電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2017年第213號)
發(fā)布日期:2017-12-22 閱讀量:次
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電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑
注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣四種測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫,同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。
本指導(dǎo)原則是對電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑的一般要求,申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。
本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件,不涉及注冊審批等行政事項,亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行,如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的,隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。
一、適用范圍
電解質(zhì)鉀、鈉、鈣測定試劑用于體外定量測定人體樣本中鉀離子、鈉離子、鈣離子的含量,臨床上主要用于鉀、鈉、鈣代謝紊亂的輔助診斷。電解質(zhì)氯測定試劑用于體外定量測定人體樣本中氯的含量,臨床上主要用于高氯血癥或低氯血癥的輔助診斷。
從方法學考慮,本指導(dǎo)原則中鉀、鈉、氯測定試劑主要指采用酶法原理,鈣測定試劑主要指采用偶氮砷Ⅲ法、鄰甲酚酞絡(luò)合銅法、甲基麝香草酚藍法原理。利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計,在醫(yī)學實驗室進行鉀離子、鈉離子、氯、鈣離子定量檢驗所使用的臨床化學體外診斷試劑。本文不適用于干式電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑。
依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號)、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》(食藥監(jiān)械管〔2013〕242號),電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑管理類別為二類,分類代碼為6840。
鉀濃度的測定方法目前主要為火焰光度法、離子選擇電極法和酶法測定。從方法學考慮,本指導(dǎo)原則僅適用酶法測定,反應(yīng)原理為利用鉀離子依賴性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)與二磷酸腺苷(ADP)反應(yīng)生成丙酮酸,丙酮酸在乳酸脫氫酶的催化下與NADH偶聯(lián)生成NAD+,通過在340nm處吸光度的變化,計算鉀離子濃度。
鈉濃度的測定方法目前主要為火焰光度法、離子選擇電極測定法和酶法測定。從方法學考慮,本指導(dǎo)原則僅適用酶法測定。反應(yīng)原理為利用鈉離子依賴的β-半乳糖苷酶催化鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷 (ONPG)底物生成產(chǎn)物鄰硝基酚(ONP)和半乳糖。其中生成的ONP在405nm的吸光度值上升與鈉離子濃度成正比,從而根據(jù)吸光度值的變化計算鈉離子的濃度。
氯濃度的測定方法目前主要為放射性核素稀釋法、硝酸汞滴定法、離子選擇電極法和酶法測定。從方法學考慮,本指導(dǎo)原則僅適用酶法測定,反應(yīng)原理為α-淀粉酶在氯離子的激活下,催化其底物如2-氯-4-硝基苯-半乳糖-a-D麥芽三糖苷(CNP-G3)(或其他α-淀粉酶的底物生產(chǎn)其相應(yīng)的產(chǎn)物),生成2-氯-4-硝基酚(CNP)2-氯-4-硝基酚在405nm附近有吸收峰,通過在405nm處吸光度的變化,計算氯離子濃度。
總鈣的測定方法有比色法(最常用的是鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、甲基麝香草酚藍法、偶氮砷Ⅲ法)、火焰光度法、原子吸收分光光度法、滴定法(氧化還原滴定法、絡(luò)合滴定法)、放射性核素稀釋質(zhì)譜法等。本指導(dǎo)原則適用于使用偶氮砷Ⅲ法、鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、甲基麝香草酚藍法的比色法測定,反應(yīng)原理如下:
1.偶氮砷Ⅲ法
在含有8-羥基喹啉-5-磺酸的反應(yīng)體系中,鎂離子被掩蔽,偶氮砷Ⅲ與鈣離子反應(yīng)形成紫色絡(luò)合物。
2.鄰甲酚酞絡(luò)合酮法
鄰甲酚酞絡(luò)合酮是金屬絡(luò)合指示劑,同時也是酸堿指示劑,在堿性溶液中與鈣及鎂鰲合,生成紫紅色鰲合物。作鈣測定時,在試劑中加入8-羥基喹啉以消除標本中鎂離子的干擾。
3.甲基麝香草酚藍法
血清中鈣離子在堿性溶液中與甲基麝香草酚藍結(jié)合,生成藍色的絡(luò)合物。加入適量的8-羥基喹啉,可消除鎂離子對測定的干擾,與同樣處理的鈣標準液進行比較,以求得血清總鈣的含量。
本指導(dǎo)原則不適用于:
(一)酶法原理之外的其他鉀、鈉、氯測定試劑。
(二)偶氮砷Ⅲ法、鄰甲酚酞絡(luò)合銅法、甲基麝香草酚藍法原理之外的其他鈣測定試劑。
二、注冊申報材料要求
(一)綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容,應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號)和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號)的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容:
1.產(chǎn)品預(yù)期用途及輔助診斷的臨床適應(yīng)證背景情況
(1)電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣的生物學特征、結(jié)構(gòu)與功能、在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。
(2)與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況,如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。
2.產(chǎn)品描述
包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理、主要原材料的來源、質(zhì)量控制及制備方法、主要生產(chǎn)工藝過程及關(guān)鍵控制點,質(zhì)控品、校準品的制備方法及溯源情況。
3.有關(guān)生物安全性方面的說明
如果體外診斷試劑中的主要原材料采用各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成,為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全,研究者應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。人源性材料須對有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等)病原體檢測予以說明,并提供相關(guān)的證明文件。
4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價
5.參考文獻
6.其他
包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況,相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況,申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。
(二)主要原材料的研究資料(如需提供)
主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標準及實驗驗證研究資料;質(zhì)控品(如產(chǎn)品包含)、校準品(如產(chǎn)品包含)的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料;校準品的溯源性文件,包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細資料。
(三)主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料(如需提供)
