附件：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2017年第52號(hào)）.doc

胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）
檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）注冊(cè)技術(shù)
審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對(duì)該類試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要詳細(xì)闡明理由，并對(duì)其科學(xué)合理性進(jìn)行驗(yàn)證，提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

胎兒染色體非整倍體（Fetal Chromosome Aneuploidies）中的21三體、18三體、13三體（Trisomies 21、Trisomies 18、Trisomies13，即T21、T18、T13）是臨床上最常見的染色體非整倍體疾病。其對(duì)應(yīng)的分別為21-三體綜合征（又稱唐氏綜合征，先天愚型或Down綜合征）、18-三體綜合征（又稱Edwards綜合征）和13-三體綜合征（又稱Patau綜合征），發(fā)病率分別約為1/700、1/6000、1/10000，患兒絕大多數(shù)存在嚴(yán)重智力障礙及器官畸形。

產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷是為避免產(chǎn)生遺傳缺陷患兒提供的手段。常規(guī)的產(chǎn)前篩查方法包括：早孕期的超聲與血清學(xué)聯(lián)合篩查和中孕期母體血清學(xué)篩查。篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦經(jīng)建議經(jīng)產(chǎn)前診斷進(jìn)行最終確認(rèn)，由孕婦知情選擇。胎兒染色體異常的產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)為介入前產(chǎn)前診斷手術(shù),是指通過(guò)絨毛取材術(shù)/羊膜腔穿刺術(shù)/經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)，取相應(yīng)細(xì)胞采用細(xì)胞生物學(xué)方法對(duì)胎兒染色體進(jìn)行核型分析。

高通量測(cè)序方法檢測(cè)胎兒染色體非整倍體的原理是：孕婦母體血漿中存在胎兒游離DNA（cell-free DNA，cfDNA），長(zhǎng)度約為75bp—250bp，幾乎全部來(lái)源于胎盤的滋養(yǎng)層細(xì)胞，其濃度和孕周密切相關(guān)并以一定比例（5%—30%）穩(wěn)定存在于母體外周血漿中。高通量測(cè)序方法通過(guò)取母體血漿提取包含正常母體和胎兒的血漿游離DNA，經(jīng)文庫(kù)構(gòu)建，片段擴(kuò)增等，最后進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，通過(guò)軟件分析數(shù)據(jù)獲得染色體數(shù)目評(píng)價(jià)結(jié)果。以檢測(cè)21三體綜合征為例，當(dāng)對(duì)懷有T21胎兒的母體血漿游離DNA數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)，其21號(hào)染色體游離DNA總數(shù)會(huì)有小比例的升高，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)算法區(qū)分這一微小差異來(lái)實(shí)現(xiàn)利用cfDNA進(jìn)行胎兒染色體非整倍體的產(chǎn)前篩查。但高通量測(cè)序法不能對(duì)染色體結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行檢測(cè)，不能代替?zhèn)鹘y(tǒng)篩查中的開放式神經(jīng)管缺陷篩查等。

本指導(dǎo)原則所述的胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）是指通過(guò)高通量測(cè)序法檢測(cè)孕婦外周血血漿中胎兒游離脫氧核糖核酸（DNA），通過(guò)分析樣本中的胎兒游離DNA的21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體數(shù)量的差異，預(yù)期用于對(duì)胎兒染色體非整倍體疾病21-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征進(jìn)行產(chǎn)前篩查的檢測(cè)試劑盒。

本指導(dǎo)原則所述的高通量測(cè)序法，是指通過(guò)文庫(kù)構(gòu)建、片段擴(kuò)增進(jìn)而進(jìn)行上機(jī)測(cè)序的第二代測(cè)序方法，不需要進(jìn)行片段擴(kuò)增的第三代、第四代單分子測(cè)序方法在文中并未涉及。但高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)展迅速，第三代、第四代單分子測(cè)序方法在企業(yè)內(nèi)部參考品設(shè)置、性能評(píng)估或臨床評(píng)價(jià)等處如有適用的方面，可以參照?qǐng)?zhí)行。

本指導(dǎo)原則所述檢測(cè)試劑盒的適用人群為：對(duì)孕周為12+0周及以上的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前篩查，其結(jié)果不能代表對(duì)孕婦懷有三體胎兒的確認(rèn)，產(chǎn)前篩查的結(jié)果必須要經(jīng)過(guò)產(chǎn)前診斷進(jìn)行確認(rèn)。

倫理學(xué)原則應(yīng)遵守國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)及行業(yè)規(guī)定。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他內(nèi)容。其中，其他內(nèi)容包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從方法學(xué)及檢出限等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)，以下簡(jiǎn)稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)，以下簡(jiǎn)稱“公告”）的相關(guān)要求。

