附件：定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2022年第36號(hào)）.doc

定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

分析性能評(píng)估資料是評(píng)價(jià)產(chǎn)品安全有效性的重要支持性資料之一?？茖W(xué)合理地開(kāi)展產(chǎn)品的分析性能評(píng)估，確定產(chǎn)品的各項(xiàng)分析性能指標(biāo)，是產(chǎn)品設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵過(guò)程。本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)定性檢測(cè)體外診斷試劑進(jìn)行充分的分析性能評(píng)估，并整理形成注冊(cè)申報(bào)資料，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則所述定性檢測(cè)體外診斷試劑是指僅提供兩種檢測(cè)結(jié)果（即陽(yáng)性/陰性或有反應(yīng)/無(wú)反應(yīng)）的體外診斷試劑。包括：無(wú)量值報(bào)告的檢測(cè)試劑和基于量值檢測(cè)后通過(guò)閾值判斷結(jié)果的檢測(cè)試劑。本指導(dǎo)原則不適用于結(jié)果報(bào)告為陰性、1+、2+或3+的分等級(jí)報(bào)告或滴度的半定量檢測(cè)試劑和定量檢測(cè)試劑。

本指導(dǎo)原則適用于基于所有方法學(xué)的定性檢測(cè)體外診斷試劑，包括核酸擴(kuò)增技術(shù)、標(biāo)記免疫分析技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)等。

本指導(dǎo)原則適用于所有預(yù)期用途的定性檢測(cè)體外診斷試劑，包括：篩查試劑、診斷/輔助診斷試劑和確認(rèn)試劑。

本指導(dǎo)原則主要描述定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估的原則性要求，如申報(bào)產(chǎn)品已有針對(duì)性的具體指導(dǎo)原則，其分析性能評(píng)估可同時(shí)參照相應(yīng)產(chǎn)品的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品注冊(cè)和變更注冊(cè)的分析性能評(píng)估，包括申報(bào)資料中的部分要求，其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）分析性能評(píng)估的總體要求

1.檢測(cè)系統(tǒng)的要求

體外診斷試劑的檢測(cè)系統(tǒng)是指由樣本處理用產(chǎn)品、檢測(cè)試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、檢測(cè)設(shè)備等構(gòu)成的，可完成樣本從處理到最終結(jié)果報(bào)告所有階段的組合。應(yīng)采用完整、確定的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析性能評(píng)估。

2.試劑要求

分析性能評(píng)估用試劑應(yīng)為原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過(guò)選擇和確定后，在有效質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的體外診斷試劑產(chǎn)品。申請(qǐng)人研發(fā)實(shí)驗(yàn)室配制試劑的分析性能評(píng)估資料不作為注冊(cè)資料提交。

3.操作要求

操作者應(yīng)能正確、熟練地進(jìn)行試劑、方法及樣本相關(guān)的操作，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)等相關(guān)要求進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)控程序，質(zhì)控符合要求后，按試驗(yàn)方案進(jìn)行試劑的分析性能評(píng)估。

4.適用機(jī)型的要求

如果試劑適用不同的機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。應(yīng)采用一個(gè)或多個(gè)機(jī)型，進(jìn)行充分的試劑分析性能建立研究，對(duì)于其他機(jī)型，應(yīng)分析各適用機(jī)型的工作原理、檢測(cè)方法、反應(yīng)條件控制、信號(hào)處理等，如基本相同，可基于風(fēng)險(xiǎn)分析對(duì)已建立的分析性能指標(biāo)進(jìn)行合理驗(yàn)證。所有適用機(jī)型驗(yàn)證的分析性能應(yīng)基本一致，如不同機(jī)型對(duì)某一檢測(cè)項(xiàng)目的某一分析性能存在差異，應(yīng)針對(duì)該差異采用不同機(jī)型進(jìn)行充分的分析性能建立研究。

5.包裝規(guī)格的要求

如試劑包含不同包裝規(guī)格，需對(duì)各包裝規(guī)格間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同規(guī)格間存在性能差異，需采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行分析性能評(píng)估;如不同規(guī)格間不存在性能差異，需要詳細(xì)說(shuō)明各規(guī)格間的差別及可能產(chǎn)生的影響，采用具有代表性的包裝規(guī)格進(jìn)行分析性能評(píng)估。