應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點、反應(yīng)原理介紹、確定反應(yīng)溫度、時間、緩沖體系比較等條件的研究資料、確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量的研究資料等。
(四)分析性能評估資料
應(yīng)至少包括具體的研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價,評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。
性能評估應(yīng)至少包括試劑空白、準確度、精密度、線性范圍、分析特異性(抗干擾能力)、其他影響檢測的因素等。
1.試劑空白
試劑空白包括試劑空白吸光度與試劑空白吸光度變化率(如適用)。在特定溫度、波長、光徑條件下,記錄測試啟動時的吸光度(A1)或約5min(t)后的吸光度(A2),A2測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值;計算出吸光度變化值(|A2-A1|/t)(t為測量時間間隔)即為試劑空白吸光度變化率。
2.準確度
對測量準確度的評價方法依次包括:相對偏差、回收試驗、比對試驗等方法。該研究項目已有相應(yīng)國家(國際)參考物質(zhì),優(yōu)先使用國家(國際)參考物質(zhì)進行驗證。
2.1相對偏差
使用參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)(CRM)作為樣本進行測試,重復(fù)測定3次,計算平均值與標示值的相對偏差。
或用由參考方法定值的高、低2個濃度的待測樣本對試劑盒進行測試,每個濃度樣本重復(fù)測定3次,分別取測試結(jié)果均值,計算相對偏差。
2.2回收試驗
在待測樣本中加入一定量的標準品或純品,每個濃度重復(fù)測定3次,計算回收率。
回收試驗注意事項:
2.2.1加入的溶液體積與待測樣本體積比應(yīng)不大于1:9或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化。
2.2.2加入溶液后樣本總濃度應(yīng)在試劑盒測定線性范圍內(nèi)。
2.2.3標準品或校準品應(yīng)有溯源性(建議使用第三方提供的參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)(CRM))。
2.3方法學比對
采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認可的已上市同類試劑作為參比方法,與擬申報試劑同時檢測一批待測樣本(至少40例樣本),從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi),說明兩檢測系統(tǒng)對樣本測定結(jié)果基本相符,對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋,擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。
在實施方法學比對前,應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估,只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學分析。其中,濃度分布應(yīng)覆蓋產(chǎn)品的可報告范圍。
3.精密度
測量精密度的評估應(yīng)至少包括正常范圍和病理范圍兩個濃度水平的樣本進行。
測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依,可根據(jù)不同的試劑特征或申請人的研究習慣進行,建議參考相關(guān)的美國臨床實驗室標準化協(xié)會批準指南(CLSI-EP)或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。
4.線性范圍
建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似,理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清/血漿,且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。
超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定,應(yīng)作相關(guān)研究,明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù),研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響,必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。
5.分析特異性
應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響:可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸、脂血、維生素C對檢測結(jié)果的影響進行評價,干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度,明確干擾物質(zhì)影響的最大濃度。藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。
6.分析靈敏度
用已知濃度的樣本進行測試,記錄在試劑(盒)規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為n單位吸光度差值(ΔA)或吸光度變化(ΔA/min)即為本產(chǎn)品的分析靈敏度。
7.其他需注意問題
7.1不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別評估,不同樣本類型、不同包裝規(guī)格應(yīng)分別進行分析性能評估。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異,需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明,具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。
分析性能評估報告應(yīng)明確所用儀器設(shè)備型號、試劑、校準品、質(zhì)控品等的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)名稱、產(chǎn)品批號等信息。
7.2校準品溯源及質(zhì)控品賦值
應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》的要求,提供企業(yè)(工作)校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度的研究資料,提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的研究資料。
(五)參考區(qū)間確定資料
提供參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料, 如可參考WS/T 404.3—2012《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間 第3部分:血清鉀、鈉、氯》。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。
(六)穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容,申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。這里主要指試劑的穩(wěn)定性,通常包括實時穩(wěn)定性(有效期)、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性等(各3個批次),如有需要可增加運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性研究等。申請人應(yīng)至少提供實時穩(wěn)定性和開瓶穩(wěn)定性、干粉試劑同時應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論,應(yīng)涵蓋產(chǎn)品中受穩(wěn)定性影響的性能指標(如準確度、線性范圍等)。
實時穩(wěn)定性研究,應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證,可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(溫度范圍),每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行性能的分析驗證,從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。
(七)臨床評價資料