綜述資料應(yīng)詳細(xì)闡明檢測(cè)原理，可配合圖示并寫明一個(gè)完整檢測(cè)配合使用的全部試劑及耗材名稱、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)或注冊(cè)證書號(hào)以及詳細(xì)的組成成分。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料的研究資料包括企業(yè)內(nèi)部參考品和完成檢測(cè)所需試劑組成兩部分。

1.企業(yè)內(nèi)部參考品應(yīng)至少包括：陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品、嵌合體參考品，具體要求如下：

1.1陽(yáng)性參考品：應(yīng)采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本。

1.2陰性參考品：應(yīng)包括采用染色體數(shù)目正常胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本，以及采用其他染色體異常胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本。其他染色體異常的陰性參考品由申請(qǐng)人依據(jù)常見染色體異常項(xiàng)目并根據(jù)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控要求自行選擇。

1.3檢測(cè)限參考品：應(yīng)采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按不同比例梯度與正常女性血漿混合的模擬樣本，如5%、3.5%、2.5%等，建議采用95%（n≥20）的陽(yáng)性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)。

1.4嵌合體參考品：由申請(qǐng)人按照對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控要求自行設(shè)定模擬T21、T18和T13嵌合體的組成比例，如70%異常，30%正常；30%異常，70%正常等。

T21、T18、T13及其他染色體異常胎兒DNA片段可由流產(chǎn)組織或羊水細(xì)胞、細(xì)胞系等來(lái)源制備。

申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明企業(yè)內(nèi)部參考品的組成、詳細(xì)說(shuō)明制備及檢定方法、胎兒DNA片段濃度確認(rèn)方式和所占比例的選擇依據(jù)。組成各項(xiàng)企業(yè)內(nèi)部參考品的樣本應(yīng)為不同來(lái)源。

2.完成全部檢測(cè)流程所需試劑一般應(yīng)至少包括：血漿游離DNA提取純化試劑、文庫(kù)構(gòu)建試劑、文庫(kù)定量試劑、測(cè)序試劑、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品以及與之配合使用的測(cè)序芯片和數(shù)據(jù)分析軟件。具體要求如下：

2.1血漿游離DNA提取純化試劑：無(wú)論申報(bào)產(chǎn)品中是否包含，申請(qǐng)人均應(yīng)提交配合使用的提取純化試劑的原理、詳細(xì)組成成分、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)及第一類醫(yī)療器械備案憑證編號(hào)的相關(guān)資料。性能方面需對(duì)該試劑提取的DNA片段長(zhǎng)度范圍準(zhǔn)確性及純度要求，提取效率、重復(fù)性及抗干擾能力進(jìn)行評(píng)估。

2.2文庫(kù)構(gòu)建試劑、文庫(kù)定量試劑、測(cè)序試劑：文庫(kù)構(gòu)建試劑對(duì)片段化的DNA進(jìn)行缺口補(bǔ)平及相應(yīng)部分5’端磷酸化（如需）和3’端去磷酸化（如需），之后使用連接酶加上用于測(cè)序和分析的標(biāo)簽和接頭，構(gòu)建成可以用來(lái)測(cè)序上機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)文庫(kù)；文庫(kù)定量試劑通過(guò)PCR擴(kuò)增及與標(biāo)準(zhǔn)品曲線的比對(duì)，用于定量測(cè)定文庫(kù)濃度，為后續(xù)均一化文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序做準(zhǔn)備，同時(shí)能夠評(píng)估文庫(kù)構(gòu)建的質(zhì)量。文庫(kù)定量時(shí)應(yīng)明確對(duì)文庫(kù)質(zhì)量、片段大小及濃度要求，應(yīng)提供分析圖譜，對(duì)其中參數(shù)進(jìn)行解釋說(shuō)明（如是否有雜峰，產(chǎn)生的原因，是否對(duì)最終結(jié)果產(chǎn)生影響等）。文庫(kù)定量不限于上述方法，也可采用其他方法進(jìn)行，如熒光染料法、Qubit定量等；測(cè)序試劑用于對(duì)均一化的文庫(kù)進(jìn)行片段擴(kuò)增，通過(guò)基因測(cè)序儀捕捉擴(kuò)增過(guò)程中堿基的變化引起的信號(hào)變化來(lái)達(dá)到讀取序列的目的。

以上三種試劑一般由：相應(yīng)功能的酶（末端修復(fù)酶、DNA連接酶、缺口修復(fù)酶DNA聚合酶等）、核苷酸序列（引物、接頭序列、標(biāo)簽序列、文庫(kù)定量標(biāo)準(zhǔn)品）、緩沖液及dNTP組成。具體要求如下：

2.2.1酶：應(yīng)提交純度、活性及功能性試驗(yàn)資料。例如：文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程包括但不限于末端修復(fù)酶、DNA連接酶、缺口修復(fù)聚合酶等，所選擇的酶應(yīng)當(dāng)具有末端突出削平、缺口補(bǔ)平、標(biāo)簽或接頭連接、DNA聚合酶活性。