6.樣本要求

用于分析性能評(píng)估的樣本，應(yīng)盡量與預(yù)期適用的真實(shí)臨床樣本一致，并按照說(shuō)明書(shū)描述的方式進(jìn)行樣本采集、處理、運(yùn)輸和保存。如特定濃度的樣本難以獲得，可采用不同濃度的樣本及陰性樣本進(jìn)行混合;如特定型別的樣本難以獲得，可合理采用標(biāo)準(zhǔn)菌株或毒株、臨床分離培養(yǎng)物等。

（二）分析性能評(píng)估項(xiàng)目的具體要求

定性檢測(cè)體外診斷試劑的分析性能評(píng)估一般包括適用的樣本類型、準(zhǔn)確度、精密度、空白限與檢出限、分析特異性、高劑量鉤狀效應(yīng)等。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)方案，對(duì)各項(xiàng)分析性能進(jìn)行充分評(píng)估。

1.適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型（包括抗凝劑），應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)每種樣本類型的適用性。對(duì)具有可比性的樣本類型，可選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對(duì)研究;對(duì)于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對(duì)每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。此處所述可比樣本，一般指：性能指標(biāo)相同、陽(yáng)性判斷值相同、預(yù)期人群一致、臨床意義相同。反之，則應(yīng)視為不可比樣本。

如果樣本的采集、處理方式存在差別，例如適用不同采樣器、不同樣本保存液、不同處理方法（如核酸的提取與純化、抗原修復(fù)條件等），應(yīng)分析這些差別的潛在影響，并進(jìn)行針對(duì)性的分析性能驗(yàn)證。

2.準(zhǔn)確度

申請(qǐng)人可選擇下述兩種方式或兩種方式之一進(jìn)行準(zhǔn)確度研究。

2.1方法學(xué)比對(duì)

采用申報(bào)試劑與診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)或已上市產(chǎn)品，同時(shí)檢測(cè)臨床樣本，比較檢測(cè)結(jié)果之間的一致性程度，進(jìn)行申報(bào)試劑的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。

樣本應(yīng)選擇符合樣本穩(wěn)定性的預(yù)期人群樣本，或參考樣本盤。研究應(yīng)納入一定數(shù)量的陰性和陽(yáng)性樣本，并注意包含一定數(shù)量的陽(yáng)性判斷值附近的樣本和干擾樣本。

2.2參考品（盤）的檢測(cè)

通過(guò)檢測(cè)參考品（盤）分析申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果與經(jīng)確認(rèn)結(jié)果的符合情況，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度。此處所述參考品（盤）指已經(jīng)診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)/其他成熟方法檢測(cè)確認(rèn)過(guò)的，或有準(zhǔn)確臨床診斷信息的，由多份樣本組成的一套樣本。

應(yīng)注意參考品（盤）對(duì)各種常見(jiàn)型別/流行株的覆蓋和對(duì)所有檢測(cè)位點(diǎn)的覆蓋，包含不同來(lái)源、不同濃度水平的臨床樣本/臨床混合樣本和/或菌株/毒株。建議參考品（盤）還應(yīng)包含不含待測(cè)靶物質(zhì)的干擾及交叉樣本等。對(duì)于臨床罕見(jiàn)樣本可采用細(xì)胞系或人工制備的樣本作為參考品（盤）的組成，但應(yīng)注意樣本基質(zhì)與臨床樣本的一致性，提交人工制備的樣本與臨床真實(shí)樣本的一致性研究分析。

3.精密度

3.1重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性

精密度包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。影響精密度的條件包括：操作者、測(cè)量?jī)x器、測(cè)量程序、試劑批次（lot）、運(yùn)行（run）、時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境條件（實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度、空氣質(zhì)量、管理等）等。

重復(fù)性指在重復(fù)性條件下的精密度，包括相同測(cè)量程序、相同操作者、相同測(cè)量系統(tǒng)、相同操作條件和相同地點(diǎn)，并且在短時(shí)間段內(nèi)對(duì)同一或相似被測(cè)對(duì)象重復(fù)測(cè)量。重復(fù)性條件代表基本不變的測(cè)量條件，此條件產(chǎn)生測(cè)量結(jié)果的變異最小。

