附件：D-二聚體測定試劑（免疫比濁法）注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年第9號）.doc

D-二聚體測定試劑（免疫比濁法）
注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對D-二聚體測定試劑（免疫比濁法）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對D-二聚體測定試劑（免疫比濁法）的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

從方法學考慮，在本文中D-二聚體測定試劑是指以膠乳凝集免疫比濁法為基本原理，利用全自動、半自動凝血分析儀；全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學實驗室對人體血漿樣本中D-二聚體含量進行體外定量分析的試劑。依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號），D-二聚體測定試劑管理類別為二類，分類代號為6840。

本指導(dǎo)原則不適用于：

（一）單獨申請注冊的D-二聚體校準品和質(zhì)控品。

（二）免疫比濁法原理之外的其他D-二聚體測定試劑盒。

二、注冊申報材料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求，下面著重介紹與D-二聚體測定試劑預(yù)期用途有關(guān)的臨床背景情況。

D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化因子ⅩⅢ交聯(lián)后，經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異性降解產(chǎn)物，能夠反映體內(nèi)的凝血功能和纖溶活性，是機體高凝狀態(tài)、血栓形成、繼發(fā)性纖溶亢進的指標。在深靜脈血栓、肺栓塞、彌散性血管內(nèi)凝血、重癥肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓治療后均可見D-二聚體水平升高，可作為溶栓治療的有效觀察指標。由于具有極高的敏感性和陰性預(yù)測值，臨床上已經(jīng)將D-二聚體陰性作為排除肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深靜脈血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依據(jù)。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標準及實驗驗證研究資料；質(zhì)控品、校準品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料；校準品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.檢測方法的介紹：含樣本采集、標準品和質(zhì)控品、測試步驟、結(jié)果計算等。

4.反應(yīng)體系研究：含樣本采集及處理、樣本要求（抗凝劑的選擇）、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件（波長、溫度、時間等）、校準方法（如有）、質(zhì)控方法等的研究資料。

5.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。進行至少三個批次的驗證。對于D-二聚體測定試劑，建議著重對以下分析性能進行研究。

1.精密度

1.1重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，對不同濃度的樣品分別重復(fù)測定10次，計算10次測定結(jié)果的平均值（）和標準差（SD），根據(jù)公式（1）得出變異系數(shù)（CV），結(jié)果均應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標的要求。

1.2批間差

用質(zhì)控血漿（正常血漿和異常血漿）分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測試10次，分別計算兩個水平測量值的平均值（）和標準差（SD），按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。

2.準確度

按以下優(yōu)先順序選擇準確度性能評估方法：

2.1相對偏差

2.1.1用可用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)/有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑進行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果均值（M），按公式（2）計算相對偏差（B）。如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

B=（M-T）/T…………………….（2）

式中：M—測試結(jié)果均值；

T—有證參考物質(zhì)標示值，或各濃度人源樣本定值。

注：首選國家參考物質(zhì)，如無國家參考物質(zhì)再選用國際參考物質(zhì)。

2.1.2對企業(yè)參考品進行檢測

用定值的企業(yè)參考品對試劑進行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果均值（M），按公式（2）計算相對偏差（B）。如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.2比對實驗

參考《體外診斷試劑分析性能評估（準確度—方法學比對）技術(shù)審查指導(dǎo)原則》及CLSI的EP9—A2《用患者樣本進行方法比對及偏倚估：批準指南——第二版》進行準確度評估。

方法：用不少于40個覆蓋檢測濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，以生產(chǎn)企業(yè)指定的試劑作為比對方法，每份樣品按待測試劑及比對試劑的操作方法分別檢測。線性回歸計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）、斜率及偏差，結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.3回收實驗

參考《體外診斷試劑分析性能評估（準確度—回收實驗）技術(shù)審查指導(dǎo)原則》（食藥監(jiān)辦械函〔2011〕116號）要求完成準確度評估。

方法：選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3—4份，在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標準液制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積的10%，制成2—3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行3次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進行下述計算。

