附件：流行性感冒病毒核酸檢測試劑注冊審查指導原則（2023年修訂版）（2024年第1號）.doc

流行性感冒病毒核酸檢測試劑注冊審查
指導原則（2023年修訂版）

本指導原則旨在指導注冊申請人對流行性感冒病毒（以下簡稱流感病毒）核酸檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對流感病毒核酸檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是供注冊申請人和技術審評人員使用的指導性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定，隨著法規(guī)和標準的不斷完善以及科學技術的不斷發(fā)展，相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

本指導原則適用于采用逆轉錄實時熒光PCR法，對人口咽拭子、鼻咽拭子、鼻拭子等呼吸道分泌物樣本中的流感病毒核酸進行體外定性檢測的試劑。

對于采用其他方法學或其他樣本類型的流感病毒核酸檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內容不夠全面，申請人可參照本指導原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進行評價，并補充其他的評價資料。

流感病毒屬于正粘病毒科，是單股、負鏈、分節(jié)段的RNA病毒。根據(jù)核蛋白和基質蛋白不同可分為甲、乙、丙、?。ɑ駻、B、C、D）四型。甲型流感病毒根據(jù)病毒表面的血凝素（hemagglutinin，HA）及神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase，NA）的蛋白結構和基因特異性，可分為多種亞型。目前發(fā)現(xiàn)的HA和NA分別有18個（H1-18）和11個（N1-11）亞型。乙型流感病毒分為Victoria系和Yamagata系。目前引起流感季節(jié)性流行的病毒是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亞型及乙型流感病毒中的Victoria和Yamagata系。

流感病毒核酸檢測試劑可用于流感的實驗室診斷，甲型流感病毒各亞型的核酸檢測試劑還可用于區(qū)分季節(jié)性流感病毒和新型甲型流感病毒?！　?/p>

本指導原則適用于流感病毒核酸檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導原則僅針對流感病毒核酸檢測試劑注冊申報資料中的部分內容進行撰寫，其他未盡事宜應當符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》等相關法規(guī)要求。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關法規(guī)的要求，如甲型/乙型流感病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內容。應詳細說明產(chǎn)品所采用的技術原理及檢測流程。提供不同適用機型的檢測通量，即一次檢測最多可檢測的樣本數(shù)。提供核酸提?。ㄊ止ず妥詣犹崛》绞綉謩e明確）和PCR擴增的時間，以及檢測全過程所需的時間。不同檢測流程，分別提供最少和最多檢測樣本量下的檢測時間。與已上市同類產(chǎn)品進行比較，比較內容包括樣本類型，檢測原理，檢測靶基因，組成成分，內標，質控品，判讀規(guī)則，分析性能和臨床性能等。

預期用途中明確產(chǎn)品檢測的靶基因，需選擇保守性和特異性的基因，同時還應考慮基因的擴增效率。檢測靶基因的選擇應提供相關指南或文獻，并分析所檢測基因的靈敏度和特異性是否符合臨床需求。

（三）非臨床資料

1. 產(chǎn)品技術要求及檢驗報告

注冊申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻資料，結合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應當以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑已有國家參考品，技術要求中應體現(xiàn)國家參考品的相關要求，并使用國家參考品對三批產(chǎn)品進行檢驗。

如果有適用的國家標準、行業(yè)標準，產(chǎn)品技術要求的相關要求應不低于相應的要求。

2. 分析性能研究

注冊申請人應采用在符合質量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交在不同機型上進行性能評估的研究資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格間的差異進行分析或驗證。對于適用的不同樣本類型應分別進行分析性能研究。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的流行性感冒病毒陽性樣本，應采用科學合理的方法確定其陰陽性和濃度水平，并提交具體的試驗資料。分析性能評估用樣本一般應為真實樣本或病毒培養(yǎng)物，如涉及稀釋后檢測，應采用與適用樣本類型一致的陰性基質。不可采用質?；蚣俨《具M行分析性能評估。對于各項性能中采用的樣本，在下述各項性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