再現(xiàn)性又稱實(shí)驗(yàn)室間精密度，指在包括了不同地點(diǎn)、不同操作者、不同測(cè)量系統(tǒng)的測(cè)量條件下對(duì)同一或相似被測(cè)對(duì)象重復(fù)測(cè)量的精密度，其中不同測(cè)量系統(tǒng)可使用不同測(cè)量程序。再現(xiàn)性條件代表最大改變的測(cè)量條件。

重復(fù)性和再現(xiàn)性是精密度的兩種極端情況，界于兩種極端情況之間的精密度，稱為中間精密度，指在包括相同的測(cè)量程序、相同地點(diǎn)的測(cè)量條件下對(duì)相同或相似的被測(cè)對(duì)象在一長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)重復(fù)測(cè)量的精密度，可包含其他相關(guān)條件的改變，例如不同操作者、試劑批號(hào)等。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度考慮了體外診斷試劑在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用過(guò)程中的運(yùn)行、時(shí)間等影響因素，歸類為中間精密度的一種情況。

應(yīng)根據(jù)各測(cè)量條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度和批間（lot-to-lot）精密度。

應(yīng)選擇包括最低檢出限水平、中強(qiáng)濃度水平、陰性的至少三個(gè)分析物濃度水平樣本進(jìn)行精密度研究。精密度研究可能涉及多天、多地點(diǎn)檢測(cè)，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。

建議選擇典型或臨床常見(jiàn)型別樣本進(jìn)行精密度研究。對(duì)于多項(xiàng)聯(lián)檢試劑產(chǎn)品，尤其是核酸和染色體檢測(cè)試劑，一般可根據(jù)產(chǎn)品設(shè)計(jì)原理，每一反應(yīng)單元選擇易錯(cuò)或代表性樣本進(jìn)行研究。應(yīng)闡述研究位點(diǎn)選擇依據(jù)，明確樣本的來(lái)源、濃度和性質(zhì)確定方法。

3.2臨界值水平的精密度研究（如適用）

除上述精密度研究外，建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的臨界值進(jìn)行確定，并采用該濃度/水平樣本進(jìn)行精密度研究。此處所述臨界值水平不同于通過(guò)ROC曲線等方法確定的陽(yáng)性判斷值。理想情況下，臨界值濃度水平，即為多次重復(fù)試驗(yàn)時(shí)，50%的結(jié)果為陰性，50%的結(jié)果為陽(yáng)性濃度水平，在本文以C50表示。

建議采用C5～C95區(qū)間描述分析物濃度接近C50的樣本重復(fù)檢測(cè)的不精密度。

首先建立C50濃度，并通過(guò)對(duì)該濃度水平樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，以對(duì)C50濃度進(jìn)行確認(rèn)。而后以各濃度水平樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)的方式，判斷某一特定可接受范圍，如C50±20%，是否包含了C5～C95區(qū)間。如果-20%至+ 20%的濃度范圍包含了C5～C95區(qū)間，則可以認(rèn)為距離C50點(diǎn)達(dá)20%或以上的樣本可產(chǎn)生一致的結(jié)果; 即在C5～C95以外的樣本的結(jié)果是精密的，此時(shí)試劑精密度可接受。申請(qǐng)人可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn)，設(shè)置合理的結(jié)果接受標(biāo)準(zhǔn)，并詳述設(shè)定依據(jù)。一般可依據(jù)產(chǎn)品的臨床預(yù)期用途、方法學(xué)自身的準(zhǔn)確度、生物學(xué)變異、靶物質(zhì)的特性等設(shè)定產(chǎn)品的精密度可接受范圍。

申請(qǐng)人可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn)，設(shè)置合理的（單側(cè)或雙側(cè)）置信度水平，采用合理的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。推薦對(duì)C50±20%兩個(gè)濃度水平分別重復(fù)進(jìn)行40次檢測(cè)，當(dāng)+20%濃度水平全部為陽(yáng)性，-20%濃度水平全部為陰性時(shí)，得出-20%到+ 20%濃度范圍包含C5～C95區(qū)間的置信度＞80%。

4.檢出限和空白限

4.1檢出限

一般采用檢出限（Limit of Detection, LoD）指標(biāo)來(lái)體現(xiàn)注冊(cè)申報(bào)產(chǎn)品的檢出能力。檢出限的研究，應(yīng)采用多批試劑，多個(gè)樣本進(jìn)行，且研究應(yīng)持續(xù)多天。