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告：

用公式（3）計算回收率：

式中：R—回收率；

V—加入待測物標準液的體積；

V0—基礎(chǔ)樣本的體積

C—基礎(chǔ)樣本加入待測標準物質(zhì)后的檢測濃度；

C0—基礎(chǔ)樣本的檢測濃度；

Cs—待測物標準液的濃度。

3.線性

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似。在濃度梯度的選擇上，應(yīng)使用具有溯源性的具有濃度差的樣本，或經(jīng)上一級方法或臨床已注冊上市的試劑盒驗證其測值真實性的樣本，樣本濃度應(yīng)適當覆蓋其線性范圍。線性范圍不得窄于企業(yè)預(yù)期的測定范圍。用接近D-二聚體測試區(qū)間上限的高濃度樣品和緩沖液稀釋成至少5個稀釋濃度（xi）；每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。不強制要求企業(yè)對線性范圍內(nèi)的偏差進行分段評估，如不分段，各濃度的相對偏差應(yīng)≤±10%。如分段，則分界點設(shè)置不宜過高，高于分界點的濃度相對偏差應(yīng)≤±10%，低于分界點的濃度絕對偏差應(yīng)不高于分界點濃度的±10%。

目前，國內(nèi)外廠家的線性區(qū)間一般為0.5—30μg/mL（DDU單位）或0.2—4μg/mL（FEU單位）。

4.特異性

4.1溶血（血紅蛋白）、脂血（甘油三酯）、黃疸（膽紅素）、類風濕因子等干擾因素對檢測結(jié)果的影響。

4.2樣本中其他可能干擾試劑反應(yīng)的物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

4.3資料中所提到的干擾物質(zhì)，其干擾程度均不應(yīng)使用模糊的描述方式，而應(yīng)細化到干擾量，并提供相應(yīng)的試驗數(shù)據(jù)予以支持。

5.校準品及質(zhì)控品

參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準品、質(zhì)控品的賦值結(jié)果的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性，以及其賦值結(jié)果的準確度進行評價。如校準品或質(zhì)控品的基體不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交校準物質(zhì)互換性的相關(guān)研究資料。

6.其他需注意問題

6.1對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有適用機型的性能評估資料。

6.2如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

6.3試劑空白吸光度、分析靈敏度，執(zhí)行GB/T 26124—2011臨床化學體外診斷試劑中有關(guān)要求。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交驗證參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。

應(yīng)明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應(yīng)低于120例。

參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。

特別強調(diào)：D-二聚體參考區(qū)間的確定對于靜脈血栓形成的排除診斷至關(guān)重要。傳統(tǒng)的以正常人群測定結(jié)果分布的95%置信區(qū)間作為參考區(qū)間的方法對于本產(chǎn)品幫助不大。應(yīng)以可獲得深靜脈血栓形成診斷最佳敏感性或陰性預(yù)測值作為臨界值的判斷指標。各實驗室應(yīng)該以對疑診深靜脈血栓形成的患者經(jīng)過客觀影像學檢驗證實的臨床研究中確立針對該特定檢測方法和特定人群的檢測界限。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究主要包括注冊單元中所有組成部分的效期穩(wěn)定性及開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，如有需要可增加運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性、樣本穩(wěn)定性研究等。如試劑需要配制，還應(yīng)對配制后試劑的穩(wěn)定性進行研究。企業(yè)可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。常用的穩(wěn)定性研究方案為證實試劑在經(jīng)過被作用于指定條件后，仍能滿足主要性能指標要求與未被作用于指定條件的試劑性能一致。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

（七）臨床評價資料

按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）及《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）執(zhí)行。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準上市的性能相近的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為對比試劑。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇

應(yīng)選擇至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗機構(gòu)，臨床機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)充分熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準、保養(yǎng)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗開展前，應(yīng)按《關(guān)于醫(yī)療器械臨床試驗備案有關(guān)事宜的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2015年第87號）有關(guān)要求進行臨床備案，備案后方實施臨床試驗。

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設(shè)計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應(yīng)當按照試驗用體外診斷試劑的類別、風險、預(yù)期用途等特性，組織制定科學、合理的臨床試驗方案。一般應(yīng)當包括以下內(nèi)容：

（1）一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關(guān)信息、申請人相關(guān)信息等）。

（2）臨床試驗的背景資料。

（3）試驗?zāi)康摹?