2.1樣本穩(wěn)定性

考慮到病毒RNA極易被降解的特性，應對樣本穩(wěn)定性進行研究，包括采集后未經(jīng)處理的樣本，加入不同裂解液/消化液的樣本，滅活處理后的樣本，研究內容包括冷藏保存時間，冷凍保存時間，凍融次數(shù)等。

如產(chǎn)品適用拭子、痰液等不同的樣本類型，因其中干擾物質存在較大差異，可能對病毒RNA降解的影響不同，建議對每種樣本類型均進行穩(wěn)定性研究。

如核酸提取液可不立即進行檢測，還需對核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進行研究。

2.2適用的樣本類型

列明產(chǎn)品適用的樣本類型。

2.3準確度

采用申報試劑與臨床診斷或已上市產(chǎn)品，同時檢測臨床樣本，比較檢測結果之間的一致性程度，進行申報試劑的準確度評價。

樣本應選擇符合樣本穩(wěn)定性的預期人群樣本。研究應納入一定數(shù)量的陰性和陽性樣本，并注意包含一定數(shù)量的陽性判斷值附近的樣本和干擾樣本。

2.4企業(yè)參考品驗證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進行檢驗并提供詳細的試驗數(shù)據(jù)。

2.5精密度

應對精密度指標，如標準差或變異系數(shù)等的評價標準做出合理要求。應考慮運行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響精密度的條件，設計合理的精密度試驗方案進行評價。

精密度評價試驗應包含核酸提取步驟。設定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測，具體方案可參考性能評價相關文件進行。

應采用臨床樣本或病毒培養(yǎng)物進行精密度評價，應至少包含3個水平：陰性樣本、檢出限水平樣本、中/強陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設定適當?shù)木芏纫?，例如?/p>

陰性樣本：不含待測物或待測物濃度為零時，陰性符合率應為100%（n≥20）。

檢出限水平樣本：檢出限水平樣本陽性檢出率應≥95%（n≥20）。

中/強陽性樣本：待測物濃度呈中度到強陽性，陽性符合率為100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

2.6檢出限

2.6.1檢出限的確定

將不同來源的至少3份流感病毒樣本分別梯度稀釋于與適用樣本一致的基質中，進行檢出限的確定。每個濃度梯度重復檢測不少于20次，將具有95%陽性檢出率的濃度水平作為檢出限。申請人可采用半數(shù)組織感染量測定法（TCID50）進行濃度確認，以TCID50/mL作為毒株濃度的表示方式；也可采用空斑形成單位（PFU）進行濃度確認，以PFU/mL作為毒株濃度的表示方式。除此之外，申請人還應采用數(shù)字PCR、標準曲線等方法進行毒株核酸濃度的確認，以copies/mL或國際單位作為毒株核酸濃度的表示方式。

在進行檢出限建立時申請人應對申報產(chǎn)品聲稱可檢測流感病毒的類型及其亞型分別進行研究，甲型流感病毒應至少包括H1N1、H3N2亞型，乙型流感病毒應包括Victoria系和Yamagata系。

2.6.2檢出限的驗證

另外選擇具有時間和區(qū)域特征性的至少3個臨床樣本或病毒培養(yǎng)物在檢出限濃度水平進行驗證，應達到95%陽性檢出率。

檢出限驗證的樣本型別應覆蓋甲型流感病毒H1N1、H3N2、H5N1和H7N9亞型，乙型流感Yamagata系和Victoria系以及近3年內我國出現(xiàn)的新的流行亞型，具體可參考中國國家流感中心發(fā)布的流感監(jiān)測報告。

應提供詳細的病毒滴度/濃度的確定方法，同時應詳細描述病毒樣本的確認方法及驗證結果。

2.7包容性

2.7.1采用生物信息學方法對產(chǎn)品檢測的包容性進行研究，研究應覆蓋已公布的申報試劑聲稱檢測范圍內的流感病毒核酸序列。

2.7.2驗證樣本型別應覆蓋甲型流感病毒H1N1、H3N2、H5N1和H7N9亞型，乙型流感病毒Yamagata系和Victoria系以及近3年內出現(xiàn)的新的流行亞型。每種亞型應使用具有時間和區(qū)域特征性的不同來源的多例陽性樣本（臨床樣本或病毒培養(yǎng)物）進行研究，應包括檢出限和重復性的驗證。注意包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復。