可給出連續(xù)量值信號(hào)的定性檢測(cè)試劑，如基于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)的檢測(cè)試劑采用吸光度響應(yīng)區(qū)別“有反應(yīng)”和“無(wú)反應(yīng)”結(jié)果。對(duì)于此類檢測(cè)，可參考《定量檢測(cè)試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》中相關(guān)內(nèi)容，設(shè)定空白限和LoD。注意：這不適用于臨界值遠(yuǎn)高于檢出限的檢出項(xiàng)目。

4.1.1LOD的建立

建議采用對(duì)已知分析物濃度的樣本進(jìn)行系列稀釋后重復(fù)檢測(cè)的方法，確定申報(bào)試劑的檢出限。在上述重復(fù)檢測(cè)過(guò)程中，記錄不同稀釋度/濃度檢出（或陽(yáng)性）的結(jié)果。采用適當(dāng)?shù)哪Ｐ停ㄈ鏟robit分析）和分析方法，計(jì)算申報(bào)試劑在設(shè)定概率下的檢出限，一般在該檢測(cè)濃度下應(yīng)具有95%的陽(yáng)性檢出率。

染色體檢測(cè)試劑，需要考慮不同嵌合比例的檢出情況（如適用）。

線粒體突變檢測(cè)試劑和腫瘤基因突變檢測(cè)試劑，應(yīng)考慮特定核酸濃度下，不同突變比例檢出情況下的LOD（如適用）。

病原體檢測(cè)試劑，應(yīng)納入代表性型別，分別計(jì)算每個(gè)型別的LoD，并取最大值作為整個(gè)檢測(cè)試劑的LOD，或分別聲稱不同型別的LOD。 對(duì)于罕見(jiàn)的型別，可在后續(xù)的檢出限驗(yàn)證試驗(yàn)中進(jìn)行確認(rèn)。

人類基因突變（胚系突變）或基因多態(tài)性檢測(cè)試劑，應(yīng)包含對(duì)型別為雜合子的樣本進(jìn)行LOD（核酸濃度）研究。

4.1.2LOD的驗(yàn)證

注冊(cè)申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)在檢測(cè)限濃度水平對(duì)常見(jiàn)分析物型別進(jìn)行驗(yàn)證，一般采用對(duì)檢出限濃度水平樣本進(jìn)行至少20次的重復(fù)試驗(yàn)的方法對(duì)LOD進(jìn)行驗(yàn)證。申請(qǐng)人應(yīng)明確檢出限驗(yàn)證中，各個(gè)樣本的來(lái)源、型別及濃度確認(rèn)的方法信息。

4.2包容性（inclusivity）

對(duì)于病原體檢測(cè)試劑和部分人基因檢測(cè)試劑，應(yīng)證明申報(bào)試劑具有檢出不同型別待測(cè)病原體/不同基因型/不同基因突變位點(diǎn)的能力。包括中國(guó)人群已知常見(jiàn)基因型別/基因突變位點(diǎn)、病原體的亞群（組）和血清型。應(yīng)采用略高于檢出限濃度的各型別樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)研究。建議采用樣本為滅活的臨床樣本或標(biāo)準(zhǔn)菌株/毒株。對(duì)于罕見(jiàn)的型別可根據(jù)推薦度依次選用：假病毒（病原體檢測(cè)適用）、細(xì)胞株（人基因檢測(cè)適用）、人工克隆或合成的DNA或RNA或蛋白。應(yīng)提供各個(gè)研究樣本的來(lái)源、性質(zhì)確定方法及濃度等信息。

5.分析特異性

分析特異性受干擾和交叉反應(yīng)的影響。申請(qǐng)人應(yīng)分析待測(cè)樣本中及試劑使用過(guò)程中潛在的干擾物質(zhì)和交叉反應(yīng)，并對(duì)干擾和交叉的程度進(jìn)行量化。

5.1干擾試驗(yàn)

可采用添加干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行研究，如果干擾物質(zhì)的基質(zhì)與適用樣本不同，則添加量宜少于總體積的5%（溶解度允許條件下），并盡量使用接近體內(nèi)循環(huán)形式的樣品或純品。