2.2.2核苷酸序列：應(yīng)提交相應(yīng)的序列組成和純度信息，序列準(zhǔn)確度；引物設(shè)計(jì)應(yīng)提交引物設(shè)計(jì)原則及選擇對(duì)比依據(jù)。

2.2.3緩沖液：應(yīng)明確詳細(xì)的組成及各鹽濃度選擇對(duì)比的依據(jù)。

2.2.4 dNTP：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP，應(yīng)提交對(duì)純度、濃度等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。

2.3陰、陽(yáng)性質(zhì)控品：須能夠監(jiān)控DNA片段提取到最終測(cè)序結(jié)果全過(guò)程，因此應(yīng)當(dāng)由陰、陽(yáng)性（T21、T18和T13）胎兒DNA片段按已知比例與正常女性血漿基質(zhì)混合組成。

2.4測(cè)序芯片：應(yīng)詳細(xì)闡明芯片進(jìn)行片段擴(kuò)增的原理及結(jié)構(gòu)，明確使用芯片型號(hào)，并對(duì)同一次測(cè)序芯片上樣的樣本間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.5數(shù)據(jù)分析軟件：舉例介紹原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估、數(shù)據(jù)處理和篩選的方法，明確數(shù)據(jù)篩選依據(jù)以及使用的算法。

2.6提交不同原材料對(duì)于最終測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量影響的評(píng)估材料。由于各測(cè)序平臺(tái)的技術(shù)側(cè)重點(diǎn)不同，數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估的項(xiàng)目可能存在差異，需考慮包括但不限于以下方面：文庫(kù)濃度、文庫(kù)片段大小、單樣本總序列數(shù)（數(shù)據(jù)量）、唯一比對(duì)率、單次檢測(cè)的GC gap（最高GC值與最低GC值的差值）等。

2.7除上述資料，申請(qǐng)人還應(yīng)提交主要原材料的篩選依據(jù)及試驗(yàn)資料。如為自制，則應(yīng)提交：制備方法、質(zhì)量要求、質(zhì)量檢測(cè)方法、對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料等；如為外購(gòu)，則應(yīng)提交：外購(gòu)證書、質(zhì)量要求、質(zhì)量檢測(cè)方法、對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料等。其中，對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料應(yīng)包括篩選過(guò)程中的數(shù)據(jù)、圖譜、對(duì)比圖表等信息。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝包括配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。所提交申報(bào)資料中應(yīng)包括主要生產(chǎn)工藝介紹和生產(chǎn)工藝流程圖，后者需標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說(shuō)明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

2.反應(yīng)體系研究指完成檢測(cè)所涉及到的最佳反應(yīng)條件的選擇確定過(guò)程，包括對(duì)提取純化步驟、游離DNA片段的末端修復(fù)、接頭及標(biāo)簽連接、文庫(kù)定量、片段擴(kuò)增、測(cè)序反應(yīng)的反應(yīng)條件及反應(yīng)體系的選擇確定，涉及到對(duì)樣本類型、樣本用量、試劑用量、緩沖體系的選擇、反應(yīng)溫度和時(shí)間條件及檢測(cè)過(guò)程中質(zhì)控方法確定的依據(jù)。重點(diǎn)關(guān)注：酶濃度、引物濃度、dNTP濃度、離子濃度、加樣量及反應(yīng)體積、片段擴(kuò)增各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)、測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量的評(píng)估指標(biāo)等，其中加樣量和反應(yīng)體積應(yīng)參考相應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)研究驗(yàn)證后確定。

此外，還應(yīng)對(duì)數(shù)據(jù)量及胎兒游離DNA濃度和比例對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行研究。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交產(chǎn)品在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的全部性能的評(píng)估資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評(píng)估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、人員及數(shù)量、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源（如涉及）等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：

1.最低檢出限：建議使用企業(yè)參考品進(jìn)行梯度稀釋并多次檢測(cè)，將具有95%陽(yáng)性檢出率的胎兒游離DNA濃度水平作為最低檢出限。企業(yè)參考品應(yīng)使用公認(rèn)的準(zhǔn)確定量方法進(jìn)行，最低檢出限應(yīng)描述為XX DNA濃度下可檢出胎兒DNA的最小百分比。

2.企業(yè)內(nèi)部參考品符合率：對(duì)試劑檢測(cè)企業(yè)內(nèi)部參考品的符合情況進(jìn)行評(píng)估。

3.精密度：精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性，具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

3.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，應(yīng)對(duì)高通量基因測(cè)序儀、操作者、地點(diǎn)、合理的精密度評(píng)價(jià)周期等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

例如：為期至少XX天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。申請(qǐng)人還應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

3.2用于精密度評(píng)價(jià)的模擬樣品和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣品、臨界陽(yáng)性樣品、（中或強(qiáng)）陽(yáng)性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?。精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開始。