申請人應提供用于包容性驗證的病毒株的來源、型別確認、滴度或濃度確定等信息。

2.8分析特異性

2.8.1交叉反應

用于流感病毒核酸檢測試劑交叉反應驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物。

建議在病毒和細菌感染的醫(yī)學相關水平進行交叉反應的驗證。通常，細菌感染的水平為106cfu/mL或更高，病毒為105pfu/mL或更高。

首先，應在流感病毒不同類型和亞型間進行交叉反應驗證；其次，采用其他的病原微生物進行驗證（見表1）。

申請人應提供所有用于交叉反應驗證的病毒和細菌的來源、種屬/型別和濃度確認等試驗資料。有關交叉反應驗證的信息應在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標】項中有所體現(xiàn)。

2.8.2微生物干擾

申請人應充分考慮臨床上容易與流感病毒合并感染的病原體以及流感病毒的不同類型或亞型，在高濃度的情況下對低濃度（例如檢出限濃度）被測類型或亞型流感病毒核酸檢測的影響。

2.8.3競爭性干擾

申請人應充分考慮臨床上常見存在的流感病毒不同類型或亞型混合感染情況，評價高濃度分析物對低濃度分析物檢測的影響。建議申請人結合申報試劑的反應模式，使用一種類型或亞型最低檢測限濃度的流感病毒和另一種類型或亞型高濃度流感病毒評估競爭性干擾，競爭性感染的流感病毒型別組合建議為同一反應體系內常見不同類型或亞型混合感染的流感病毒。競爭性干擾試驗可與最低檢測限、重復性或其他干擾試驗同時進行。

2.8.4干擾物質

應根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的內源/外源物質干擾情況進行驗證。建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行試驗，檢測包含檢出限水平和陰性水平在內的常見亞型流感病毒樣本。對結果進行合理的統(tǒng)計分析，對比添加干擾物質前后的 Ct值差異。檢測的潛在干擾物包括樣本中的原有物質及在樣本采集和處理期間引入的物質。

2.9核酸（RNA）提取/純化性能

在進行核酸檢測之前，建議有核酸（RNA）提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的RNA外，還應有相應的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。對配合使用的所有核酸提取試劑進行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，必要時可考慮與質量較好的核酸提取試劑進行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進行抗干擾、精密度和檢出限的驗證。

2.10反應體系

2.10.1樣本采集和處理

2.10.1.1樣本采集方式的選擇

2.10.1.2采樣拭子及樣本保存液的選擇：對拭子頭和拭子桿的材質要求。明確保存液或裂解液的成分、濃度或備案號以及使用量的要求等。配套的不同保存液或裂解液需驗證檢出限和重復性。

2.10.1.3樣本處理方式的選擇：研究產(chǎn)品適用的滅活方式，包括熱滅活和化學滅活，化學滅活部分應對常見的消毒劑的適用性進行研究。研究樣本前處理方式，包括對不同樣本類型的離心條件的確定研究等。

2.10.2核酸提取和反應體系

研究確定最佳核酸提取和反應體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應各階段溫度、時間、循環(huán)數(shù)等。建議在保證核酸提取質量的情況下盡量擴大總反應體系和加樣量，以提高檢測靈敏度。

提交不同適用機型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。

不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述，并提交驗證資料。

3. 穩(wěn)定性研究

申報試劑的穩(wěn)定性主要包括實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制等，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應包括具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4. 陽性判斷值研究

陽性判斷值一般為申報產(chǎn)品檢測病毒核酸陽性的Ct值。陽性判斷值研究用樣本來源應具有多樣性和代表性，考慮不同年齡、地域、不同時間和感染階段等因素，盡量納入含有干擾物質或其他易引起交叉反應病原體的樣本。建議申請人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式對申報產(chǎn)品進行陽性判斷值研究。如存在判定值灰區(qū)，應提供灰區(qū)的確認資料。如采用其他方法對陽性判斷值進行確認研究，應說明這種方法的合理性。提供內標值的確定方法和研究資料。
如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對各樣本類型進行陽性判斷值的驗證。