干擾試驗(yàn)可采用如下方法：首先對(duì)可疑干擾物質(zhì)采用臨床樣本中的最高濃度（最差情形）進(jìn)行干擾篩查或驗(yàn)證，一般采用配對(duì)比對(duì)的方式，比較添加與未添加高濃度干擾物質(zhì)的樣本檢測(cè)結(jié)果的差異。如果差異超出接受范圍或?qū)εR床有顯著性影響，可確認(rèn)該物質(zhì)為干擾物質(zhì)，應(yīng)評(píng)估該干擾物質(zhì)濃度與干擾程度之間的關(guān)系;如果差異在接受范圍內(nèi)或?qū)εR床無(wú)顯著性影響，可認(rèn)為該濃度的物質(zhì)不產(chǎn)生干擾，應(yīng)明確不產(chǎn)生干擾的物質(zhì)濃度上限。

結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn)，設(shè)置合理的結(jié)果接受標(biāo)準(zhǔn)，并詳述設(shè)定依據(jù)。對(duì)于可給出量值數(shù)據(jù)或計(jì)數(shù)結(jié)果的定性檢測(cè)試劑，如OD值、Ct值，一般可依據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途、生物學(xué)變異等設(shè)定產(chǎn)品的可接受標(biāo)準(zhǔn)。

在對(duì)可疑干擾物質(zhì)進(jìn)行干擾篩查或驗(yàn)證時(shí)，建議采用包含弱陽(yáng)性水平在內(nèi)，至少兩個(gè)分析物水平的樣本。在評(píng)估干擾物質(zhì)濃度與干擾程度之間關(guān)系時(shí)，可適當(dāng)增加樣本數(shù)量，納入更多分析物水平的樣本。

申請(qǐng)人除按照上述方法采用添加干擾物的樣本進(jìn)行研究外，亦可采用有代表性的患者樣本，通過(guò)對(duì)申報(bào)產(chǎn)品與不受該干擾物影響的測(cè)量方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，進(jìn)行干擾物質(zhì)研究。

常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括血紅蛋白、脂類、膽紅素、白細(xì)胞裂解物、自身抗體、異嗜性抗體、疾病相關(guān)蛋白、患者體內(nèi)的異常生化代謝物等;常見(jiàn)的外源性干擾物質(zhì)包括樣本添加劑（抗凝劑或防腐劑）、常用藥物及其代謝物、患者群體使用的藥物及其代謝物、膳食物質(zhì)、樣本收集或處理過(guò)程中接觸到的物質(zhì)，樣本污染物;亦應(yīng)考慮文獻(xiàn)中已報(bào)道的對(duì)類似試劑或測(cè)量程序存在干擾的物質(zhì)。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)選擇潛在的干擾物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。

5.2交叉反應(yīng)

5.2.1常見(jiàn)交叉反應(yīng)物質(zhì)

包括分析物的結(jié)構(gòu)類似物、具有同源性序列的核酸片段、檢測(cè)范圍外的型別，易共存的其他類似物、易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體、相同或相似的臨床癥狀出現(xiàn)時(shí)，體內(nèi)易升高的其他蛋白、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物（包含近緣微生物），已報(bào)道對(duì)類似試劑或測(cè)量程序存在交叉的物質(zhì)等。

還應(yīng)考慮到由于產(chǎn)品原材料設(shè)計(jì)可能引入的交叉反應(yīng)。如病原體抗體檢測(cè)試劑采用基因重組抗原，應(yīng)增加對(duì)異源物質(zhì)，如重組基因及表達(dá)宿主的特異性抗體的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)。

5.2.2研究方法

企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)選擇潛在的交叉反應(yīng)物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。建議選擇高濃度交叉反應(yīng)物水平進(jìn)行驗(yàn)證，細(xì)菌或者真菌的最低濃度為106CFU/mL;病毒的最低濃度為105PFU/mL;人野生型DNA至少包含100 ng/μL野生核酸樣本。對(duì)于交叉反應(yīng)中病原體的最低濃度，生產(chǎn)商也可根據(jù)病原體的具體特性規(guī)定相應(yīng)濃度及濃度單位。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體的制備方法、來(lái)源、種屬和濃度信息。