4.干擾試驗(yàn)：包括內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物質(zhì)。應(yīng)針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(即“最差條件”)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。內(nèi)源性干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)至少應(yīng)包括膽紅素、游離血紅蛋白、甘油三酯。

5.特異性：對(duì)以下是否干擾T21、T18、T13陰陽(yáng)性的檢出能力進(jìn)行評(píng)價(jià)：

5.1微缺失、微重復(fù)評(píng)價(jià)：申請(qǐng)人應(yīng)采用一定比例的微缺失、微重復(fù)胎兒DNA與正常女性血漿混合制備微缺失、微重復(fù)模擬樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5.2嵌合體評(píng)價(jià)：申請(qǐng)人應(yīng)采用不同嵌合比例的模擬T21、T18和T13嵌合體樣本對(duì)試劑檢測(cè)嵌合體的能力進(jìn)行評(píng)估，對(duì)不能檢測(cè)到的模擬嵌合體的嵌合比例進(jìn)行確認(rèn)。

5.3對(duì)其他常見染色體樣本的干擾進(jìn)行評(píng)價(jià)。

微缺失微重復(fù)模擬樣本、嵌合體模擬樣本及其他常見染色體樣本的類型和數(shù)量由申請(qǐng)人選擇確定，并在產(chǎn)品說(shuō)明書中明確。

（五）陽(yáng)性判斷值的確定資料

由于目前胎兒染色體非整倍體T13、T18、T21的陽(yáng)性判斷值存在多種計(jì)算方式，且更好的算法和數(shù)據(jù)處理方式仍在不斷開發(fā)中。因此，如申請(qǐng)人選擇了某一算法作為陽(yáng)性判斷值的計(jì)算方式，則應(yīng)詳細(xì)闡述選擇該算法作為陽(yáng)性判斷值依據(jù)的原因（如權(quán)威文獻(xiàn)、行業(yè)共識(shí)等），并詳細(xì)闡述計(jì)算公式和各參數(shù)代表的意義。

以大樣本量常用的Z-值（Z-score）算法來(lái)舉例說(shuō)明：

1.Z-值這個(gè)統(tǒng)計(jì)量反應(yīng)的是當(dāng)前數(shù)值距離平均數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)距離，Z-值的應(yīng)用條件為大樣本量以及數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，計(jì)算公式如下：

1.1chrN z-score for test sample:所檢測(cè)樣本的Z-值；

1.2 N：指定的第N染色體；

1.3%chrNsample：待測(cè)樣品第N條染色體唯一比對(duì)序列數(shù)占常染色體的百分比，通過(guò)高通量測(cè)序后軟件分析獲得；

1.4 Mean%chrNreference：參照樣品第N條染色體比例平均值；

1.5S.D.%chrNreference：參照樣品第N 條染色體比例的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

該公式中，影響唯一比對(duì)序列的因素包括GC含量、檢驗(yàn)覆蓋度等，申請(qǐng)人應(yīng)計(jì)算并統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)覆蓋度是否在正常范圍內(nèi)。參照樣品的數(shù)量、來(lái)源等均對(duì)其數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響Mean%chrNreference和S.D.%chrNreference。因此，申請(qǐng)人需對(duì)參照樣品的數(shù)據(jù)計(jì)算進(jìn)行詳述，并提供計(jì)算值。

2. 被篩查孕婦所懷胎兒的染色體數(shù)量狀況符合正態(tài)分布，即大概率為正常染色體數(shù)量，小概率事件為胎兒染色體非整倍體，如圖1所示：

如圖1可以看出，出現(xiàn)在Z-值為正負(fù)3以外的數(shù)值，則有99.9%的可能為陽(yáng)性，因此，通常將Z-值=3定為陽(yáng)性判斷值分界點(diǎn)，Z-值>3或Z-值<-3判斷為胎兒染色體非整倍體陽(yáng)性。 申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)根據(jù)試驗(yàn)對(duì)Z-值>3及Z-值<-3的情況分別進(jìn)行說(shuō)明。

鑒于并無(wú)100%陰陽(yáng)性分界點(diǎn)，一般來(lái)說(shuō)，申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)定陽(yáng)性判斷值灰區(qū)范圍，灰區(qū)的設(shè)定應(yīng)提交理論和實(shí)際試驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)，并在說(shuō)明書【陽(yáng)性判斷值】和【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】項(xiàng)進(jìn)行解釋說(shuō)明，如：是否需要用產(chǎn)前診斷的方式進(jìn)行最終確認(rèn)，可能的原因，是否需要孕齡再大時(shí)進(jìn)行再次抽血復(fù)測(cè)等等。如無(wú)灰區(qū)設(shè)置，也應(yīng)提交理論和大樣本量試驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)。

在陽(yáng)性判斷值設(shè)定后，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選取一定數(shù)量陰、陽(yáng)性真實(shí)臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，如與該公式不符，則應(yīng)說(shuō)明出現(xiàn)的問(wèn)題及詳細(xì)的數(shù)據(jù)校正方式。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

