附件：布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑注冊審查指導原則（2024年第1號）.doc

布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑
注冊審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供依據(jù)。

本指導原則是對布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是對申請人和審評人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導原則適用于布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑。是指基于抗原抗體反應原理，采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法或化學發(fā)光法等檢測技術(shù)，對來源于血清、血漿或全血等人體樣本中的布魯氏菌IgM/IgG抗體進行體外定性檢測的試劑。預期用途為布魯氏菌感染的輔助診斷。布魯氏菌的生物學特征，相關(guān)疾病的臨床適應證背景以及相關(guān)的實驗室檢查方法等背景信息見附件。

本指導原則適用于布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申請和變更申請的情形。本指導原則僅針對布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報資料中的部分內(nèi)容進行撰寫，其他未盡事宜應當符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1. 產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。建議申請人對以下幾方面內(nèi)容進行著重介紹：

1.臨床適應證背景情況

描述布魯氏菌的生物學特征、流行病學特征、抗體的分布情況（濃度水平、產(chǎn)生和消失的時間等）、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)和相關(guān)疾病、現(xiàn)有的臨床診斷方法或其他實驗室檢查方法等。

2.同類產(chǎn)品上市情況

從技術(shù)方法及預期用途等方面寫明申報產(chǎn)品與現(xiàn)行臨床診斷方法以及目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要異同點。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

1.1產(chǎn)品技術(shù)要求

注冊申請人應當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應當以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

如有適用的國家標準、行業(yè)標準，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應不低于相應的要求。

1.2產(chǎn)品檢驗報告

布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑尚無國家標準品，技術(shù)要求中應體現(xiàn)企業(yè)參考品的相關(guān)要求，并使用企業(yè)參考品對三批產(chǎn)品進行檢驗。

2. 分析性能研究

注冊申請人應采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交采用不同機型進行性能評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進行分析或驗證。

適用的不同樣本類型應分別進行分析性能研究。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集保存運輸和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的布魯氏菌IgM/IgG抗體陽性樣本，應采用科學合理的方法確定其陰陽性和濃度水平，提交具體的試驗資料。分析性能評估用樣本一般應為真實樣本，如涉及稀釋后檢測，應采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。對于各項性能中采用的樣本，在下述各項性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性研究應采用臨床真實樣本進行，通常應當至少包含一定數(shù)量陰性樣本及弱陽性樣本，考察樣本在經(jīng)歷不同的儲存條件后，試劑能否穩(wěn)定輸出符合要求的結(jié)果。樣本穩(wěn)定性可以包含樣本凍融穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性的研究。

2.2適用的樣本類型

描述適用的樣本類型，如：血清、血漿或全血等，血漿和全血需考察不同抗凝劑的適用性。

如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗證樣本的可比性。

如產(chǎn)品適用于全血，可采用該樣本類型進行全性能評估，亦可至少進行檢出限、不同區(qū)域樣本的包容性和精密度研究。

2.3校準品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

描述校準品的量值溯源（如適用）。

描述質(zhì)控品的賦值（如適用）。需至少采用三批產(chǎn)品分別在不同適用機型進行賦值研究。

2.4精密度

應對精密度指標，如標準差或變異系數(shù)等的評價標準做出合理要求。精密度研究應采用臨床樣本。

應考慮運行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響精密度的條件，設計合理的精密度試驗方案進行評價。

設定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測，具體方案可參考性能評價相關(guān)文件進行。

用于精密度評價的臨床樣本應至少包含3個水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、（中或強）陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設定適當?shù)木芏纫蟆?/p>

陰性樣本：待測物濃度低于檢出限或為零濃度，陰性檢出率應為100%（n≥20）。

臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽性檢出率應≥95%（n≥20）。

中陽性樣本：待測物濃度呈中等陽性，陽性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。

強陽性樣本：待測物濃度呈強陽性，陽性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。

2.5包容性

提供具有時間和區(qū)域特征性的不同來源的患者真實臨床樣本進行驗證，應包括羊種、牛種、豬種布魯氏菌感染的情況。IgM抗體、IgG抗體檢測試劑分別研究，驗證內(nèi)容應包括檢出限、重復性等，提供樣本及濃度的確認方法、試驗數(shù)據(jù)。其中應注意，包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復。