（4）試驗設(shè)計。

（5）評價方法。

（6）統(tǒng)計方法。

（7）對臨床試驗方案修正的規(guī)定。

（8）臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）。

（9）數(shù)據(jù)處理與記錄保存。

（10）其他需要說明的內(nèi)容。

4.研究對象的選擇

選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標準時，樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。D-二聚體檢測樣本通常為血漿，總體樣本數(shù)不少于200例，正常值樣本不少于30％。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍。

申報的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗中進行驗證。如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；變更抗體等主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、離心速度及時間要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

方案中需要增加陰性預(yù)測率的驗證，方法依據(jù)YY/T 1240—2014《D-二聚體定量測定試劑盒》中附錄中要求。

5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚圖和相對偏倚圖等。建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標準”或其他合理的方法進行復(fù)核，以便對臨床試驗結(jié)果進行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細說明理由。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

申請人或臨床試驗牽頭單位應(yīng)對各臨床試驗機構(gòu)的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結(jié)報告。

7.1首篇

首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應(yīng)包含該部分內(nèi)容。

7.1.1封面標題

包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構(gòu)（蓋章）、統(tǒng)計學負責人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄

列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應(yīng)頁碼。

7.1.3研究摘要

對臨床試驗情況進行簡單的介紹。

7.1.4試驗研究人員

列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語

臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

7.2正文內(nèi)容和報告格式

7.2.1基本內(nèi)容

介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關(guān)的背景情況：包括①被測物的來源、生物及理化性質(zhì)；②臨床預(yù)期使用目的，所針對的目標適應(yīng)癥人群，目前針對該適應(yīng)癥所采用的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等；③所采用的方法、原理、技術(shù)要求等；④國內(nèi)外已批準上市產(chǎn)品的應(yīng)用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構(gòu)間的合作關(guān)系。

7.2.2研究目的

說明本臨床試驗所要達到的目的。

7.2.3試驗管理

對試驗管理結(jié)構(gòu)的描述。

管理結(jié)構(gòu)包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質(zhì)量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設(shè)計。

7.2.4.1試驗總體設(shè)計及方案的描述。

試驗的總體設(shè)計和方案的描述應(yīng)清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應(yīng)詳細敘述。應(yīng)包括：

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

②病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準。

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

④統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

7.2.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇。

試驗設(shè)計中應(yīng)包括以下內(nèi)容：

①樣本量及樣本量確定的依據(jù)。

②樣本選擇依據(jù)、入選標準、排除標準和剔除標準。

③樣本采集、保存、運輸方法等。

④對比試劑的確立。

⑤臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，參比試劑的注冊情況。

⑥質(zhì)量控制方法。對質(zhì)量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。

⑦臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法。應(yīng)注重與比對試劑是否有統(tǒng)計學差異。

a.數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

b.定量值相關(guān)性和一致性分析。

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學差異。

⑧具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

⑨試驗過程中方案的修改。

一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應(yīng)說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結(jié)果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結(jié)果及分析。

7.2.6討論和結(jié)論。對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

7.3有關(guān)臨床試驗中特別情況的說明。

7.4附件。

7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復(fù)核者簽字，臨床試驗機構(gòu)蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻。

7.4.4主要研究者簡歷。

7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。如已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則企業(yè)技術(shù)要求的要求不得低于其相關(guān)要求。目前該產(chǎn)品可依據(jù)的國家或行業(yè)標準有GB/T 26124—2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》、YY/T 1255—2015《免疫比濁法檢測試劑（盒）（透射法）》、YY/T 1240—2014《D-二聚體定量檢測試劑（盒）》，其中在YY/T 1240—2014標準中的陰性預(yù)測率指標可以在臨床評價時進行驗證，不推薦列入技術(shù)要求指標中。

作為定量檢測試劑，D-二聚體檢測產(chǎn)品的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標：外觀、裝量、空白限、測試區(qū)間或線性范圍、重復(fù)性、準確度、批間差等。各性能指標的檢驗方法應(yīng)清晰明了且具可操作性。