1.申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

2.適用樣本的穩(wěn)定性研究主要包括對(duì)含有游離DNA的孕婦血漿的保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證以及血漿游離DNA提取后儲(chǔ)存條件的驗(yàn)證。可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行檢測(cè)，從而確認(rèn)樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

應(yīng)注意運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究實(shí)際上均指經(jīng)運(yùn)輸或開瓶后對(duì)產(chǎn)品效期及檢測(cè)性能是否有影響，因此申請(qǐng)人應(yīng)在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中充分考慮上述因素。此外，產(chǎn)品穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、“公告”和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)要求。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

（八）產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)總局第5號(hào)令要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。該產(chǎn)品已有國(guó)家參考品發(fā)布，在注冊(cè)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)使用“高通量測(cè)序用外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）國(guó)家參考品”進(jìn)行。

（九）產(chǎn)品說(shuō)明書

產(chǎn)品說(shuō)明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口產(chǎn)品的中文說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

1.【產(chǎn)品名稱】

建議按照如下方式命名：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（方法學(xué)）或胎兒染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測(cè)試劑盒（方法學(xué)）。

舉例：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（半導(dǎo)體測(cè)序法）、胎兒染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測(cè)試劑盒（可逆末端終止測(cè)序法）。

2.【預(yù)期用途】

2.1第一自然段：預(yù)期用途描述，包括被測(cè)孕婦孕周特征，樣本類型等。

舉例：該產(chǎn)品用于定性檢測(cè)孕周為12+0周及以上的孕婦外周血血漿中胎兒游離脫氧核糖核酸（DNA），通過(guò)分析樣本中的胎兒游離DNA的21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體數(shù)量的差異，對(duì)胎兒染色體非整倍體疾病21-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征進(jìn)行產(chǎn)前篩查。如試劑盒僅是測(cè)序步驟中的建庫(kù)步驟，則預(yù)期用途應(yīng)描述為“構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)”。

2.2第二自然段：按照《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》介紹臨床適應(yīng)癥及背景，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等，應(yīng)介紹產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)。

2.3第三自然段：明確該產(chǎn)品僅作為21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體的產(chǎn)前篩查用途，其結(jié)果要由產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確認(rèn)并遵守相關(guān)法律法規(guī)及行業(yè)規(guī)范。

3.【檢驗(yàn)原理】

詳細(xì)說(shuō)明該產(chǎn)品檢測(cè)母體胎兒游離DNA判斷染色體數(shù)量的檢測(cè)原理及方法學(xué)原理（必要時(shí)可用圖示進(jìn)行）。

4.【主要組成成分】

說(shuō)明試劑盒所包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑盒中不包含但該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說(shuō)明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、生產(chǎn)企業(yè)、貨號(hào)、注冊(cè)證號(hào)/第一類醫(yī)療器械備案憑證編號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息，測(cè)序芯片應(yīng)明確型號(hào)。

5.【儲(chǔ)存條件及有效期】

5.1按照穩(wěn)定性研究資料，說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。

5.2按照《醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（總局令第5號(hào)）增加生產(chǎn)日期，使用期限或者失效日期。

6.【樣本要求】

6.1樣本采集要求。

6.2說(shuō)明對(duì)采血管及抗凝劑的要求。

6.3樣本保存、運(yùn)輸及處理：孕婦外周血樣本的保存條件（溫度、保質(zhì)期限）、運(yùn)輸條件、處理?xiàng)l件（如：多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)必須分離血漿）；已分離的血漿樣本的保存條件（溫度、保質(zhì)期限）、運(yùn)輸條件、處理?xiàng)l件（如：核酸提取前的預(yù)處理）；冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。

上述內(nèi)容均需在穩(wěn)定性研究資料中詳述并用產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估驗(yàn)證。

7.【適用機(jī)型】

適用的測(cè)序儀器具體型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

8.【檢驗(yàn)方法】

無(wú)論是否包含提取試劑或測(cè)序試劑，申請(qǐng)人應(yīng)從頭詳細(xì)描述完成完整檢測(cè)所需的全部步驟以指導(dǎo)用戶正確操作，包括血漿游離DNA的提取、文庫(kù)構(gòu)建、文庫(kù)定量、片段擴(kuò)增及上機(jī)測(cè)序。該類產(chǎn)品操作程序較多，作為產(chǎn)品使用說(shuō)明書該項(xiàng)內(nèi)容應(yīng)當(dāng)盡量詳細(xì)，以能夠指導(dǎo)用戶進(jìn)行操作，其中應(yīng)當(dāng)包括各步驟的注意事項(xiàng)及配合使用物品的技術(shù)參數(shù)、儀器廠家和型號(hào)（如PCR儀，生物分析儀等）和反應(yīng)條件，以半導(dǎo)體測(cè)序?yàn)槔?

