)一定數(shù)量的細(xì)胞核,調(diào)焦找到每個(gè)核內(nèi)的所有信號(hào)。明確正常信號(hào)和異常信號(hào)的特點(diǎn),可能涉及多種異常信號(hào),均應(yīng)詳細(xì)說明。建議采用文字結(jié)合圖示的方法明確對(duì)細(xì)胞和信號(hào)計(jì)數(shù)或不計(jì)數(shù)的規(guī)則,用列表的方式列舉結(jié)果觀察中遇到的問題、原因及解決方案。說明當(dāng)細(xì)胞核數(shù)量不足時(shí)的處理方式。
質(zhì)量控制:質(zhì)控品應(yīng)和樣本同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)的完成情況,并判斷信號(hào)計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。明確質(zhì)控品的使用頻率,對(duì)質(zhì)控品的判讀標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與樣本一致。如試劑盒中包含質(zhì)控品,應(yīng)介紹其樣本來源和結(jié)果信息;如試劑盒中不包含質(zhì)控品,應(yīng)明確配套使用的質(zhì)控品信息。明確各質(zhì)控品的結(jié)果要求和不符合要求時(shí)的處理措施。
8.【陽(yáng)性判斷值】:應(yīng)明確陽(yáng)性和/或陰性的全部信號(hào)類型及對(duì)應(yīng)的閾值,應(yīng)與陽(yáng)性判斷值確定資料一致。
9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】:按要求計(jì)數(shù)一定數(shù)量的細(xì)胞核后,根據(jù)陽(yáng)性判斷值,對(duì)結(jié)果做出正?;虍惓5慕忉尅?山Y(jié)合圖示的方式,對(duì)不同信號(hào)類型進(jìn)行解釋。明確何種結(jié)果需進(jìn)行擴(kuò)大計(jì)數(shù),或重新雜交,或判斷實(shí)驗(yàn)無(wú)效。
10.【檢驗(yàn)方法的局限性】
綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景和檢測(cè)方法等信息,對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明,主要包括以下描述,請(qǐng)申請(qǐng)人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。
10.1本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合其病史、危險(xiǎn)因素及其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果做出臨床診斷,不可僅憑本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果采取任何不可逆的治療措施。
10.2如果樣本污染/細(xì)胞數(shù)量不足/樣本玻片準(zhǔn)備不當(dāng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果將無(wú)效。
10.3描述本產(chǎn)品不能檢測(cè)的其他異常信號(hào)類型,例如罕見異常,其他染色體結(jié)構(gòu)異常、低水平嵌合等。
10.4描述本產(chǎn)品能夠檢測(cè)但不能區(qū)分的信號(hào)類型。
10.5指出具體樣本類型檢測(cè)中可能出現(xiàn)的影響因素,例如:產(chǎn)前染色體數(shù)目檢測(cè)試劑,在檢測(cè)絨毛膜樣本時(shí),可能因嵌合現(xiàn)象影響產(chǎn)品的可靠性。
11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
根據(jù)產(chǎn)品特征和分析性能評(píng)估資料,詳述以下性能指標(biāo):
11.1外觀:描述產(chǎn)品各成分的外觀狀態(tài)。
11.2探針敏感性:說明敏感性研究的細(xì)胞類型、試驗(yàn)方法及結(jié)果。
11.3探針特異性:說明特異性研究的細(xì)胞類型、試驗(yàn)方法及結(jié)果。
11.4陰、陽(yáng)性符合率:說明陰陽(yáng)性樣本信息和符合率結(jié)果。
11.5精密度:說明批內(nèi)、批間精密度及不同時(shí)間、地點(diǎn)和人員之間的精密度。
11.6最低檢出限:明確產(chǎn)品可以檢測(cè)的低比例嵌合水平下限。
11.7干擾物質(zhì):明確樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。
11.8臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)總結(jié)。
12.【注意事項(xiàng)】
12.1生物樣本的安全性警告。
12.2試劑的安全性警告。
12.3使用非說明書描述的配套試劑,可能會(huì)影響結(jié)果。
12.4未按照說明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)操作,會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生不良影響。
12.5所有涉及熒光染料的溶液/玻片儲(chǔ)存或操作均應(yīng)避光或在弱光下進(jìn)行。
12.6應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度,使用校準(zhǔn)過的溫度計(jì)測(cè)定溶液、水浴槽和溫箱溫度,或者定期校準(zhǔn)相關(guān)儀器。
三、名詞解釋
臨床參考標(biāo)準(zhǔn):現(xiàn)有條件下臨床上可獲得的能夠用來確定受試者目標(biāo)狀態(tài)(健康狀態(tài)、疾病狀態(tài)、疾病進(jìn)程、指導(dǎo)臨床處置的疾病或健康狀態(tài)等)的最佳方法,通常來自臨床和實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)學(xué)實(shí)踐,包括:現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)(如組織病理學(xué)檢查、影像學(xué)檢查、病原體分離培養(yǎng)鑒定、長(zhǎng)期隨訪所得的結(jié)論等),疾病診療指南中明確的疾病診斷方法,行業(yè)內(nèi)的專家共識(shí)或臨床上公認(rèn)的、合理的參考方法等。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)可能是一種方法,也可能是多種方法相結(jié)合。
四、編寫單位
國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。
站點(diǎn)聲明
本網(wǎng)站所提供的信息僅供參考之用,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn),也不代表本網(wǎng)對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)。圖片版權(quán)歸原作者所有,如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系我們,我們立刻刪除。如有關(guān)于作品內(nèi)容、版權(quán)或其它問題請(qǐng)于作品發(fā)表后的30日內(nèi)與本站聯(lián)系,本網(wǎng)將迅速給您回應(yīng)并做相關(guān)處理。
鄭州思途醫(yī)療科技有限公司專注于醫(yī)療器械產(chǎn)品政策與法規(guī)規(guī)事務(wù)服務(wù),提供產(chǎn)品注冊(cè)備案申報(bào)代理、臨床試驗(yàn)、體系建立輔導(dǎo)、分類界定、申請(qǐng)創(chuàng)新辦理服務(wù)。
行業(yè)資訊
?
?
?
?
?
?
知識(shí)分享
法規(guī)文件
?
?
?
?
?
?