2.6檢出限

檢出限的確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽性樣本梯度稀釋進行檢出限確定，每個梯度的稀釋液重復3～5份，每份稀釋液重復檢測不少于20次，將具有95%陽性檢出率的抗體水平作為檢出限。

IgM抗體、IgG抗體檢測試劑應分別選擇不同來源具有代表性的3個臨床樣本進行檢出限的確定。

檢出限的驗證：選擇具有時間和區(qū)域特征性的至少3個臨床樣本（與檢出限確定不同樣本）在檢出限濃度水平進行驗證，應達到95%陽性檢出率。

采用的稀釋液應與適用樣本類型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進行稀釋?？贵w檢測試劑應提供詳細的抗體類型和滴度的確認方法及驗證結(jié)果。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應驗證（IgM抗體、IgG抗體檢測試劑應分別驗證）

用于交叉反應驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結(jié)構(gòu)具有同源性（如在分類學上的近緣菌）、易引起相同或相似的臨床癥狀（如胞內(nèi)感染菌）、易并發(fā)感染的其他微生物（見表1），以及低濃度病原體特異性IgG抗體與高濃度特異性IgM抗體以及高濃度病原體特異性IgG抗體與低濃度特異性IgM抗體的交叉反應驗證。

提供所有用于交叉反應驗證的病原體抗體陽性樣本的來源、和濃度/滴度確認等詳細的試驗資料。

驗證不少于30份在布魯氏菌病高發(fā)地區(qū)的正常健康人樣本。

2.7.2內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾

不同樣本類型其潛在干擾物質(zhì)可能不同，應根據(jù)具體采集的樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進行研究（見表2）。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價，在抗體臨界陽性水平進行干擾試驗驗證。

2.8 高劑量鉤狀效應

申請人應評估高劑量鉤狀效應并提交研究資料。

2.9 IgM抗體破壞試驗（IgM抗體檢測試劑適用）

對至少5份含有病原體特異性IgM抗體的樣本進行IgM破壞試驗研究，方法為采用特定的化學制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進行檢測，IgM檢測結(jié)果應為陰性。

2.10企業(yè)參考品性能

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進行檢驗并提供詳細的試驗數(shù)據(jù)。

2.11反應體系研究

2.11.1研究樣本采集時間點的選擇：是否受病程、臨床癥狀等因素的影響。

2.11.2反應條件確定

申請人應考慮反應時間、判讀時間、反應溫度/濕度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

2.11.3反應體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過試驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進行研究。對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結(jié)果的影響，合理設置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟，以降低特異性IgG可能造成的假陰性和假陽性。

3.穩(wěn)定性研究

一般應包含研究方案，采用的樣本、儀器和試劑信息，數(shù)據(jù)（如檢驗結(jié)果、溫度記錄等）及試驗結(jié)果等。

3.1實時穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

3.2使用穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時提交復溶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準品，還應提交校準頻率或校準穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

3.3運輸穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品可在特定或者預期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。注意應考察經(jīng)過運輸條件后實時穩(wěn)定性。

4.陽性判斷值研究

提交對申報試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off，CO）確定的研究資料，包括具體的試驗方案、人群樣本選擇、評價標準、統(tǒng)計學分析和研究數(shù)據(jù)等。確定陽性判斷值使用的樣本來源的選擇應考慮如下因素的影響：

4.1不同地理區(qū)域流行病學背景的差異：高危人群（包括牧區(qū)和相關(guān)職業(yè)）和普通人群。

4.2患者處于不同的感染階段：急性期、亞急性期和慢性期，首次感染與復發(fā)感染。

申請人應根據(jù)具體情況選擇適當?shù)姆椒?，如受試者工作特征曲線（ROC）的分析方式，來確定合理的陽性判斷值。若試驗結(jié)果存在灰區(qū)，則應明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。應重點考察對弱陽性樣本的區(qū)分能力，研究中應包含有統(tǒng)計學意義的弱陽性樣本例數(shù)。