下面就技術(shù)要求中涉及的相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明

明確試劑的組成及規(guī)格。

2.性能指標

2.1外觀

外觀應(yīng)符合如下要求：

2.1.1試劑盒外觀整潔，文字符號標識清晰。

2.1.2緩沖液應(yīng)為透明溶液，無沉淀或絮狀物。

2.1.3乳膠試劑應(yīng)為均勻乳濁液（干粉試劑復(fù)溶后應(yīng)達到此要求）。

2.2裝量

液體試劑的裝量應(yīng)不少于標示值。

2.3空白限

應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.4測試區(qū)間或線性范圍

2.4.1線性區(qū)間內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)大于0.980。線性區(qū)間至少涵蓋生產(chǎn)企業(yè)提供的用于排除靜脈血栓臨界值的1/2—4倍的臨床標本測定值。

2.4.2應(yīng)規(guī)定線性偏差，可根據(jù)實際情況，在線性區(qū)間的不同分段以絕對偏差或相對偏差表示。

2.5重復(fù)性

用正常質(zhì)控血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%，用高值質(zhì)控異常血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%。

2.6批間差

用質(zhì)控血漿重復(fù)測試不同批號試劑盒，正常血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%，用高值質(zhì)控異常血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.7準確度

應(yīng)規(guī)定準確度要求。（按相對偏差、回收實驗、比對實驗優(yōu)先順序）

2.8穩(wěn)定性

應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品有效期，取到效期后一定時間內(nèi)的樣品檢測試劑空白限、線性、重復(fù)性、準確性，應(yīng)符合規(guī)定要求。

3.檢驗方法

3.1外觀

目測檢查，應(yīng)符合2.1的要求。

3.2裝量

用適用的通用量具測量，應(yīng)符合2.2的要求。

3.3空白限

用試劑測試空白樣本，重復(fù)測試20次，計算20次測試結(jié)果的平均值X和標準差SD，X+2SD應(yīng)不大于空白限值。

3.4測試區(qū)間或線性范圍

用接近D-二聚體測試區(qū)間上限的高濃度樣本和緩沖液稀釋成至少5個稀釋濃度（xi），每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（4）計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.4的要求。

將稀釋濃度xi代入線性回歸方程，計算yi測試均值與相應(yīng)估計值的相對偏差。

3.5重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，用正常質(zhì)控血漿和異常質(zhì)控血漿分別重復(fù)測試10次，并計算測量值的平均值（）和標準差（SD）。按公式（5）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.5的要求。

式中：

CV—變異系數(shù)

SD—標準差

x—測量值得平均值

3.6批間差

用正常質(zhì)控血漿和異常質(zhì)控血漿分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測試10次，計算兩個水平測量值的平均值（x）和標準差（SD）。按公式（3）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.4.2的要求。

3.7準確度

方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.7的要求。

3.8穩(wěn)定性

取到效期后一定時間內(nèi)的產(chǎn)品，按照空白限、線性、重復(fù)性、準確性檢測方法進行檢測，應(yīng)符合2.8的要求。

如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，其性能指標的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)當包括準確度、均勻性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性的檢驗方法的詳細描述。

（九）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行注冊檢測。承接注冊檢測的機構(gòu)在出具檢測報告的同時，應(yīng)出具相應(yīng)的檢測預(yù)評價表，預(yù)評價表在提交注冊資料時應(yīng)隨注冊檢測資料時一并提交。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

在符合《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）的第十條、第十一條前提下，結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，以申報產(chǎn)品為基礎(chǔ)，以研究結(jié)果為依據(jù)，對D-二聚體測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：D-二聚體測定試劑盒（免疫比濁法）。名稱中不應(yīng)當出現(xiàn)定性/定量等內(nèi)容。

2.【包裝規(guī)格】

2.1應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致。

2.2應(yīng)能清晰地描述出試劑盒的構(gòu)成，不得出現(xiàn)試劑盒的組成成分與包裝規(guī)格中描述不一致的情況。

2.3應(yīng)注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××mL。

2.4如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，則應(yīng)同時明確適用機型。

3.【預(yù)期用途】

3.1第一段說明試劑盒用于體外定量測定血漿中D-二聚體的含量。

3.2第二段應(yīng)強調(diào)臨床適應(yīng)癥（可使用不同的描述方式）：①D-二聚體是在交聯(lián)纖維蛋白降解中的一個特征性產(chǎn)物，在深靜脈血栓、肺栓塞、彌散性血管內(nèi)凝血、重癥肝炎等疾病中升高。②可作為溶栓治療的有效觀察指標。③陳舊性血栓患者并不升高。

