附件：α-羥丁酸脫氫酶測定試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2024年第19號）.doc

α-羥丁酸脫氫酶測定試劑注冊審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對α-羥丁酸脫氫酶測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對α-羥丁酸脫氫酶測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

α-羥丁酸脫氫酶測定試劑是指用于定量檢測人體樣本（血清、血漿）中α-羥丁酸脫氫酶活性的試劑。

本指導(dǎo)原則適用于以α-酮丁酸為底物，以酶促反應(yīng)動力學(xué)為檢驗原理，采用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，進(jìn)行α-羥丁酸脫氫酶（α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase,α-HBDH）定量檢測的臨床化學(xué)體外診斷試劑。不包括用于單獨申報的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。其他方法學(xué)的α-羥丁酸脫氫酶測定試劑注冊可參考本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇適用自身方法學(xué)特性的研究步驟及方法。

二、注冊審查要點

注冊申報資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》的相關(guān)要求。

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如α-羥丁酸脫氫酶測定試劑盒（α-酮丁酸底物法）。

產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測物名稱為α-羥丁酸脫氫酶；第二部分：用途，如檢測試劑；第三部分：方法或者原理，如α-酮丁酸底物法等。

2.分類依據(jù)

根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，α-羥丁酸脫氫酶測定試劑產(chǎn)品類別為：II-4用于酶類檢測的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840。

3.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

應(yīng)按《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》的要求提交概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史等資料。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.概述

應(yīng)描述α-羥丁酸脫氫酶測定試劑名稱及其確定依據(jù)；該產(chǎn)品屬于II-4用于酶類檢測的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840；描述申報產(chǎn)品預(yù)期用途；描述有關(guān)申報產(chǎn)品的背景信息概述或特別細(xì)節(jié)（如適用），如申報產(chǎn)品的歷史概述、歷次提交的信息，與其他經(jīng)批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的關(guān)系等。

2.產(chǎn)品描述

2.1產(chǎn)品綜述

應(yīng)明確產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，產(chǎn)品組成，原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝，檢驗方法，質(zhì)控品的制備方法及賦值情況，校準(zhǔn)品的制備方法及溯源情況等。技術(shù)原理包括反應(yīng)原理，方法學(xué)，測量方法，信號處理方法，數(shù)據(jù)獲取和解讀方式，分析前處理步驟等。

描述產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價，包括分析性能評估、參考區(qū)間、穩(wěn)定性以及臨床評價等。

描述不同包裝規(guī)格之間的差異。

描述產(chǎn)品中使用的生物材料或衍生物(如適用)，包括生物學(xué)來源（如人、動物、病原體、重組或發(fā)酵產(chǎn)物）和組織來源（如血液）的描述。人源性材料須對有關(guān)傳染病（HIV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明；其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)說明其在產(chǎn)品運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境是安全的，并提供相關(guān)的證明文件。

2.2包裝描述

提供有關(guān)產(chǎn)品包裝信息，包括包裝形狀和材料等。

2.3研發(fā)歷程

闡述申請注冊產(chǎn)品的研發(fā)背景和目的。如有參考的同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)提供同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品的信息，并說明選擇其作為研發(fā)參考的原因。

2.4與同類和/或前代產(chǎn)品的比較

應(yīng)著重從預(yù)期用途、主要組成成分、技術(shù)原理、溯源情況、主要性能指標(biāo)、參考區(qū)間、臨床應(yīng)用情況等方面寫明擬申報產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

3.預(yù)期用途

3.1預(yù)期用途

說明產(chǎn)品用于體外定量檢測人體樣本中α-羥丁酸脫氫酶的活性，應(yīng)明確具體的樣本類型如血清、血漿等，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的分析性能研究及臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。

3.2 臨床適應(yīng)證

臨床適應(yīng)證的發(fā)生率、易感人群、分析物的詳細(xì)介紹及與臨床適應(yīng)證的關(guān)系，相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

如：α-HBDH是乳酸脫氫酶同工酶（LDH）的一種，主要代表LDH1和LDH2的活性，在心臟分布較多。血清α-HBDH升高常見于心臟疾病心肌梗死、心肌炎等；溶血性貧血時血清α-HBDH增高；血清α-HBDH/LDH比值可用于心臟疾病和肝臟疾病的鑒別診斷。