提交陽性判斷值所用樣本信息列表，至少包括性別、年齡、動物或其制品接觸史（如適用）、發(fā)病天數(shù)（如適用）、臨床診斷信息、樣本來源機構(gòu)、抗體檢測結(jié)果等。陽性判斷值研究用樣本不應與臨床試驗樣本重復。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對所有樣本類型進行陽性判斷值的驗證。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

5.1.1布魯氏菌抗體檢測試劑所用特異性抗原

病原體特異的抗原是該類產(chǎn)品的關(guān)鍵原材料。在選擇抗原原料時，應注重抗原表位的選擇，避免菌種間差異造成的假陰性，亦應考慮抗原在其他近緣菌的表達情況，避免存在交叉反應出現(xiàn)假陽性。原材料研究資料中應詳述該方面的考慮。

首先應詳述抗原表位及選擇依據(jù)，此外應提交抗原來源、制備、篩選、純化、鑒定及質(zhì)量標準（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗等）詳細試驗資料。

主要包括以下兩種情況：

5.1.1.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應對毒株選擇、培養(yǎng)、抗原提取、純化、鑒定等試驗過程予以詳述。如為重組抗原，則應提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息、克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化、抗原表達及純化、鑒定等詳細資料，重組抗原應明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。

5.1.1. 2企業(yè)外購抗原

應詳述抗原的名稱、抗原生物學來源、供應商名稱、提交供應商選擇的研究資料及供應商出具的抗原性能指標及檢驗報告。重組抗原應描述關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，抗原表達及純化、鑒定等資料，重組抗原應明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。

5.1.2其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如小鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體、酶標抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣本稀釋液等，均應進行選擇及驗證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應商和質(zhì)量控制標準。免疫層析方法學的產(chǎn)品如適用于全血，應介紹血細胞去除方式，并驗證去除效果。

5.1.3試劑盒質(zhì)控品/質(zhì)控線

產(chǎn)品應設置合理的質(zhì)控品/質(zhì)控線。質(zhì)控品應至少包含陰性和陽性兩個水平?？贵w檢測試劑陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來源、選擇和性能確認等相關(guān)研究資料，明確供應商和質(zhì)量控制標準。企業(yè)應對質(zhì)控品的檢測結(jié)果（如A值）做出明確的范圍要求（試驗有效性的判斷）。

5.1.4企業(yè)參考品

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復性參考品。應根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際需要設置企業(yè)參考品。

應提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認方法或試劑等相關(guān)驗證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應與待測樣本相同。布魯氏菌抗體檢測試劑的企業(yè)參考品的設置建議如下：

5.1.4.1陽性參考品

陽性參考品應考慮覆蓋不同來源及特征的布魯氏菌抗體陽性樣本，可選擇至少各5份確認為陽性的臨床樣本，并設置不同滴度水平；其中應包含IgM/IgG單獨陽性和雙陽性的樣本。

5.1.4.2陰性參考品

陰性參考品應考慮檢測特異性的評價，應納入類風濕因子陽性樣本及其他病原體特異性抗體陽性樣本。

5.1.4.3檢出限參考品

可設置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應包含檢出限水平, IgM和IgG分別設置。

5.1.4.4重復性參考品

建議包括高、低兩個濃度的臨床樣本，其中一個濃度應為檢出限附近的濃度。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1產(chǎn)品基本反應原理介紹。

5.2.2生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并提交研究資料說明每一步驟生產(chǎn)工藝的研究確定資料。

5.2.3包被/標記工藝研究，申請人應考慮如包被/標記液量、濃度、時間、條件等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。

5.2.4顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

（四）臨床評價資料

臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。

1.臨床研究單位的選擇

應選擇不少于3家（含3家）經(jīng)醫(yī)療器械臨床試驗機構(gòu)備案的臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導原則的要求開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)的選擇應充分考慮擬申報產(chǎn)品的特點和預期用途，綜合流行病學背景，建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗，使臨床試驗機構(gòu)和受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗機構(gòu)應具有免疫學方法和微生物培養(yǎng)檢測的優(yōu)勢，實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉臨床試驗方案。

2.臨床試驗方法

2.1如有已上市同類產(chǎn)品的，建議申請人選擇境內(nèi)已批準上市的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，評價申報產(chǎn)品的臨床性能。對比試劑的選擇應從預期用途、樣本要求、檢測性能等方面，確認其與申報產(chǎn)品具有較好的可比性。