8.1 DNA提?。篋NA提取方式、提取試劑盒貨號(hào)及第一類醫(yī)療器械備案憑證編號(hào)；DNA提取液的短期和長(zhǎng)期保存方式、凍融次數(shù)等。

8.2文庫(kù)構(gòu)建：末端修復(fù)、接頭連接、缺口修復(fù)、PCR擴(kuò)增；所構(gòu)建的文庫(kù)短期和長(zhǎng)期保存方式，凍融次數(shù)等。

8.3文庫(kù)定量；描述對(duì)于定量后文庫(kù)濃度和質(zhì)量的要求，以及何種情況進(jìn)行文庫(kù)的重新構(gòu)建。

8.4測(cè)序模板的制備：混合文庫(kù)、PCR、模板富集。

8.5上機(jī)測(cè)序：儀器準(zhǔn)備、設(shè)置及儀器使用相關(guān)參數(shù)。

9.【陽(yáng)性判斷值】

明確設(shè)定陽(yáng)性判斷值所使用的算法及驗(yàn)證參考值所使用的樣本例數(shù)及類型。如使用軟件，則應(yīng)明確軟件名稱、唯一標(biāo)識(shí)號(hào)、生產(chǎn)廠家及醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)；如暫未取得醫(yī)療器械注冊(cè)證書，應(yīng)空出相應(yīng)內(nèi)容，在軟件名稱后注明（醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)：）。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

10.1 本試劑盒作為胎兒染色體非整倍體篩查檢測(cè)，其結(jié)果僅供臨床參考，不能作為診斷的唯一依據(jù)。對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)方法（染色體核型分析）并結(jié)合其癥狀/體征、病史及其他實(shí)驗(yàn)室檢查等情況綜合進(jìn)行。本試劑盒不能對(duì)胎兒染色體結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行檢測(cè)。

10.2 本試劑盒適用于孕婦外周血血漿樣本檢測(cè)，不適用于其它樣本檢測(cè)。

10.3 胎兒游離DNA濃度在孕婦外周血中存在較大個(gè)體差異，變化范圍從2%到30%不等且和孕周密切相關(guān)，因此若因胎兒游離DNA濃度較低造成檢驗(yàn)失敗時(shí)，可待孕周較大時(shí)再次抽血檢測(cè)。

10.4以下幾種情況的孕婦樣品可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，需要結(jié)合其他檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷：

10.4.1孕婦本人為染色體非整倍體疾病患者、其他染色體疾病患者或攜帶者；

10.4.2胎兒染色體異常中的平衡易位、嵌合型三體異常；

10.4.3懷有雙胎或者多胎（三胎及三胎以上）的孕婦；

10.4.4近期接受過(guò)移植手術(shù)、干細(xì)胞治療；近期接受過(guò)免疫治療或輸注過(guò)異體血制品；

10.4.5孕婦本人為腫瘤患者；

10.4.6通過(guò)體外受精—胚胎移植（IVF-ET）方式受孕的孕婦；

10.4.7體重嚴(yán)重超重的孕婦。

10.5樣本采集、運(yùn)輸及處理不當(dāng)、未按說(shuō)明書操作均有可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果；描述在樣本采集，保存、運(yùn)輸中需遵循的原則及注意事項(xiàng)，例如：

10.5.1描述適用的抗凝采血管；

10.5.2顛倒混勻時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，防止溶血；

10.5.3全血離體后須進(jìn)行血漿分離的時(shí)間；

10.5.4血漿分離過(guò)程中注意不要吸到中間層的白細(xì)胞；

10.5.5血漿樣本是否能夠進(jìn)行反復(fù)凍融；

10.5.6禁止將XX抗凝樣本和血漿樣本在室溫狀態(tài)下放置；

10.5.7血漿樣本寄送采用的運(yùn)輸保存方式。

10.6 其他局限性。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

按照分析性能評(píng)估資料內(nèi)容詳述以下性能指標(biāo)：最低檢出限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率、精密度、干擾試驗(yàn)、特異性。各項(xiàng)評(píng)估應(yīng)包括評(píng)估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。應(yīng)將臨床評(píng)價(jià)的試驗(yàn)結(jié)果納入，包括臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量、樣本例數(shù)、試驗(yàn)結(jié)果等內(nèi)容。

（十）臨床評(píng)價(jià)資料

1.研究方法

對(duì)照方法：依據(jù)衛(wèi)生部（現(xiàn)國(guó)家衛(wèi)生與計(jì)劃生育委員會(huì)）發(fā)布的“《WS322.2-2010胎兒染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》第2部分:胎兒常見染色體異常的細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)”，以介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)結(jié)果（包括絨毛取材術(shù)、羊膜腔穿刺術(shù)和經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)）和出生隨訪結(jié)果作為確診胎兒染色體非整倍體T21、T18、T13的對(duì)照金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于出生隨訪，應(yīng)在方案中明確隨訪由新生兒醫(yī)師進(jìn)行，各機(jī)構(gòu)在制定方案中對(duì)醫(yī)師進(jìn)行統(tǒng)一的培訓(xùn)，采用科學(xué)的、統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)項(xiàng)目（應(yīng)當(dāng)提供依據(jù)）對(duì)出生后嬰兒表觀進(jìn)行是否是三體患兒的診斷，也可采用出生后采血進(jìn)行核型分析的方式進(jìn)行診斷。