根據(jù)《關(guān)于發(fā)布免于進行臨床試驗的第二類醫(yī)療器械目錄(第二批)的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2016年第133號)和《關(guān)于發(fā)布第三批免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第170號),電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑可免于臨床試驗。
申請人可依照《總局關(guān)于發(fā)布免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求(試行)的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號)開展評價。申請人如無法按要求對“目錄”中產(chǎn)品進行臨床評價,應(yīng)進行臨床試驗。
臨床試驗中的基本要求包括:
1.研究方法
選擇境內(nèi)已批準上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑,采用試驗用體外診斷試劑(以下稱待評試劑)與之進行對比試驗研究,證明本品與已上市產(chǎn)品等效。
2.臨床試驗機構(gòu)的選擇
至少應(yīng)當選定不少于2家(含2家)臨床試驗機構(gòu),臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)(試劑、質(zhì)控及操作程序等),熟悉評價方案。在整個實驗中,待評試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下,最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。
3.臨床試驗方案
臨床試驗實施前,研究人員應(yīng)從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮,設(shè)計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致,且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施,不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成,申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外,不得隨意干涉實驗進程,尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準,任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應(yīng)保持一致,以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外,待評試劑的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致,且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求,如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本,則應(yīng)采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。
開展體外診斷試劑臨床試驗,申請人應(yīng)當按照試驗用體外診斷試劑的類別、風險、預(yù)期用途等特性,組織制定科學、合理的臨床試驗方案。一般應(yīng)當包括以下內(nèi)容:
(1)一般信息(包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關(guān)信息、申請人相關(guān)信息等)。
(2)臨床試驗的背景資料。
(3)試驗?zāi)康摹?/p>
(4)試驗設(shè)計。
(5)評價方法。
(6)統(tǒng)計方法。
(7)對臨床試驗方案修正的規(guī)定。
(8)臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本(如有)。
(9)數(shù)據(jù)處理與記錄保存。
(10)其他需要說明的內(nèi)容。
4.研究對象選擇
臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標準時,應(yīng)考慮到不同人群的差異,盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時,建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。總體樣本數(shù)不少于200例,異常值樣本數(shù)不少于60例。
血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中,盡可能使用新鮮樣本,避免貯存。
申報的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗中進行驗證。如果聲稱同時適用于血清和血漿樣本,可完成一個樣本類型(血清或血漿)不少于200例的臨床研究,同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進行比對研究(采用考核試劑評價),其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。
如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項,臨床樣本總數(shù)至少為100例,并在至少兩家臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗;變更參考區(qū)間及增加臨床適應(yīng)證等變更事項,應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況,酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。
5.統(tǒng)計學分析
對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法,如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究,最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析,應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)(r值)或判定系數(shù)(R2)、回歸擬合方程(斜率和y軸截距)等指標。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況,建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析,統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè),即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。
6.結(jié)果差異樣本的驗證
對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本,應(yīng)采用“金標準”或其他合理的方法進行復(fù)核,以便對臨床試驗結(jié)果進行分析。如無需復(fù)核,應(yīng)詳細說明理由。
7.臨床試驗報告撰寫
根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號)的要求,臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述,應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述,并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。申請人或臨床試驗牽頭單位應(yīng)對各臨床試驗機構(gòu)的報告進行匯總,并完成臨床試驗總結(jié)報告。臨床試驗報告的格式及內(nèi)容如下:
7.1首篇
首篇是每份臨床試驗報告的第一部分,所有臨床試驗報告均應(yīng)包含該部分內(nèi)容。
7.1.1封面標題
包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者(簽名)、臨床試驗機構(gòu)(蓋章)、統(tǒng)計學負責人簽名及單位蓋章、申請人(蓋章)、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。
7.1.2目錄
列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應(yīng)頁碼。
7.1.3研究摘要
對臨床試驗情況進行簡單的介紹。
7.1.4試驗研究人員
列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責及其簡歷(列于附件中),主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人。
7.1.5縮略語
臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。
7.2正文內(nèi)容和報告格式
7.2.1基本內(nèi)容