α-羥丁酸脫氫酶測定目前廣泛應(yīng)用的方法為α-酮丁酸底物法。

3.3適用人群

適用人群：目標(biāo)患者/人群的信息，對于適用人群包含兒童或新生兒的情況，應(yīng)進(jìn)行明確。

3.4預(yù)期使用者

使用者為經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的醫(yī)務(wù)人員或?qū)嶒炇覍I(yè)技術(shù)人員。

3.5預(yù)期使用環(huán)境

預(yù)期使用地點為醫(yī)學(xué)檢驗實驗室或醫(yī)院、醫(yī)療/臨床實驗室，其檢測過程中的環(huán)境條件應(yīng)符合適用儀器正常工作環(huán)境條件，并且試劑儲存需滿足說明書規(guī)定的儲存條件及有效期。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險管理資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品全生命周期中的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面進(jìn)行風(fēng)險分析、風(fēng)險評價和風(fēng)險控制，綜合評價產(chǎn)品風(fēng)險可接受程度，形成風(fēng)險管理資料。

申請人應(yīng)同時識別出α-羥丁酸脫氫酶測定試劑的特定風(fēng)險，如：抗凝劑（草酸鹽、枸櫞酸鈉、氟化鈉等）、防腐劑（如硼酸等）可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾；紅細(xì)胞中α-HBDH含量高，若樣本為溶血血清或分離不及時，會對檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾等。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

產(chǎn)品應(yīng)符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應(yīng)當(dāng)說明理由。

對于包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應(yīng)當(dāng)說明其在申報資料中的具體位置；對于未包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應(yīng)當(dāng)注明該證據(jù)文件名稱及其在質(zhì)量管理體系文件中的編號以備查。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

3.1產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(如YY/T 1242《α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑（盒）》)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求進(jìn)行產(chǎn)品技術(shù)要求編寫。主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、準(zhǔn)確度/正確度、線性、精密度、試劑空白、分析靈敏度等。如有組合注冊的校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)品主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、水分含量（干粉適用）、均勻性等。如有組合注冊的質(zhì)控品，質(zhì)控品主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、可接受區(qū)間/值、均勻性等。具體產(chǎn)品的性能指標(biāo)需結(jié)合方法學(xué)本身特性，確定其性能指標(biāo)或者提供此指標(biāo)不適用的說明。

產(chǎn)品的檢驗方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法；自建檢驗方法應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)研究，以確保檢驗方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性、可重現(xiàn)性和可操作性。

3.2產(chǎn)品檢驗報告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對產(chǎn)品進(jìn)行檢驗?？商峤灰韵氯我恍问降臋z驗報告：

3.2.1申請人出具的自檢報告。

3.2.2委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的檢驗報告。

如產(chǎn)品提交自檢報告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。

4.分析性能研究

申請人應(yīng)提交在有效質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的體外診斷試劑產(chǎn)品的所有分析性能評估資料，對于每項分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、試驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。分析性能研究的試驗方法，可以參考《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》。

分析性能評估時應(yīng)將試劑、儀器和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括試驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、試驗用樣本類型及定值方法等。用于分析性能評估的樣本，應(yīng)盡量與預(yù)期適用的真實臨床樣本一致，并按照說明書描述的方式進(jìn)行樣本采集、處理、運輸和保存。

如申報產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行評估的資料。如試劑包含不同包裝規(guī)格，需對各包裝規(guī)格間的差異進(jìn)行分析或驗證。如不同規(guī)格間存在性能差異，需采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行分析性能評估；如不同規(guī)格間不存在性能差異，需要詳細(xì)說明各規(guī)格間的差別及可能產(chǎn)生的影響，采用具有代表性的包裝規(guī)格進(jìn)行分析性能評估。

4.1樣本穩(wěn)定性

為防止溶血，血液樣本采集后應(yīng)及時分離血清或血漿，血漿樣本應(yīng)使用抗凝劑抗凝。

應(yīng)充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進(jìn)行評價并提交研究資料。對于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。內(nèi)容包括建議的保存條件、添加劑（如抗凝劑）和運輸條件（如涉及）等。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【樣本要求】中進(jìn)行詳細(xì)描述。

4.2適用的樣本類型

血清、血漿是α-羥丁酸脫氫酶檢測的適宜樣本，如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法評價每種樣本類型的適用性。

其中，針對血清、血漿樣本，可選擇具有統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對研究。對于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評估。采用抗凝劑時，應(yīng)說明抗凝劑對樣本檢測結(jié)果的影響。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的來源及制備方法。