如無已上市同類產(chǎn)品，申請人可選擇臨床參考標準進行比較研究。臨床參考標準即按照國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《布魯氏菌病診斷 WS 269-2019》等文件進行病例診斷的方法。

2.2 針對IgM檢測，還應進行一定量的新鮮樣本與布魯氏菌培養(yǎng)鑒定方法進行比較，培養(yǎng)鑒定的方法應參照按照國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《布魯氏菌病診斷 WS 269-2019》，培養(yǎng)時間建議不少于14天。對于培養(yǎng)陽性而IgM檢測陰性的病例應進一步隨訪其IgM的檢測情況，并結(jié)合IgG的檢測結(jié)果等綜合進行分析。對于培養(yǎng)陰性而IgM檢測陽性的病例建議進一步確認病例的感染狀態(tài)。針對不一致的樣本，應綜合以上因素進行分析。

2.3 對于無已上市同類產(chǎn)品的試劑，為了進一步充分評價申報產(chǎn)品的臨床檢測性能，申請人還應納入至少10例患者的連續(xù)收集的樣本進行研究，應涵蓋不同的疾病階段，考察申報產(chǎn)品IgM和IgG的檢測性能，該部分病例應包括一定數(shù)量的IgM、IgG陽轉(zhuǎn)的病例。

3.受試者選擇和樣本類型

3.1受試者選擇

入組人群應以疑似病例為主，應具有相應的流行病學史以及相關(guān)的臨床癥狀及體征，如持續(xù)數(shù)日乃至數(shù)周發(fā)熱（包括低熱），多汗，乏力，肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等，肝、脾、淋巴結(jié)腫大等。還應包括各種可能的干擾樣本、交叉反應樣本（其它病原體陽性）等。

應注意，入組人群應包括疾病的不同階段，急性期（3個月以內(nèi)）、亞急性期（3~6個月）、慢性期（超過6個月）。應納入初次感染以及復發(fā)/再感染的病例。

3.2 樣本類型

布魯氏菌抗體檢測試劑適用的樣本類型一般包括血清、血漿、靜脈全血等。對于不同的樣本類型，如臨床前研究證實檢測性能沒有差異（如血清、血漿），則臨床試驗中可匯總統(tǒng)計。

如產(chǎn)品適用的不同樣本類型差異較大（如：血清/血漿與靜脈全血），建議針對不同樣本類型進行同源比對，亦可分別按照臨床試驗設計與已上市同類產(chǎn)品或臨床參考標準進行比對。

4. 臨床試驗樣本量

臨床試驗樣本量應滿足統(tǒng)計學要求，可采用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法進行估算。根據(jù)相應臨床試驗設計，本臨床試驗可依據(jù)申報產(chǎn)品相對于對比試劑的陰、陽性符合率分別估算最低陰、陽性樣本例數(shù)。

4.1與已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑的比較研究中，臨床樣本量的估算建議采用單組目標值法進行計算，陰陽性符合率的臨床可接受標準（P0）建議不低于90%。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標準正態(tài)分布的分數(shù)位，P0為評價指標的臨床可接受標準，PT為考核試劑評價指標預期值。

臨床試驗總體樣本量確定時應在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及可能需要納入的干擾樣本、交叉反應樣本等情況適當增加入組樣本量。

4.2與臨床參考標準的比較研究，建議參考與對比方法/試劑比較研究部分的樣本量估算方法，設定合理的臨床可接受標準。

4.3與布魯氏菌培養(yǎng)鑒定比較研究，應入組一定數(shù)量的陽性及陰性病例，考察試驗體外診斷試劑與布魯氏菌培養(yǎng)鑒定的一致性，納入的例數(shù)也應進行統(tǒng)計學估算，可采用抽樣精度的公式進行樣本量估算。

4.4 如申報產(chǎn)品適用于不同樣本類型，臨床試驗需進行不同樣本類型（如血清/血漿與全血）的同源比對時，樣本例數(shù)應滿足統(tǒng)計學要求，建議每種樣本類型的陽性和陰性樣本例數(shù)均不少于70例。