對(duì)于核酸檢測(cè)試劑，當(dāng)遇交叉反應(yīng)物難以獲得，如病原體難以培養(yǎng)或基因型頻率低時(shí)，可采用核酸樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。此時(shí)應(yīng)將核酸樣本視為實(shí)際使用過(guò)程中參與檢測(cè)反應(yīng)的核酸樣本，根據(jù)說(shuō)明書(shū)的要求配制反應(yīng)體系，進(jìn)行檢測(cè)。

對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)試劑，用于交叉反應(yīng)研究的抗體類型應(yīng)與待測(cè)目的的抗體類型相同，如檢測(cè)病原病原體特異性IgG抗體，應(yīng)研究與其他相關(guān)病原體特異性IgG抗體的交叉反應(yīng)。

6.高劑量鉤狀效應(yīng)

對(duì)于部分免疫學(xué)原理的產(chǎn)品，檢測(cè)含有極高濃度的待測(cè)抗體/抗原的樣本時(shí)，飽和反應(yīng)可能導(dǎo)致檢測(cè)濃度值低于真實(shí)值或出現(xiàn)假陰性結(jié)果。建議對(duì)多個(gè)含有高濃度分析物的樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)多份進(jìn)行檢測(cè)，明確不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的最高分析物濃度。

7.診斷靈敏度

對(duì)于預(yù)期用途為病原體感染輔助診斷的檢測(cè)試劑，如有經(jīng)全面驗(yàn)證的轉(zhuǎn)換盤，建議額外采用轉(zhuǎn)換盤進(jìn)行診斷靈敏度的研究。比較與同類已上市產(chǎn)品的診斷靈敏度差異。

8.其他

8.1核酸提取

對(duì)于核酸檢測(cè)試劑，不同的核酸提取方法直接影響待測(cè)核酸的質(zhì)量與濃度水平，此類試劑應(yīng)進(jìn)行核酸提取性能研究。申請(qǐng)人可通過(guò)對(duì)比不同提取方法的提取純度、濃度、提取效率和精密度，選擇申報(bào)產(chǎn)品配套使用的核酸提取方法/試劑。

若注冊(cè)申報(bào)試劑聲稱適用兩種或以上核酸提取方法/試劑，則應(yīng)對(duì)選定的每一種核酸提取方法的檢測(cè)試劑性能進(jìn)行驗(yàn)證，一般而言，應(yīng)至少包含對(duì)LoD和精密度的驗(yàn)證，此處精密度應(yīng)參考本文此前關(guān)于再現(xiàn)性的研究要求。

8.2免疫反應(yīng)性

對(duì)于免疫組織化學(xué)抗體試劑及檢測(cè)試劑，應(yīng)提交試劑對(duì)正常人體組織和非正常組織，每種組織類型不少于3例的免疫反應(yīng)性研究。評(píng)價(jià)陰、陽(yáng)性表達(dá)情況并描述著色位置及染色特點(diǎn)。一般而言，非正常組織包括：相關(guān)良性、惡性病變組織和經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道可能出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)的惡性病變組織。

8.3基于原位雜交方法的檢測(cè)試劑的其他性能評(píng)估

一般應(yīng)進(jìn)行雜交效率以及探針特異性的研究。

雜交效率用于評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品探針結(jié)合靶序列的能力。該研究建議使用中期分裂相的外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行涂片分析。雜交效率的研究應(yīng)考慮不同判讀者差異的影響。對(duì)于檢測(cè)特定腫瘤細(xì)胞中目標(biāo)序列的檢測(cè)試劑，還應(yīng)選擇相關(guān)腫瘤組織樣本進(jìn)行雜交效率的研究。

探針特異性通過(guò)特異雜交到染色體正確位置的雜交信號(hào)占全部雜交信號(hào)的比例來(lái)表示。該研究建議使用中期分裂相的外周血淋巴細(xì)胞涂片分析，選擇來(lái)源于不同人體的細(xì)胞，對(duì)至少200個(gè)靶位點(diǎn)進(jìn)行分析計(jì)數(shù)，研究應(yīng)結(jié)合顯帶技術(shù)進(jìn)行觀察。同時(shí)如果研究出現(xiàn)交叉雜交，應(yīng)考慮靶序列與交叉雜交序列的同源性程度，是否存在其他相似染色體異常類型等問(wèn)題。