4.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

目前α-羥丁酸脫氫酶暫無有證參考物質(zhì)及參考方法，α-羥丁酸脫氫酶校準(zhǔn)品一般溯源至制造商選定測量程序。制造商選定測量程序應(yīng)選取已上市的成熟檢測系統(tǒng)，溯源明確，未發(fā)生過不良反應(yīng)事件，且與待評價試劑的檢測結(jié)果具有相同的活性單位。

如申報產(chǎn)品包括校準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)提交溯源資料。如申報產(chǎn)品包括質(zhì)控品，應(yīng)當(dāng)提交在所有適用機(jī)型上進(jìn)行賦值和驗證的資料。

4.4正確度

對測量正確度的評價，可采用參考物質(zhì)測定或方法學(xué)比對，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。目前α-羥丁酸脫氫酶暫無有證參考物質(zhì)及參考方法，建議申請人采用方法學(xué)比對進(jìn)行正確度研究。如有有證參考物質(zhì)及參考方法發(fā)布，優(yōu)先采用參考物質(zhì)測定進(jìn)行研究。

4.4.1方法學(xué)比對

采用參考測量程序或國內(nèi)普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時測定一批臨床樣本，臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報試劑的測量區(qū)間并均勻分布。比較兩種方法之間的偏倚，如果偏倚在申請人給定的允許誤差范圍內(nèi)，說明兩種測定系統(tǒng)對樣本的測定結(jié)果基本相符。擬申報試劑與比對試劑相比，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和比對試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意適用機(jī)型、質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

如條件允許，建議與具有相同溯源性的分析系統(tǒng)作比對。

4.4.2參考物質(zhì)測定

參考物質(zhì)包括具有互換性的有證參考物質(zhì)、公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測量程序賦值的臨床樣本等。不可采用產(chǎn)品校準(zhǔn)品、申報試劑檢測系統(tǒng)定值的質(zhì)控品進(jìn)行正確度評價。

采用至少兩個濃度的參考物質(zhì)，代表臨床意義相關(guān)的高、低濃度水平，進(jìn)行多次重復(fù)測定，根據(jù)測定結(jié)果平均值與參考量值計算偏倚。如參考物質(zhì)只有一個水平，且無合理稀釋方法，亦可在說明原因的基礎(chǔ)上，僅采用一個水平的參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評價，結(jié)果應(yīng)在申請人給定范圍內(nèi)。

4.5精密度

應(yīng)根據(jù)各測量條件對檢測結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計合理的精密度試驗方案進(jìn)行評價，包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。

精密度研究用樣本一般為臨床實際檢測樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本。精密度研究可能涉及多天、多地點檢測，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。

4.6空白限（LoB）、檢出限（LoD）和定量限（LoQ）

4.6.1空白限、檢出限與定量限的建立

空白限（LoB），檢出限(LoD)，定量限(LoQ)的建立需分別選擇多個獨立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。

空白限一般由多個獨立的空白樣本（無分析物）的測定結(jié)果，經(jīng)計算獲得；檢出限一般由多個低濃度（含有分析物）樣本的測定結(jié)果結(jié)合空白限（或單獨計算）獲得。定量限應(yīng)滿足預(yù)設(shè)正確度指標(biāo)，即考慮偏倚和精密度的要求。

4.6.2空白限、檢出限與定量限的驗證

空白限、檢出限及定量限的驗證，每個項目需選擇至少2個樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行試驗。每個試劑批次至少需要獲得20個檢測結(jié)果，計算與4.6.1 研究獲得的空白限、檢出限及定量限呈現(xiàn)一致性的檢測結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則空白限、檢出限及定量限得到驗證。

4.7分析特異性

4.7.1干擾試驗

干擾物質(zhì)研究應(yīng)當(dāng)考慮常見的內(nèi)源性干擾、外源性干擾和已有報道的干擾物質(zhì)等對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響。常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等，常見的外源性干擾物質(zhì)包括樣本添加劑（如防腐劑）、常用藥物及其代謝物（如維生素C）、患者群體使用的藥物及其代謝物、膳食物質(zhì)、樣本收集或處理過程中接觸到的物質(zhì)，樣本污染物；亦應(yīng)考慮文獻(xiàn)中已報道的對類似試劑或測量程序存在干擾的物質(zhì)。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點選擇潛在的干擾物質(zhì)進(jìn)行驗證。

研究的干擾物濃度應(yīng)覆蓋臨床樣本中的最高濃度（最差情形），并對干擾的程度進(jìn)行量化。將研究結(jié)果在說明書中進(jìn)行描述，明確干擾物質(zhì)影響的最大濃度。待評價的樣本濃度建議采用至少2個分析物水平的樣本，其濃度應(yīng)在醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近。