引言:介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關(guān)的背景情況,包括(1)被測物的來源、生物及理化性質(zhì);(2)臨床預(yù)期使用目的,所針對的目標適應(yīng)證人群,目前針對該適應(yīng)證所采用的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等;(3)所采用的方法、原理、技術(shù)要求等;(4)國內(nèi)外已批準上市產(chǎn)品的應(yīng)用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構(gòu)間的合作關(guān)系。
7.2.2研究目的。
說明本臨床試驗所要達到的目的。
7.2.3試驗管理。
對試驗管理結(jié)構(gòu)的描述:管理結(jié)構(gòu)包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質(zhì)量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。
7.2.4試驗設(shè)計。
7.2.4.1試驗總體設(shè)計及方案的描述。
試驗的總體設(shè)計和方案的描述應(yīng)清晰、簡潔,必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應(yīng)詳細敘述。應(yīng)包括:
a.臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。
b.病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準。
c.樣本類型,樣本的收集、處理及保存等。
d.統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。
7.2.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇。
試驗設(shè)計中應(yīng)包括以下內(nèi)容:
a.樣本量及樣本量確定的依據(jù)。
b.樣本選擇依據(jù)、入選標準、排除標準和剔除標準。
c.樣本采集、保存、運輸方法等。
d.對比試劑的確立。
e.臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件,對比試劑的注冊情況??己嗽噭┖蛥⒈仍噭┑拿Q、批號、有效期及所用機型等信息。
f.質(zhì)量控制方法:對質(zhì)量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況,對檢測精密度、質(zhì)控品回收(或測量值)、抽查結(jié)果評估。
g.臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法:
對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合,建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。
數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。
定量值相關(guān)性和一致性分析:用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性,以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程,其中:y是考核試劑結(jié)果,x是參比試劑結(jié)果,b是方程斜率,a是y軸截距,R2是判定系數(shù),同時應(yīng)給出b的95%(或99%)置信區(qū)間,定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學差異。
h.具體試驗過程,樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。
i.試驗過程中方案的修改。
一般情況下,臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應(yīng)說明,對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結(jié)果評價的影響。
7.2.5臨床試驗結(jié)果及分析。
7.2.6討論和結(jié)論。對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果,對本次臨床研究有無特別說明,最后得出臨床試驗結(jié)論。
7.3有關(guān)臨床試驗中特別情況的說明
7.4附件
7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息,如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準情況。
7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù),需由臨床試驗操作者、復(fù)核者簽字,臨床試驗機構(gòu)蓋章(封面蓋章和騎縫章)。
7.4.3主要參考文獻。
7.4.4主要研究者簡歷。
7.4.5申請人需要說明的其他情況等。
(八)產(chǎn)品風險分析研究資料
申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié),從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析,應(yīng)符合YY/T 0316/ISO 14971《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求(最新版本適用)。
(九)產(chǎn)品技術(shù)要求
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號)、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號)和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號)的相關(guān)要求。
該產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的引用文件和主要性能指標等相關(guān)內(nèi)容如下:
1.產(chǎn)品適用的標準(最新版本適用)
(1)GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》
(2)GB/T 191《包裝儲運圖示標志》
(3)GB/T 26124《臨床化學體外診斷試劑(盒)》
(4)YY/T 0316《醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》
(5)YY/T 0466.1《醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號 第1部分:通用要求》
(6)YY/T 1202《鉀測定試劑盒(酶法)》
(7)YY/T 1203《鈉測定試劑盒(酶法)》
(8)YY/T 1229《鈣測定試劑(盒)》
(9)YY/T 1196《氯測定試劑盒(酶法)》
2.主要性能指標
2.1鉀測定試劑盒(酶法)主要性能指標
2.1.1外觀
應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。
2.1.2裝量
試劑裝量應(yīng)不少于標示裝量或規(guī)定限。
2.1.3試劑空白
2.1.3.1試劑空白吸光度
在37℃、340nm、1cm光徑條件下,試劑空白吸光度應(yīng)不小于1.0。
2.1.3.2試劑空白吸光度變化率
在37℃、340nm、1cm光徑條件下,試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)應(yīng)不大于0.200。
2.1.4分析靈敏度
用已知濃度的樣本測試試劑,記錄試劑在37℃、340nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度,應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。
2.1.5線性區(qū)間
試劑線性范圍應(yīng)覆蓋濃度2.5mmol/L~7mmol/L區(qū)間。
2.1.5.1線性相關(guān)系數(shù)(r)應(yīng)不小于0.9900。
2.1.5.2線性相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。
用接近線性區(qū)間下限的低濃度(活性)樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度(活性)樣本,混合成至少5個有效稀釋濃度(xi),分別測試試劑,每個稀釋濃度測試1—3次,分別求出測定結(jié)果的均值(yi)。以稀釋濃度(xi)為自變量,以測定結(jié)果均值(yi)為因變量求出線性回歸方程。按公式(1)計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)(r)。
稀釋濃度(xi)代入線性回歸方程,計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差。