研究方法為前瞻性研究，是指對(duì)臨床需要正常進(jìn)行產(chǎn)前診斷的孕婦采集樣本與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)進(jìn)行對(duì)比分析。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析一般選用交叉四格表的形式總結(jié)本試劑盒測(cè)序結(jié)果和金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果并進(jìn)行卡方或kappa檢驗(yàn)，與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)進(jìn)行敏感性、特異性分析，計(jì)算陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。對(duì)于以上統(tǒng)計(jì)值，均應(yīng)做統(tǒng)計(jì)假設(shè)，并報(bào)告95%置信區(qū)間。

2.臨床研究機(jī)構(gòu)及人員

臨床研究機(jī)構(gòu)應(yīng)為已取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)。人員應(yīng)為經(jīng)過(guò)專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機(jī)構(gòu)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》。

3.適用人群及樣本量

適用人群為孕周為12+0周及以上的孕婦。不同年齡段孕婦應(yīng)按自然比例分布，35歲及以上孕婦占比應(yīng)控制在10%—15%。樣本量依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)及胎兒染色體三體發(fā)病率計(jì)算，根據(jù)其臨床預(yù)期用于產(chǎn)前篩查的用途，按照發(fā)病率計(jì)算建議總例數(shù)不少于10000例。

試驗(yàn)要求能夠篩選出一定數(shù)量的T21陽(yáng)性、至少1例的T18陽(yáng)性和至少1例的T13陽(yáng)性。如未篩查出符合要求的陽(yáng)性病例數(shù)量，則應(yīng)繼續(xù)增加樣本例數(shù)進(jìn)行篩查，所有樣本均應(yīng)可以溯源。

4.其他要求

4.1對(duì)于臨床試驗(yàn)中可能會(huì)出現(xiàn)用于核型分析的細(xì)胞培養(yǎng)不出導(dǎo)致數(shù)據(jù)缺失的情況：密切關(guān)注該病例并建議孕婦做二次穿刺，最終確定結(jié)果可納入統(tǒng)計(jì)分析；

4.2關(guān)于失訪率的要求：核型分析屬于有創(chuàng)檢測(cè)，如孕婦拒絕二次穿刺將導(dǎo)致數(shù)據(jù)失訪；出生隨訪可能有部分?jǐn)?shù)據(jù)失訪。因此，可接受的失訪率應(yīng)控制在高危孕婦≤2%，低危孕婦≤10%，且失訪數(shù)據(jù)應(yīng)說(shuō)明原因。

4.3臨床試驗(yàn)結(jié)果的客觀內(nèi)容（包括失訪率等）建議在產(chǎn)品說(shuō)明書中明示。

5.臨床試驗(yàn)方案

5.1申請(qǐng)人按照上述1—4要求并結(jié)合體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)相關(guān)法規(guī)制定臨床試驗(yàn)方案。需遵循如下要點(diǎn)：

5.1.1各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。臨床試驗(yàn)方案的修改過(guò)程和版本要記錄在案，且每次改動(dòng)應(yīng)記錄原因。

5.1.2整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

5.2臨床試驗(yàn)方案還應(yīng)詳細(xì)闡述如下內(nèi)容：

5.2.1臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介；對(duì)臨床試驗(yàn)的整體管理情況、質(zhì)量控制、試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行的規(guī)定。

5.2.2臨床背景、病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。其中須注意，病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)嚴(yán)格制定并實(shí)施，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性，對(duì)于編盲的方式應(yīng)有詳細(xì)描述。

5.2.3如采用出生隨訪方式，則應(yīng)對(duì)出生隨訪的依據(jù)、項(xiàng)目及判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行詳細(xì)規(guī)定，包括但不限于如下內(nèi)容：隨訪操作及記錄人員、復(fù)核人員、隨訪方式、隨訪項(xiàng)目、判定依據(jù)、隨訪時(shí)間周期及間隔、隨訪終點(diǎn)等。

5.2.4樣本類型、樣本的收集、處理及保存等。

5.2.5數(shù)據(jù)預(yù)處理、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

6.臨床試驗(yàn)報(bào)告

臨床實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括各機(jī)構(gòu)的臨床試驗(yàn)報(bào)告以及臨床總結(jié)報(bào)告。根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該與方案呼應(yīng)并相一致，對(duì)方案執(zhí)行情況及試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行詳述：