建議該類產(chǎn)品分析性能評(píng)估參照相應(yīng)的審查指導(dǎo)原則進(jìn)行。

本文件主要介紹定性檢測(cè)體外診斷試劑常見(jiàn)的分析性能根據(jù)產(chǎn)品特性，可能還需研究其他分析性能，暫不在本文敘述。

（三）分析性能評(píng)估申報(bào)資料的要求

申請(qǐng)人應(yīng)提交體外診斷試劑產(chǎn)品的分析性能評(píng)估資料，對(duì)于每項(xiàng)性能均應(yīng)明確具體研究目的、試驗(yàn)方法、原始數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析過(guò)程及結(jié)果。相關(guān)基本信息也應(yīng)在申報(bào)資料中進(jìn)行描述，包括試驗(yàn)地點(diǎn)，試驗(yàn)采用的具體試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，樣本類型、來(lái)源、處理方法、基質(zhì)類型及所含物質(zhì)信息等。

分析性能評(píng)估的結(jié)論應(yīng)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中進(jìn)行描述，綜合不同試劑規(guī)格、批次及適用機(jī)型的試驗(yàn)結(jié)果，合理描述產(chǎn)品的分析性能。

三、名詞解釋

1.準(zhǔn)確度：被分析物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果與真實(shí)結(jié)果之間的接近程度。

2.陽(yáng)性判斷值（cut-off value）：用于鑒別樣品，作為判斷特定疾病、狀態(tài)或被測(cè)物存在或不存在的界限的量值。對(duì)于定性試驗(yàn)，高于此閾值的結(jié)果報(bào)告為陽(yáng)性，而低于此閾值的結(jié)果報(bào)告為陰性。

3. C50（50%濃度）:接近臨界值的分析物濃度，多次重復(fù)檢測(cè)此濃度的單一樣本時(shí)將獲得50%的陽(yáng)性結(jié)果和50%的陰性結(jié)果。

4. C5～C95區(qū)間：臨界值附近的分析物濃度，可認(rèn)為此濃度區(qū)間之外的分析物檢測(cè)結(jié)果始終為陰性（濃度

5. 診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)：使用一種方法或聯(lián)合多種方法，包括實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、病理和隨訪信息在內(nèi)的臨床信息，來(lái)界定狀況、事件和關(guān)注特征有無(wú)的標(biāo)準(zhǔn)。

6. 檢出限（Limit of Detection，LOD）：由給定測(cè)量程序得到的測(cè)得量值，對(duì)于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α?xí)r，聲稱不存在該成分的誤判概率為β。

注1:對(duì)于分子測(cè)量程序，指持續(xù)檢出的最低分析物濃度。（通常是指常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室條件下，特定樣本類型＞95%檢出率。）

7.包容性（inclusivity）：指檢測(cè)試劑可以對(duì)預(yù)期范圍內(nèi)的靶物質(zhì)（如基因型/位點(diǎn)等）及其狀態(tài)的檢出能力。

8.高劑量鉤狀效應(yīng)：是指在免疫化學(xué)測(cè)量程序中由相對(duì)抗體濃度抗原濃度過(guò)量或相對(duì)抗原濃度抗體濃度過(guò)量時(shí)的抗原-抗體免疫復(fù)合物減少而引起的負(fù)偏倚。

9.測(cè)量程序：按照一個(gè)或多個(gè)測(cè)量原理和給定的測(cè)量方法，基于一種測(cè)量模型，對(duì)測(cè)量所作的詳細(xì)描述，包括獲得測(cè)量結(jié)果所必需的任何計(jì)算。

四、參考文獻(xiàn)

[1] GB/T 29791.1-2013，體外診斷醫(yī)療器械制造商提供的信息（標(biāo)示）第1部分：術(shù)語(yǔ)、定義和通用要求[S].

[2] WS/T 505-2017, 定性測(cè)定性能評(píng)價(jià)指南[S].

[3] CLSI. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance. Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP12-A2. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.

[4] CLSI. Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP17-A2. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2012.

[5] CLSI. Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Procedures; Approved Guideline—Third Edition. CLSI document EP05-A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2014.

[6] CLSI. Interference Testing in Clinical Chemistry. 3rd ed. CLSI guideline EP07. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2018.

[7] CLSI. Supplemental Tables for Interference Testing in Clinical Chemistry. 1st ed. CLSI guideline EP37. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2018.