2.1.6精密度
2.1.6.1重復(fù)性
用同批號的試劑盒對高低值樣本(分為正常范圍和病理范圍),重復(fù)測試至少10次,分別計算測量值的平均值()和標準差(SD)。計算變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于5.0%。
2.1.6.2批內(nèi)瓶間差(適用于干粉或凍干試劑)
用高低值樣本分別測試同一批號的20個待檢試劑(盒),并計算20個測量值的平均值(x1)和標準差(SD1)。
用高低值樣本對該批號的1個待檢試劑(盒)重復(fù)測試20次,計算結(jié)果的均值(x2)和標準差(SD2)。按式(2)、式(3)計算瓶間差的變異系數(shù)(CV),批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5.0%。
當s1<s2時,令CV=0
2.1.6.3批間差
用同一份樣本分別測試3個不同批號的試劑,每個批號測試3次,分別計算每批3次測定的均值(i=1,2,3),按公式(4)、(5)計算相對極差(R)。
式中:
試劑批間差應(yīng)不大于10.0%。
2.1.7準確度
可選用以下方法進行驗證,優(yōu)先采用相對偏差的方法。
2.1.7.1相對偏差:相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。
用參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)(CRM)對試劑(盒)進行測試,重復(fù)檢測3次,取測試結(jié)果均值(M)按式(6)計算相對偏差(B)。
或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清/血漿樣本(可參照EP6-A的要求適當添加被測物,以獲得高濃度的樣本)對試劑盒進行測試,每個濃度樣本重復(fù)測定3次,分別取測試結(jié)果均值,按式(6)計算相對偏差(B)。
式中:
B—相對偏差;
M—測試結(jié)果均值;
T—有證參考物質(zhì)標示值,或各濃度人源樣本定值。
2.1.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液(標準溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化,加入標準溶液后樣本總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi))或純品,回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行,回收率應(yīng)在90%—110%之間。
2.1.7.3比對試驗:相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900,相對偏差應(yīng)不超過企業(yè)聲稱的要求。
參照CLSL EP9—A2的方法,用不少于40個在檢測范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本,用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法,每份樣本按待測試劑操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及相對偏差。
2.1.8穩(wěn)定性
可選用以下方法之一進行驗證:
2.1.8.1效期穩(wěn)定性:生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測,試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
2.1.8.2熱穩(wěn)定性試驗:
按要求熱處理后的樣品檢測,試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
注1:熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期,除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。
注2:根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇2.1.8.1、2.1.8.2方法的任意組合,但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性,以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。
凍干品應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗,產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性技術(shù)要求。
2.1.9校準品和質(zhì)控品的性能指標(如產(chǎn)品中包含)
應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。
2.2 鈉測定試劑盒(酶法)主要性能指標
2.2.1外觀
應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。
2.2.2裝量
試劑裝量應(yīng)不少于標示裝量或規(guī)定限。
2.2.3試劑空白
2.2.3.1試劑空白吸光度
在37℃、405nm、1cm光徑條件下,試劑空白吸光度應(yīng)不大于1.0。
2.2.3.2試劑空白吸光度變化率
在37℃、405nm、1cm光徑條件下,試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)應(yīng)不大于0.500。
2.2.4分析靈敏度
用已知濃度的樣本測試試劑,記錄在試劑在37℃、405nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度,應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。
2.2.5線性區(qū)間
試劑線性應(yīng)覆蓋樣本濃度90 mmol/L~160mmol/L 區(qū)間;
2.2.5.1線性相關(guān)系數(shù)(r)應(yīng)不小于0.9900;
2.2.5.2線性相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。
用接近線性區(qū)間下限的低濃度(活性)樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度(活性)樣本,混合成至少5個有效稀釋濃度(xi),分別測試試劑,每個稀釋濃度測試1-3次,分別求出測定結(jié)果的均值(yi)。以稀釋濃度(xi)為自變量,以測定結(jié)果均值(yi)為因變量求出線性回歸方程。按公式(1)計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)(r)。
稀釋濃度(xi)代入線性回歸方程,計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差。
2.2.6精密度
2.2.6.1重復(fù)性
用同批號的試劑盒對高低值樣本(分為正常范圍和病理范圍),重復(fù)測試至少10次,分別計算測量值的平均值()和標準差(SD)。計算變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于5.0%。
2.2.6.2批內(nèi)瓶間差(適用于干粉或凍干試劑)
用高低值樣本分別測試同一批號的20個待檢試劑,并計算20個測量值的平均值(1)和標準差(SD1)。
用高低值樣本對該批號的1個待檢試劑重復(fù)測試20次,計算結(jié)果的均值(2)和標準差(SD2)。按式(2)、式(3)計算瓶間差的變異系數(shù)(CV),批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5.0%。
當s1<s2時,令CV=0
2.2.6.3批間差
用同一份樣本分別測試3個不同批號的試劑,每個批號測試3次,分別計算每批3次測定的均值(i=1,2,3),按公式(4)、(5)計算相對極差(R)。
式中:
試劑批間差應(yīng)不大于10.0%。
2.2.7準確度
可選用以下方法進行驗證;優(yōu)先采用相對偏差的方法。
2.2.7.1相對偏差:相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。
用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)(CRM)對試劑進行測試,重復(fù)檢測3次,取測試結(jié)果均值(M)按式(6)計算相對偏差(B)。
或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清/血漿樣本(可參照EP6-A的要求適當添加被測物,以獲得高濃度的樣本)對試劑盒進行測試,每個濃度樣本重復(fù)測定3次,分別取測試結(jié)果均值,按式(6)計算相對偏差(B)。
式中:
B–相對偏差;
M–測試結(jié)果均值;
T–有證參考物質(zhì)標示值,或各濃度人源樣本定值。