4.7.2交叉反應(yīng)

交叉反應(yīng)研究需對可能的交叉反應(yīng)物質(zhì)進(jìn)行檢測，對檢測結(jié)果設(shè)定合理的接受范圍，如果超出接受范圍，可認(rèn)為該物質(zhì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)，應(yīng)評估該物質(zhì)濃度與交叉程度之間的關(guān)系。如檢測結(jié)果在接受范圍內(nèi)，可認(rèn)為該濃度的物質(zhì)不產(chǎn)生交叉反應(yīng)，應(yīng)明確不產(chǎn)生交叉反應(yīng)的物質(zhì)濃度上限。

建議選擇高濃度的交叉反應(yīng)物質(zhì)進(jìn)行驗證，應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗證物質(zhì)的來源、制備、濃度等基本信息。

4.8測量區(qū)間及可報告區(qū)間

4.8.1線性區(qū)間

線性區(qū)間的研究所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的至少9個不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測次數(shù)。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)驗證試劑的線性區(qū)間時，需配制覆蓋整個線性區(qū)間的至少5個不同濃度的樣本，每個樣本至少重復(fù)檢測2次。

測量區(qū)間，也稱分析測量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測量程序步驟中的其他前處理情況下，檢測結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測量區(qū)間。

4.8.2可報告區(qū)間

如對超出測量區(qū)間濃度的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報告區(qū)間?？蓤蟾鎱^(qū)間下限為檢出限，上限為測量區(qū)間上限╳稀釋倍數(shù)。

4.9試劑空白

4.9.1試劑空白吸光度

用生理鹽水測試試劑（盒），在37℃、340nm 波長、1cm光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1）和約5 分鐘（t）后的吸光度（A2），A2測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值。

4.9.2試劑空白吸光度變化率

記錄測試啟動時的吸光度（A1）和n分鐘(t)后的吸光度（A2），計算出每分鐘吸光度變化值 (|A2-A1|/t )，即為試劑空白吸光度變化率（ΔA/min）。

4.10分析靈敏度

用已知活性的樣品測試試劑（盒），記錄試劑（盒）在37℃、340nm波長、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照申請人規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度。

5.穩(wěn)定性研究

一般應(yīng)包含研究方案、報告和數(shù)據(jù)三部分內(nèi)容。

5.1實時穩(wěn)定性

提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

5.2使用穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開瓶穩(wěn)定性。適用時提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。機(jī)載穩(wěn)定性應(yīng)選擇所有機(jī)型進(jìn)行真實機(jī)載研究，如不同機(jī)型間試劑倉設(shè)計、進(jìn)樣模式、溫濕度范圍等無差異，也可選擇代表性機(jī)型研究。如產(chǎn)品中包含校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

5.3運輸穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。運輸穩(wěn)定性研究可結(jié)合于實時穩(wěn)定性研究中。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究。

試劑穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】中進(jìn)行詳細(xì)描述。

6.參考區(qū)間

申報產(chǎn)品可以建立自己的參考區(qū)間或驗證參考區(qū)間，但都要確保參考區(qū)間的可溯源性，記錄確定參考區(qū)間的所有步驟，包括參考個體的選擇、分析前因素、樣本檢測以及統(tǒng)計分析方法等。

如參考已發(fā)布實施的臨床檢測參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)等驗證參考區(qū)間，應(yīng)依據(jù)《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則》中“（二）參考區(qū)間的驗證”章節(jié)相關(guān)條件進(jìn)行驗證，如驗證通過，可直接采用經(jīng)驗證的參考區(qū)間；如驗證不通過，應(yīng)建立參考區(qū)間。

參考區(qū)間的建立應(yīng)參考《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則》中“（一）參考區(qū)間的建立”章節(jié)相關(guān)要求，提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。研究樣本來源應(yīng)覆蓋年齡、性別等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，研究例數(shù)通常應(yīng)不低于120例。（注：研究例數(shù)不低于120例是為了保證能正確估計參考限的90%置信區(qū)間。申請人應(yīng)根據(jù)預(yù)設(shè)的置信水平進(jìn)行樣本研究例數(shù)的選擇并符合統(tǒng)計學(xué)要求。）α-羥丁酸脫氫酶不同年齡階段（嬰兒、兒童及成人）參考區(qū)間有差異，申請人可根據(jù)實際情況進(jìn)行分組研究，例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。