6.1樣本例數(shù)（總結(jié)報(bào)告應(yīng)為各機(jī)構(gòu)的樣本例數(shù)、陽(yáng)性檢出例數(shù)等）、孕婦年齡分布情況、建議以列表方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。

6.3具體試驗(yàn)過(guò)程及試驗(yàn)過(guò)程中需要說(shuō)明的問(wèn)題，研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。

6.4申報(bào)試劑批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息，配合使用的試劑、耗材及儀器的廠商信息、貨號(hào)及產(chǎn)品醫(yī)療器械注冊(cè)證編號(hào)。需要強(qiáng)調(diào)的是：臨床試驗(yàn)研究應(yīng)使用與說(shuō)明書描述一致的配套使用試劑及儀器。

6.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：樣本的納入與排除情況；數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)與否以及最終是否納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理。另外考慮到對(duì)不同年齡段孕婦樣本的陽(yáng)性檢出率可能存在一定差異，故建議對(duì)不同年齡段孕婦樣本分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

6.6討論和結(jié)論：對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

6.7病例報(bào)告表應(yīng)包括如下信息：孕婦代碼、年齡、金標(biāo)準(zhǔn)分析具體結(jié)果、該試劑檢測(cè)結(jié)果。其中金標(biāo)準(zhǔn)分析如為核型分析，應(yīng)明確具體結(jié)果；如為出生隨訪，則應(yīng)明確胎兒出生時(shí)間、隨訪時(shí)間、隨訪方式、隨訪結(jié)果。病例報(bào)告表的全部數(shù)據(jù)應(yīng)可溯源。

7.上市后需完成的工作

上市后需繼續(xù)搜集至少10家臨床機(jī)構(gòu)、總數(shù)不少于10萬(wàn)例臨床使用數(shù)據(jù)作為臨床補(bǔ)充資料在產(chǎn)品下一次延續(xù)注冊(cè)時(shí)提交，并使用該試劑檢測(cè)的全部結(jié)果（包括陰性、陽(yáng)性）與衛(wèi)生主管部門關(guān)于胎兒染色體產(chǎn)前診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)以羊水穿刺核型分析或出生隨訪結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照。對(duì)于出現(xiàn)在灰區(qū)（如適用）的樣本（Z值臨界值區(qū)域）應(yīng)進(jìn)行分析總結(jié)。該項(xiàng)臨床資料應(yīng)當(dāng)由出具數(shù)據(jù)各臨床機(jī)構(gòu)主管部門簽章。此外，注冊(cè)人還應(yīng)總結(jié)上市期間假陽(yáng)性和假陰性的例數(shù)并詳細(xì)分析產(chǎn)生原因。

在延續(xù)注冊(cè)時(shí)，注冊(cè)人應(yīng)依據(jù)上市后的臨床使用數(shù)據(jù)進(jìn)一步修訂說(shuō)明書臨床性能相關(guān)內(nèi)容。

三、名詞解釋

1.高危孕婦

本指導(dǎo)原則中是指建議實(shí)行產(chǎn)前診斷的人群：35歲以上的高齡孕婦；產(chǎn)前篩查出來(lái)的胎兒染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦；曾生育過(guò)染色體病患兒的孕婦；產(chǎn)前B超檢查懷疑胎兒可能有染色體異常的孕婦；夫婦一方為染色體異常攜帶者；醫(yī)師認(rèn)為有必要進(jìn)行產(chǎn)前診斷的其他情形。

2.低危孕婦

本指導(dǎo)原則中是指除去定義為高危孕婦以外的孕婦人群。

四、參考文獻(xiàn)

1．《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部令第33號(hào)），2002年12月13日。

2．《孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)規(guī)范》（國(guó)衛(wèi)辦婦幼發(fā)〔2016〕45號(hào)），2016年11月9日。

3．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS 322.1-2010），胎兒常見染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)第1部分：中孕期母血清學(xué)產(chǎn)前篩查。

4．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS 322.2-2010），胎兒常見染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)第2部分：胎兒染色體異常的細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。

5．Cell-free DNA Screening for Fetal Aneuploidy,ACOG, 2015.

6．Noninvasive prenatal screening for fetal aneuploidy, 2016 update, ACMG, 2016.

7．Position Statement from the Chromosome Abnormality Screening Committee on Behalf of the Board of the international Society for Prenatal Diagnosis, ISPD, 2015.

8．Guidelines for diagnostic next-generation sequencing, guidelines for the evaluation and validation, EuroGentest and the European Society of Human Genetics, 2016.

9．Use of Standards in FDA Regulatory Oversight of Next Generation Sequencing (NGS)-Based In Vitro Diagnostics (IVDs) Used for Diagnosing Germline Diseases, Draft Guidance for Stakeholders and Food and Drug Administration Staff, FDA, 2016.

10．《出生缺陷防治報(bào)告》，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，2012。