2.2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液(標準溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化,加入標準溶液后樣本總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi))或純品,回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行,回收率應(yīng)在90%—110%之間。
2.2.7.3比對試驗:相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900,相對偏差應(yīng)不超過企業(yè)聲稱的要求。
參照CLSL EP9—A2的方法,用不少于40個在檢測范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本,用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法,每份樣本按待測試劑操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及相對偏差。
2.2.8穩(wěn)定性
可選用以下方法之一進行驗證:
2.2.8.1效期穩(wěn)定性:生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測,試劑外觀,空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
2.2.8.2熱穩(wěn)定性試驗:
按要求熱處理后的樣品檢測,試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
注1:熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期,除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。
注2:根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇2.2.8.1、2.2.8.2方法的任意組合,但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性,以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。
凍干品應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗,產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性技術(shù)要求。
2.2.9校準品和質(zhì)控品的性能指標(如產(chǎn)品中包含)
應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。
2.3 鈣測定試劑主要性能指標
2.3.1外觀
應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。
2.3.2裝量
試劑裝量應(yīng)不少于標示值。
2.3.3試劑空白吸光度
用試劑測試生理鹽水,記錄試劑參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點主波長下的吸光度值,應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的要求。
2.3.4分析靈敏度
用試劑盒測試已知濃度在(2.50±0.5)mmol/L的樣本,記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下的吸光度或吸光度差值,換算為2.50mmol/L樣本的吸光度或吸光度差值,應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的要求。
2.3.5線性區(qū)間
測試血清樣本,鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、甲基麝香草酚藍法試劑線性在【1.00,3.75】mmol/L區(qū)間內(nèi),偶氮砷Ⅲ法試劑線性在【1.00,4.00】mmol/L區(qū)間:
線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.990
在線性區(qū)間內(nèi),線性偏差應(yīng)不超過±10.0%
用接近線性區(qū)間下限的低濃度樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度樣本,混合成6個稀釋濃度(xi),分別測試試劑,每個稀釋濃度測試3次,分別求出每個稀釋濃度檢測結(jié)果的均值(yi)。以xi為自變量,以yi為因變量求出線性回歸方程。計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)r。
稀釋濃度(xi)代入線性回歸方程,計算yi測試均值與相應(yīng)估計值的相對偏差。
2.3.6精密度
2.3.6.1重復(fù)性
在重復(fù)性條件下,測試濃度在(2.5±0.5)mmol/L的控制血清,重復(fù)測試10次,計算測量值的平均值()和標準差(SD)。計算變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于3%。
2.3.6.2批間差
分別用3個不同批號的試劑測試濃度在(2.5±0.5)mmol/L的控制血清,每個批號測試3次,分別計算每批3次測定的均值 (i=1,2,3),按以下公式計算相對極差(R)。
試劑批間相對極差應(yīng)不大于5%。
2.3.7準確度
相對偏差:相對偏差應(yīng)不超過±5.0%
試劑測試可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)(CRM)3次,測試結(jié)果記為(xi),按式(6)分別計算相對偏差(Bi),3次結(jié)果相對偏差均應(yīng)不超過±5.0%;如果3次結(jié)果中有1次不符合要求,應(yīng)重新連續(xù)測試20次,并分別按照式(6)計算相對偏差(Bi),當大于等于19次結(jié)果的相對偏差不超過±5.0%,準確度被驗證符合要求。
式中:
xi–測試結(jié)果。
T–有證參考物質(zhì)標示值。
2.3.8穩(wěn)定性
可選用以下方法之一進行驗證:
2.3.8.1效期穩(wěn)定性:生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測,試劑外觀、空白吸光度、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
2.3.8.2熱穩(wěn)定性試驗:按要求熱處理后的樣品檢測,試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
注1:熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期,除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。
注2:根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇2.3.8.1、2.3.8.2方法的任意組合,但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性,以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。
凍干品應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗,產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性技術(shù)要求。
2.3.9校準品和質(zhì)控品的性能指標(如產(chǎn)品中包含)
應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。
2.4氯測定試劑盒主要性能
2.4.1外觀
應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。
2.4.2裝量
試劑裝量應(yīng)不少于標示裝量或規(guī)定限。
2.4.3試劑空白
2.4.3.1試劑空白吸光度
在37℃、405nm、1cm光徑條件下,試劑空白吸光度應(yīng)不大于1.0。
2.4.3.2試劑空白吸光度變化率
在37℃、405nm、1cm光徑條件下,試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)應(yīng)不大于0.300。
2.4.4分析靈敏度
用已知濃度的樣本測試試劑,記錄在試劑在37℃、405nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度,應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。
2.4.5線性區(qū)間
試劑線性應(yīng)覆蓋樣本濃度60mmol/L~140mmol/L區(qū)間;
2.4.5.1線性相關(guān)系數(shù)(r)應(yīng)不小于0.9900;