7.其他資料

7.1三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

7.2證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。

（四）臨床評價資料

根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，該項目已列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行臨床評價。

申請人也可通過臨床試驗的方式進(jìn)行臨床評價；如申請人無法按要求進(jìn)行臨床評價或預(yù)期用途超出豁免目錄中的描述，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗；臨床試驗的倫理、方案的制定以及報告的撰寫等臨床試驗資料均應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》對臨床試驗資料的規(guī)定，相關(guān)資料簽章應(yīng)符合《醫(yī)療器械臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》和《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

境外試劑應(yīng)當(dāng)提交產(chǎn)品原文說明書，中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。

以下內(nèi)容僅對α-羥丁酸脫氫酶測定試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：α-羥丁酸脫氫酶測定試劑盒（α-酮丁酸底物法）。

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進(jìn)行表述。如有貨號，可增加貨號信息。

2.1包裝規(guī)格應(yīng)明確裝量（如××mL；××人份）；

2.2帶有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品應(yīng)明確標(biāo)識；

2.3與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格一致；

2.4如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，應(yīng)同時明確適用機(jī)型。

3.【預(yù)期用途】

首段內(nèi)容說明試劑用于體外定量檢測人樣本（血清或血漿）中α-羥丁酸脫氫酶的活性。第二段應(yīng)詳細(xì)說明預(yù)期用途。包括適用人群，相關(guān)的臨床適應(yīng)證和檢測目的等，如臨床上主要用于心肌梗死的輔助診斷。

其余段落對被測分析物進(jìn)行背景介紹、說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法；說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床背景情況；說明被測分析物與臨床適應(yīng)證的關(guān)系。

如：α-HBDH是乳酸脫氫酶同工酶（LDH）的一種，主要代表LDH1和LDH2的活性，在心臟分布較多。血清α-HBDH升高常見于心臟疾病心肌梗死、心肌炎等；溶血性貧血時血清α-HBDH增高；血清α-HBDH/LDH比值可用于心臟疾病和肝臟疾病的鑒別診斷。α-羥丁酸脫氫酶測定目前廣泛應(yīng)用的方法為α-酮丁酸底物法。

4.【檢驗原理】

根據(jù)產(chǎn)品采用的方法學(xué)說明檢驗的原理，檢測原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述，必要時可結(jié)合圖示方法描述。

如：樣本中α-羥丁酸脫氫酶催化α-酮丁酸還原為α-羥丁酸，同時還原型NADH被氧化為氧化型NAD+；在特定波長下，NADH的消耗速率與血清α-HBDH濃度成正比，從而計算出α-HBDH的含量。

反應(yīng)式如下：

5.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

5.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、裝量。說明各組分中的核心反應(yīng)成分（如α-酮丁酸，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH））、基質(zhì)（如磷酸鹽緩沖液）、防腐劑等。必要時，明確組分在基質(zhì)中的濃度、比例等信息。對于多組分產(chǎn)品，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2產(chǎn)品如包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，說明濃度水平、核心反應(yīng)成分及其生物學(xué)來源，明確基質(zhì)、防腐劑等。此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確定值及其溯源性，質(zhì)控品應(yīng)注明靶值和靶值范圍，若校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的值為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值。

5.3試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組分，應(yīng)列明試劑的名稱、注冊人（備案人）。如該試劑已取得注冊證號/備案號，需注明“注冊證編號（備案編號）及貨號”；如該試劑正處于注冊/備案階段，需注明“貨號及注冊證編號:（留空）/備案編號:（留空）”。

6.【儲存條件及有效期】

首段明確貨架保存條件和有效期，如2~8℃保存，有效期12個月。同時明確特殊保存條件，如禁止冷凍、光線和濕度要求等。

其他段落描述以下內(nèi)容：

明確各組分的使用穩(wěn)定性，包括開封保存條件和保存時長、凍融次數(shù)、機(jī)載穩(wěn)定性等。

明確生產(chǎn)日期、使用期限/失效日期/有效期至見標(biāo)簽。

若各組分的保存條件不一致，應(yīng)分別描述。

若各組分的有效期不同，則試劑盒的有效期為最短保存時間。

保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。

7.【適用儀器】

明確所適用的儀器類型，應(yīng)細(xì)化到具體廠家、型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以便指導(dǎo)用戶操作。如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號，避免“系列”。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