5.統(tǒng)計學分析

應選擇合適的統(tǒng)計方法對臨床試驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析，對于申報產(chǎn)品與對比試劑/臨床參考標準的一致性評價，常選擇交叉四格表形式總結(jié)兩種方法的結(jié)果，評價指標一般包括陽性符合率/陰性符合率、靈敏度/特異度，Kappa值等，并計算相應的95%置信區(qū)間。同時應針對疾病的不同階段進行亞組分析。

對于IgM和IgG聯(lián)檢的產(chǎn)品，應分別針對IgM、IgG以及二者聯(lián)檢與對比試劑/臨床參考標準進行統(tǒng)計分析。

臨床試驗中不一致結(jié)果均應結(jié)合患者的流行病學背景、臨床癥狀、患者的免疫狀態(tài)、疾病轉(zhuǎn)歸以及其他檢驗結(jié)果等信息進行充分的分析。

6.倫理學要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學準則。研究者應考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風險，提請倫理委員會審查，并獲得倫理委員會的同意。注冊申報時應提交倫理委員會的審查意見。

7.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機構(gòu)應執(zhí)行統(tǒng)一的臨床試驗方案，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申請人的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗開始前，建議進行臨床試驗的預試驗，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及精密度。

9.臨床試驗報告撰寫

臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法，最后得出臨床試驗結(jié)論。臨床試驗報告的撰寫參考《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》及《體外診斷試劑臨床試驗報告范本》的相關(guān)要求。

（五）產(chǎn)品說明書和標簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應與注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，應以規(guī)范格式進行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。說明書編寫應重點關(guān)注以下內(nèi)容：

1.【預期用途】

產(chǎn)品預期用途的描述應符合現(xiàn)行的疾病防治指南，其臨床試驗入組病例應能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。建議產(chǎn)品預期用途包括如下內(nèi)容：

本產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清/血漿/全血樣本中的布魯氏菌的IgM/IgG抗體。

用于布魯氏菌感染的輔助診斷。本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測結(jié)果對病情進行綜合分析。

2.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：

2.1樣本采集：明確采集時間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說明采集方法及樣本類型，對于血漿、全血樣本，應注明對抗凝劑的要求。

2.2干擾物的影響：明確常見干擾物對實驗結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

3.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟：

3.1試驗環(huán)境：實驗室的溫度、濕度要求，檢測試劑及樣本的復溫要求等。

3.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

3.3高濃度樣本稀釋的方法。

3.4試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等。

3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

3.6對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序等。特別注意應強調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時間范圍。

3.7特別說明檢驗操作過程中的注意事項。

4.【陽性判斷值】（如適用）

明確陽性判斷值，簡要描述陽性判斷值確定的試驗方法。

5.【檢驗結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控線/對照品/質(zhì)控品/校準品以及樣本的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應的解釋進行詳述。對于膠體金法檢測試劑可采用圖示形式描述結(jié)果判讀方法。如有灰區(qū)判定，詳細說明灰區(qū)樣本的處理方法。

6.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關(guān)說明，建議包括以下內(nèi)容：

6.1本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢測、治療反應及流行病學等信息綜合考慮。

6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運、處理及不當?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境均有可能導致假陰性或假陽性結(jié)果。

6.3由于細菌感染到機體產(chǎn)生特異性抗體需經(jīng)一定時間，抗體的滴度水平存在個體差異等，應綜合考慮IgM抗體檢測結(jié)果、IgG抗體檢測結(jié)果、染疫的家畜及其制品接觸史、涉疫區(qū)史、臨床表現(xiàn)等進行疾病診斷。

6.4評價血清學檢測結(jié)果時需要結(jié)合患者的臨床病程、基礎(chǔ)狀況（免疫狀態(tài)）以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺陷或免疫功能受抑制的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體，其血清學抗體檢測的參考價值有限，可能會導致錯誤的醫(yī)學解釋。