2.4.5.2線性相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。
用接近線性區(qū)間下限的低濃度(活性)樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度(活性)樣本,混合成至少5個有效稀釋濃度(xi),分別測試試劑,每個稀釋濃度測試1—3次,分別求出測定結(jié)果的均值(yi)。以稀釋濃度(xi)為自變量,以測定結(jié)果均值(yi)為因變量求出線性回歸方程。按公式(1)計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)(r)。
稀釋濃度(xi)代入線性回歸方程,計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差。
2.4.6精密度
2.4.6.1重復(fù)性
用同批號的試劑盒對高低值樣本(分為正常范圍和病理范圍),重復(fù)測試至少10次,分別計算測量值的平均值(x)和標準差(SD)。計算變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于5.0%。
2.4.6.2批內(nèi)瓶間差(適用于干粉或凍干試劑)
用高低值樣本分別測試同一批號的20個待檢試劑,并計算20個測量值的平均值(1)和標準差(SD1)。
用高低值樣本對該批號的1個待檢試劑重復(fù)測試20次,計算結(jié)果的均值(2)和標準差(SD2)。按式(2)、式(3)計算瓶間差的變異系數(shù)(CV),批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5.0%。
當s1<s2時,令CV=0
2.4.6.3批間差
用同一份樣本 分別測試3個不同批號的試劑,每個批號測試3次,分別計算每批3次測定的均值(i=1,2,3),按公式(4)、(5)計算相對極差(R)。
試劑批間差應(yīng)不大于10.0%。
2.4.7準確度
可選用以下方法進行驗證;優(yōu)先采用相對偏差的方法。
2.4.7.1相對偏差:相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。
用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)(CRM)對試劑進行測試,重復(fù)檢測3次,取測試結(jié)果均值(M)按式(6)計算相對偏差(B)。
或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清/血漿樣本(可參照EP6-A的要求適當添加被測物,以獲得高濃度的樣本)對試劑盒進行測試,每個濃度樣本重復(fù)測定3次,分別取測試結(jié)果均值,按式(6)計算相對偏差(B)。
式中:
B–相對偏差;
M–測試結(jié)果均值;
T–有證參考物質(zhì)標示值,或各濃度人源樣本定值。
2.4.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液(標準溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化,加入標準溶液后樣本總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi))或純品,回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行,回收率應(yīng)在90%—110%之間。
2.4.7.3比對試驗:相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900,相對偏差應(yīng)不超過企業(yè)聲稱的要求。
參照CLSL EP9-A2的方法,用不少于40個在檢測范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本,用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法,每份樣本按待測試劑操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及相對偏差。
2.4.8穩(wěn)定性
可選用以下方法之一進行驗證:
2.4.8.1效期穩(wěn)定性:生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣本檢測,試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
2.4.8.2熱穩(wěn)定性試驗:
按要求熱處理后的樣品檢測,試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。
注1:熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期,除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。
注2:根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇a)、b)方法的任意組合,但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性,以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。
凍干品應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗,產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復(fù)性技術(shù)要求。
2.4.9校準品和質(zhì)控品的性能指標(如產(chǎn)品中包含)
應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。
(十)產(chǎn)品注冊檢驗報告
首次申請注冊的電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑,應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行注冊檢驗,出具注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。
(十一)產(chǎn)品說明書
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息,是指導(dǎo)使用人員正確操作、臨床醫(yī)生準確理解和合理應(yīng)用試驗結(jié)果的重要技術(shù)性文件。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014第17號)的要求。下面對說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明。
1.【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:鉀/鈉/鈣/氯測定試劑盒(方法學)
2.【包裝規(guī)格】
注明可測試的樣本數(shù)或裝量,如××測試/盒、××人份/盒、××mL,除國際通用計量單位外,其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進行表述。如產(chǎn)品有不同組分,可以寫明組分名稱。如有貨號,可增加貨號信息。
(1)包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型。
(2)不得多于技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格。
(3)如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型,應(yīng)同時明確適用機型。
3.【預(yù)期用途】
應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容:
(1)鉀/鈉/鈣/氯測定試劑用于體外定量測定人樣本中鉀/鈉/鈣/氯的濃度。
(2)應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況。鉀/鈉/鈣/氯異常情況常見于哪些疾病,其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋。
作為支持性資料,申請人應(yīng)提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關(guān)臨床適應(yīng)證背景的資料。
4.【檢驗原理】
應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法,必要時可采取圖示方法表示。
如:利用鉀離子依賴性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)與二磷酸腺苷(ADP)反應(yīng)生成丙酮酸,丙酮酸在乳酸脫氫酶的催化下與NADH偶聯(lián)生成NAD+,在340nm處觀察到的吸光度變化值跟鉀離子濃度成正比,從而計算出鉀離子濃度。
反應(yīng)式如下:
如:利用鈉離子依賴的β-半乳糖苷酶催化底物鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)(又名鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷)水解,生成產(chǎn)物鄰硝基酚(ONP)和半乳糖。其中生成的鄰硝基酚在405nm附近的吸光度值上升與鈉離子濃度成正比,從而根據(jù)吸光度值的變化計算鈉離子的濃度。
反應(yīng)式如下:
MTB:甲基麝香草酚藍絡(luò)合劑
甲基麝香草酚藍在堿性條件下與鈣離子形成穩(wěn)定的有色絡(luò)合物,在波長612nm處,其吸光度與樣本中鈣含量成正比。
如:α-淀粉酶在氯離子的激活下,水解底物2-氯-4-硝基苯-半乳糖-a-D麥芽三糖苷(CNP-G3)生成2-氯-4-硝基酚(CNP)和麥芽三糖(G3),CNP在405nm附近有吸收峰。在一定的氯離子濃度范圍內(nèi),2-氯-4-硝基酚的生成速率與氯離子的濃度成正比。所以可以通過監(jiān)測405nm吸光度變化值計算樣本中的氯離子濃度。
反應(yīng)式如下:
5.【主要組成成分】
應(yīng)明確以下內(nèi)容:
試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度。
如檢測中需使用校準品或質(zhì)控品,應(yīng)明確說明,并提供校準品溯源性,溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別,包括標準物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號,質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍等。
試劑盒如果配備校準品,需注明校準品定值信息及溯源性(量值最終溯源至國際參考物質(zhì)或國家參考物質(zhì)GBW或其他有證參考物質(zhì),應(yīng)注明參考物質(zhì)編號)。試劑盒如果配備質(zhì)控品,需注明質(zhì)控品靶值范圍。
6.【儲存條件及有效期】
(1)應(yīng)明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期,開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。
(2)說明產(chǎn)品的儲存條件,如:2~8℃、避免/禁止冷凍或-18℃以下等。其他影響穩(wěn)定性的條件,如:光線、濕度等也必須說明。
(3)如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致,則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。
7.【適用儀器】
說明可適用的儀器及型號,并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用。
8.【樣本要求】
重點明確以下內(nèi)容:
樣本類型、為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等、保存期限及保存條件(短期、長期),能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法、已知的干擾物等。如有血漿樣本,應(yīng)注明對抗凝劑的要求。特殊體液標本還應(yīng)詳細描述對采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結(jié)果的要求。
9.【檢驗方法】
詳細說明試驗操作的各個步驟,包括:
(1)試劑配制方法、注意事項。
(2)試驗條件:溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項。
(3)校準程序(如果需要):校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。
(4)質(zhì)量控制程序:質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。
(5)檢驗結(jié)果的計算:應(yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能,應(yīng)舉例說明。
如果超出線性范圍,樣本需要稀釋測定時,應(yīng)根據(jù)試劑特性說明稀釋液的種類及最大稀釋倍數(shù)。
10.【參考區(qū)間】
應(yīng)注明常用樣本類型及反應(yīng)方式的參考區(qū)間,并說明參考區(qū)間確定方法。注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異,建議各實驗室建立自己的參考值(范圍)”。
血漿鉀比血清鉀結(jié)果低0.1—0.7mmol/L,由于血液體外凝固時血小板破裂會釋放出一部分鉀,如果產(chǎn)品可以檢測兩種不同的樣本類型,應(yīng)分別注明兩個不同參考范圍。
11.【檢驗結(jié)果的解釋】
說明可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。說明在何種情況下需要進行確認試驗。
12.【檢驗方法的局限性】
說明該檢驗方法的局限性,如:存在的干擾因素,明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對測定的影響,同時列出干擾物的具體濃度。
13.【產(chǎn)品性能指標】
至少應(yīng)詳述以下性能指標,性能指標應(yīng)不低于標準有關(guān)技術(shù)指標的要求。
(1)試劑空白吸光度和/或試劑空白吸光度變化率。
(2)分析靈敏度。
(3)準確度。
(4)精密度(重復(fù)性和批間差)。
(5)線性區(qū)間(線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差)。
14.【注意事項】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容:
(1)本試劑盒僅供體外檢測使用,試劑中含有的化學成分應(yīng)說明接觸人體后產(chǎn)生不良的影響后果。
(2)有關(guān)人源組分的警告(如適用),如:試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準品或其他人源組分,雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab、TP等項目的檢測,但截至目前,沒有任何一項檢測可以確保絕對安全,故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。
(3)試劑盒的使用說明書中對試劑盒的操作環(huán)境、人員保護應(yīng)有詳細的說明。由于試劑盒的檢測對象為人血清樣本,可能帶有致病病原體,所以應(yīng)按傳染病實驗室要求操作。
(4)溶血或延遲分離血清均可使血清鉀濃度增高,應(yīng)及時分離血清,置于具塞試管內(nèi)冰箱保存。若遇標本溶血,應(yīng)在報告單上注明,以便于臨床醫(yī)生對結(jié)果的解釋。
(5)許多生化試劑中含有鈉離子,在做測定時,注意分析儀通道間的交叉污染。鈉鉀聯(lián)合測定時,應(yīng)將鉀編排在鈉以前。
(6)取血后應(yīng)迅速將血漿或血清分離,以免因血中HCO3-與紅細胞內(nèi)氯離子發(fā)生轉(zhuǎn)移而使氯化物測定結(jié)果偏高。
(7)其他有關(guān)鉀/鈉/鈣/氯測定的注意事項。
15.【標識的解釋】
如有圖形或符號,請解釋其代表的意義。
16.【參考文獻】
應(yīng)當注明在編制說明書時所引用的參考文獻。
17.【基本信息】
符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號)對基本信息的要求。
18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】
產(chǎn)品的注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號
19.【說明書核準日期及修改日期】
注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請,還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。
三、審查關(guān)注點
(一)臨床研究用參比試劑和第三方確認試劑的預(yù)期用途應(yīng)與申請產(chǎn)品預(yù)期用途一致。申報樣本類型應(yīng)在臨床研究中進行驗證。
(二)審查產(chǎn)品技術(shù)要求時應(yīng)注意產(chǎn)品應(yīng)不低于YY/T 1202鉀測定試劑盒(酶法)、YY/T 1203 鈉測定試劑盒(酶法)、YY/T 1229鈣測定試劑(盒)、YY/T 1196氯測定試劑盒(酶法)的有關(guān)規(guī)定。
(三)說明書中預(yù)期用途(樣本類型)、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。
(四)干粉試劑應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料并在說明書儲存條件及有效期中說明。
四、編寫單位
上海食品藥品監(jiān)督管理局認證審評中心。
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