4.【檢驗原理】

應(yīng)詳細闡明試劑的工作原理，D-二聚體測定采用膠乳免疫比濁法原理：樣本中的D-二聚體與抗人D-二聚體單克隆抗體膠乳增強顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，產(chǎn)生凝集以致濁度上升。在一定波長下，通過測試濁度引起光散射或透射的改變而求出樣本中D-二聚體的含量。

5.【主要組成成分】

5.1說明試劑盒包含組分的名稱信息，如果對于正確的操作或使用者理解其用途很重要，應(yīng)詳細說明。對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2如注冊單元含校準品或質(zhì)控品也應(yīng)對主要組成成分及生物學來源進行相應(yīng)說明，校準品需注明其定值及溯源性。溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標準物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號。

如：校準品為D-二聚體凍干品，校準品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標示，量值可溯源至公司內(nèi)部參考物質(zhì)。

質(zhì)控品需注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6.【儲存條件及有效期】

6.1對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細介紹，包括環(huán)境溫度、避光條件等。如注冊單元含校準品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細介紹。如試劑需要配制，則應(yīng)對配制后的試劑的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細介紹。

6.2保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。小于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以日或小時為單位，大于或等于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以月為單位。

6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.5增加“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期：見標簽”的字樣。

7.【適用機型】

注明所適用的儀器類型，應(yīng)細化到型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以指導(dǎo)用戶操作。

寫明具體型號，避免“系列”。

8.【樣本要求】

應(yīng)在以下幾方面進行說明：

8.1適用的樣本類型。

8.2在樣本收集過程中的特別注意事項。

8.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等。

8.4已知的干擾物。

8.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法。

9.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序。

9.2應(yīng)滿足的試驗條件：如pH、溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準程序（如有）：應(yīng)說明校準品的使用方法、注意事項、推薦的校準周期，以及何種情況須重新校準。

9.4質(zhì)量控制程序：應(yīng)說明質(zhì)控品的使用方法、注意事項、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.5試驗結(jié)果的計算或讀取，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。

10.【參考區(qū)間】

簡要說明陽性判斷值或者參考區(qū)間的確定方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

D-二聚體參考區(qū)間的確定對于靜脈血栓形成的排除診斷至關(guān)重要。應(yīng)以可獲得深靜脈血栓形成診斷最佳敏感性或陰性預(yù)測值作為臨界值的判斷指標。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進行合理的解釋。

說明試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮。

說明在何種情況下應(yīng)對樣本進行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。

由于不同試劑所檢測的抗原決定簇的差異導(dǎo)致結(jié)果不具可比性。

強調(diào)當檢測結(jié)果超過線性范圍時是否適用稀釋檢測的處理方式。如不適用，應(yīng)說明。如適用，說明最大稀釋倍數(shù)，并提供獲得最大稀釋倍數(shù)的研究資料。

D-二聚體是繼發(fā)性纖溶亢進診斷的重要依據(jù)，是機體活動性血栓形成的特異性分子標志物。其報告的兩種形式DDU和FEU之間不能轉(zhuǎn)換。

D-D陰性患者（假陰性），仍有極少數(shù)患者伴靜脈血栓，其原因是：①血栓體積很小、遠端小血栓；②放射線、超聲檢查出現(xiàn)假陽性；③臨床表現(xiàn)與標本采集時間相隔太長；④纖溶活性降低。

孕婦D-D值隨著妊娠期的發(fā)展逐漸升高，可高至基礎(chǔ)值的3—4倍，故結(jié)果判斷時尤其引起注意。妊娠期發(fā)生VTE，可干擾D-D排除VTE的有效性。若D-D結(jié)果陰性，仍有排除VTE的價值。