8.1樣本的類型：明確適用的樣本類型，如有抗凝血應(yīng)明確抗凝劑。

8.2樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。以上內(nèi)容應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究結(jié)果一致。

9.【檢驗方法】

應(yīng)詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：  

9.1樣本的處理：詳細(xì)描述樣本的處理方式和步驟，需要稀釋的樣本應(yīng)明確稀釋液種類及稀釋比例。

9.2試劑配制：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序等。

9.3反應(yīng)步驟、反應(yīng)體系和參數(shù)設(shè)置：詳細(xì)描述反應(yīng)步驟和各反應(yīng)步驟所需試驗條件，如pH值、時間、溫度、波長等。明確樣本和檢測過程中各組分的用量體積。

9.4校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。校準(zhǔn)有效期及需要重新校準(zhǔn)的情況。推薦的校準(zhǔn)周期。

9.5質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.6試驗結(jié)果的計算或讀取，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋（如適用）。如果可能，應(yīng)舉例說明。

10.【參考區(qū)間】

明確參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間的確定方法。應(yīng)包含參考區(qū)間確定的基本信息，包括：樣本量、參考人群特征（如性別、年齡、種族等）和采用的統(tǒng)計學(xué)方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

11.1應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。

11.2說明在何種情況下應(yīng)對樣本進(jìn)行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。

11.3若超過線性區(qū)間上限的高濃度樣本可稀釋后檢測，則應(yīng)說明樣本的最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息。

12.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

12.1明確常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，企業(yè)可根據(jù)自身情況對特殊干擾物進(jìn)行說明，并注明可接受的最高限值，不應(yīng)使用模糊的描述方式。

12.2分析異常值出現(xiàn)的可能因素，明確說明何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗，詳述在確認(rèn)試驗時對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

此項內(nèi)容為分析性能研究資料和臨床評價資料的總結(jié)，應(yīng):

13.1概括描述每項分析性能研究如準(zhǔn)確度/正確度、精密度、靈敏度、測量區(qū)間及可報告區(qū)間、分析特異性等適用項目的研究方法和結(jié)果。

13.2概括描述臨床評價包括免于臨床試驗的臨床評價和臨床試驗的方法和結(jié)果。

14.【注意事項】

建議包括以下內(nèi)容：

14.1產(chǎn)品僅用于體外診斷。檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

14.2如無確切的證據(jù)證明其安全性，對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護(hù)措施。若試劑組分中，如質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等含有人源物質(zhì)的組分，這些組分亦應(yīng)該被視為傳染源對待；對于動物源性組分，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。

14.4其他需要說明的注意事項。

（六）質(zhì)量管理體系文件

申請人應(yīng)當(dāng)在申請注冊時提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料，主要包括綜述、生產(chǎn)制造信息、質(zhì)量管理體系程序、管理職責(zé)程序、資源管理程序、產(chǎn)品實現(xiàn)程序、質(zhì)量管理體系的測量、分析和改進(jìn)程序、其他質(zhì)量體系程序信息、質(zhì)量管理體系核查文件等內(nèi)容。

三、參考文獻(xiàn)

[1]尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015.

[2]CLSI EP28-A3c, Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition[S].

[3]國家市場監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法:國家市場監(jiān)督管理總局令第48號[Z].

[4]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明:國家藥監(jiān)局通告2021年第122號[Z].

[5]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單:國家藥監(jiān)局公告2021年第122號[Z].

[6]國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2022年第8號[Z].

[7]國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定:國家藥監(jiān)局公告2021年第126號[Z].

[8]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心通告2022年第32號[Z].

[9]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布定性檢測體外診斷試劑分析性能評估等6項醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊審查指導(dǎo)原則通告2022年第36號[Z].

[10]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗體外診斷試劑目錄：國家藥監(jiān)局通告2021年第70號[Z].

[11]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2021年第72號[Z].

[12]國家藥監(jiān)局 國家衛(wèi)生健康委.醫(yī)療器械臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范:國家藥監(jiān)局 國家衛(wèi)生健康委公告2022年第28號[Z].

[13]國家食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定:國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號[Z].

[14]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑主要原材料研究注冊審查指導(dǎo)原則等12項注冊審查指導(dǎo)原則的通告2024年第1號[Z].

[15]YY/T 1789.1-2021,體外診斷檢驗系統(tǒng)性能評價方法:第1部分：精密度[S].

[16]GB/T 26124-2011,臨床化學(xué)體外診斷試劑盒[S].

[17]YY/T 1242-2014,α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑（盒）[S].