6.5在近幾個月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結(jié)果的分析應慎重。

6.6該產(chǎn)品為定性檢測產(chǎn)品，結(jié)果并不能準確反映布魯氏菌IgM /IgG抗體的滴度。

6.7其他需要說明的局限性等。

7.【產(chǎn)品性能指標】

簡述以下性能指標：

7.1企業(yè)參考品符合率。

7.2檢出限：簡要介紹評價方法、所用樣本情況以及評價結(jié)果。

7.3對包容性的研究情況進行總結(jié)。

7.4對精密度的研究情況進行總結(jié)。

7.5分析特異性

7.5.1交叉反應：詳述交叉反應驗證的病原體種類，及有/無交叉反應的濃度水平。

7.5.2干擾試驗：說明驗證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應的濃度水平。

7.6臨床試驗：簡要介紹試驗方法、受試者及樣本、試驗結(jié)果和結(jié)論等。

8.【注意事項】

8.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

8.2明確本試劑盒所采用的生物學來源的組分，雖經(jīng)滅活，但不能保證其不具有潛在傳染性，需要嚴格按照生物安全有關(guān)規(guī)定操作，遵循實驗室操作的常規(guī)規(guī)定。所有樣品、洗滌液（如適用）和各種廢棄物均應按污染物處理。

8.3試劑操作的注意事項，如是否需要平衡至室溫再使用，是否需要搖勻等。不同批號的試劑是否可以混用。

8.4有關(guān)實驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

三、參考文獻

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[4] Pablo Yagupsky, Laboratory Diagnosis of Human Brucellosis [J]. Clinical Microbiology Reviews，2019，Vol. 33, No. 1.

附件

背景信息

布魯氏菌屬（Brucella）是胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性菌，為球桿菌或短桿菌。布魯氏菌?。˙rucellosis，簡稱布病）是由布魯氏菌屬的細菌侵入機體，引起的人獸共患的傳染性疾病。常見的病原體包括羊種布魯氏菌（B. melitensis，也稱馬耳他布魯氏菌）生物型1～3，牛種布魯氏菌(B. abortus，也稱流產(chǎn)布魯氏菌)生物型1～7和9，豬種布魯氏菌生物型1～5及綿羊附睪種布魯氏菌（B. ovis）、沙林鼠種布魯氏菌（B. neotomae）、犬種布魯氏菌(B. canis)各1個生物型，共6個種19個生物型。布魯氏菌病是人畜共患的傳染?。灰咝笫遣剪斒暇〉闹饕獋魅驹?，包括羊、牛、豬和犬等。人類對布魯氏菌普遍易感，布魯氏菌通過職業(yè)、環(huán)境接觸感染動物及其制品等途徑而傳播給人。布魯氏菌病常見的臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、多汗、乏力和肌肉關(guān)節(jié)疼痛等，急性期病例多出現(xiàn)肝、脾及淋巴結(jié)腫大，男性病例可伴有睪丸炎，女性病例可見卵巢炎；如果治療不及時或不規(guī)范，容易由急性轉(zhuǎn)為慢性，慢性期患者表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)的損害等。

布魯氏菌病的潛伏期一般為1-3周。病程在3個月內(nèi)為急性期；3～6個月為亞急性期；6個月以上為慢性期，均出現(xiàn)血清學抗體陽性反應。感染的早期階段，開始出現(xiàn)特異性IgM 抗體，然后出現(xiàn)特異性IgG 抗體，隨病程進展持續(xù)升高；部分急性期患者特異性IgM 抗體出現(xiàn)較晚，治愈后特異性IgG 抗體持續(xù)存在。疾病復發(fā)時，通常特異性IgG 抗體的滴度快速升高，特異性IgM 抗體可升高或不升高。在慢性病例中，特異性IgM 抗體的滴度逐漸下降，特異性IgG 抗體持續(xù)存在。

布魯氏菌的實驗室檢查方法分為初篩試驗和確證試驗；前者包括虎紅平板凝集試驗、膠體金免疫層析試驗（GICA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和布魯氏菌培養(yǎng)物涂片革蘭染色等，后者包括標準試管凝集試驗（SAT）、抗人免疫球蛋白試驗（Coomb’s）、補體結(jié)合試驗（CFT)以及布魯氏菌的分離培養(yǎng)和鑒定。IgM 和 IgG 的檢測結(jié)果可以作為區(qū)分近期感染和既往感染的參考。布魯氏菌病的診斷應根據(jù)流行病學史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查結(jié)果進行綜合判斷。