D-D檢測對抗凝治療的監(jiān)測：抗凝治療過程中（3—6個月），D-D值逐漸減低。若停用抗凝劑，D-D值水平正常則對復(fù)發(fā)VTE有較高的陰性預(yù)測值（NPV），所以D-D檢測對監(jiān)測抗凝治療有指導(dǎo)意義。

12.【檢驗方法的局限性】

明確常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，企業(yè)可根據(jù)自身情況對特殊干擾物進行說明，并注明可接受的最高限值，不應(yīng)使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。

試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)，為達到診斷目的，此檢測結(jié)果要與臨床檢查、病史和其他的檢查結(jié)果結(jié)合適用。

13.【產(chǎn)品性能指標】

13.1陰性預(yù)測率

用于靜脈血栓排除時，結(jié)合臨床診斷的驗前概率進行D-二聚體定量檢測，其陰性預(yù)測率應(yīng)不低于97%。

13.2測試區(qū)間或線性

在測試區(qū)間內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)大于0.980；

測試區(qū)間至少涵蓋生產(chǎn)企業(yè)提供的用于排除靜脈血栓臨界值的1/2—4倍的臨床標本測定值。

如對線性范圍內(nèi)的偏差進行分段評估，說明線性分界點及分界點兩側(cè)象限各自的偏差評價方式及偏差允許范圍。

13.3重復(fù)性

用正常質(zhì)控血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%，用高值質(zhì)控異常血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%。

13.4批間差

用質(zhì)控血漿重復(fù)測試不同批號試劑盒，正常血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%，用高值質(zhì)控異常血漿重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

13.5準確度以相對偏差、回收率或比對實驗結(jié)果的相關(guān)系數(shù)、斜率及偏差表示。

14.【注意事項】

14.1應(yīng)明確“本品僅用于體外診斷”。

14.2如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

說明不同分析系統(tǒng)間的檢測結(jié)果可能存在的差異。

說明對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.3說明檢測過程中應(yīng)嚴格按照說明書提供的操作步驟及相關(guān)實驗室規(guī)范要求進行操作，否則可能對結(jié)果造成的影響。

14.4說明樣本處理后放置時間對檢測結(jié)果的影響。

14.5說明質(zhì)控檢測結(jié)果對臨床檢測結(jié)果的重要性。

14.6其他需要說明的注意事項。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。可參考相關(guān)標準：YY/T 0466.1—2016。

16.【參考文獻】

注明引用參考文獻，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一，符合相關(guān)標準要求。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑

按照以下格式標注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18．【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

應(yīng)當寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19．【說明書核準日期及修改日期】

應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點

（一）關(guān)注檢驗報告中檢測結(jié)果的報告方式，D-二聚體的結(jié)果報告方式分為兩種：FEU—纖維蛋白原當量單位和DDU—D-二聚體單位。應(yīng)直接采用生產(chǎn)企業(yè)提供的單位，不應(yīng)進行兩個單位的轉(zhuǎn)換。

（二）關(guān)注產(chǎn)品技術(shù)要求及說明書中性能指標的確定，由于適用機型不同，試劑性能指標等方面存在差異，審查時予以關(guān)注。如適用機型包含全自動生化分析儀，則需要根據(jù)GB/T 26124—2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》、YY/T 1255—2015《免疫比濁法檢測試劑（盒）（透射法）》增加分析靈敏度、準確度等性能指標。如僅適用凝血分析儀，可依據(jù)YY/T 1240—2014《D-二聚體定量檢測試劑（盒）》考核性能指標。

（三）關(guān)注臨床試驗所采用的樣本類型、樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（四）由于陰性預(yù)測率屬于臨床性能指標，注冊檢測過程存在一定的難度，因此本指導(dǎo)原則不推薦在注冊檢測中驗證，可在臨床評價中進行。如注冊人未在產(chǎn)品技術(shù)要求中對該指標進行描述或給出指標，則應(yīng)關(guān)注其臨床研究報告。另外此指標需在說明書中進行描述。

（五）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標、抗干擾能力等描述應(yīng)分別與臨床評價資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考范圍研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

四、編寫單位

吉林省食品藥品監(jiān)督管理局。