提交陽性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來源機構、檢測結果等信息。

5. 其他資料

5.1主要原材料研究資料

該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質控品、參考品等。應提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質量控制標準等相關研究資料、質控品的定值試驗資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應提供其詳細制備過程；如主要原材料源于外購，應提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗資料、生產(chǎn)商提供的質量標準、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質量檢驗資料。生產(chǎn)商應固定，不得隨意更換。

5.1.1引物和探針：應詳述引物和探針的設計原則，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點及兩者的對應情況。建議每種病毒設計兩套或多套引物、探針以供篩選，通過序列比對和功能性試驗等方式，對病毒進行包容性和特異性（如交叉反應）的評價，其中序列比對包括與已公布流感病毒序列的比對，及與易產(chǎn)生交叉反應的其他病原體的序列比對；功能性試驗包括對不同來源、不同滴度/濃度的流感病毒核酸陽性樣本，和不同的近緣病原體的檢測。通過篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質量標準應至少包括序列準確性、純度、濃度及功能性試驗等。

5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP，應提供對其純度、濃度、功能性等詳細驗證資料。

5.1.3酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、逆轉錄酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應分別對酶活性、功能性等進行評價和驗證。

5.1.4質控品

試劑盒一般包含陰性質控品和陽性質控品。陽性質控品應包含試劑盒檢測的靶序列，可采用假病毒等制備。質控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測的全過程，以對整個提取和PCR擴增過程、試劑/設備、交叉污染等環(huán)節(jié)進行合理質量控制。提交試劑盒質控品有關原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗資料，對質控品的檢測結果Ct值范圍做出明確的要求。

5.1.5內標

內標，又稱內對照，可對管內抑制導致的假陰性結果進行質量控制，應與靶核酸一同提取及擴增。申請人需對內標的引物、探針設計和相關反應體系的濃度做精確驗證，既要保證內標熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內標的檢測結果Ct值范圍。建議科學設置內標，對待測樣本的取樣質量、試劑的反應體系進行監(jiān)控。

5.1.6企業(yè)參考品

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復性參考品。應根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際需要設置企業(yè)參考品。

應提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度確認方法或試劑等相關驗證資料。企業(yè)參考品應采用臨床樣本，或使用病毒培養(yǎng)物加入陰性基質。企業(yè)參考品的設置建議如下：

陽性參考品：陽性參考品應設置不同的濃度水平，并應根據(jù)申報產(chǎn)品聲稱可檢測流感病毒的類型及亞型情況分別設置，甲型流感病毒應至少包括H1N1、H3N2亞型；乙型流感病毒應包括Victoria系和Yamagata系。

陰性參考品：主要涉及對交叉反應的驗證情況，納入正常臨床樣本、含除待測類型流感病毒外其他類型流感病毒的樣本及含有冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒等其他病原體的樣本。

檢出限參考品：可采用95%陽性檢出水平或略高于檢出限的水平，如100%陽性檢出水平。應針對申報產(chǎn)品聲稱可檢出的不同類型常見亞型流感病毒分別設置。

重復性參考品：建議包括高、低兩個濃度的樣本，其中一個濃度應為檢出限附近的濃度。應針對申報產(chǎn)品聲稱可檢出的不同類型常見亞型流感病毒分別設置。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結合文字的方式表述。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（四）臨床評價資料

1.臨床試驗機構

申請人應選擇至少3家備案的醫(yī)療器械臨床試驗機構開展臨床試驗。考慮到流感病毒不同病毒株的區(qū)域性特征較強，建議申請人在國內不同區(qū)域選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本具有一定的區(qū)域代表性；臨床試驗機構應具有呼吸道疾患診療、病毒分離培養(yǎng)鑒定方法或分子生物學方法檢測的優(yōu)勢，在整個實驗中，試驗體外診斷試劑（以下稱考核試劑）和對比方法都應處于有效的質量控制下，最大限度保證實驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

2.臨床試驗適用人群和樣本類型

臨床試驗應按照入組標準納入受試者，應選擇具有流感癥狀/體征(如：咳嗽、鼻塞、鼻漏、咽喉疼痛、發(fā)燒、頭疼或肌痛等)、流感相似癥狀或有密切接觸史的人群作為適用人群，應盡量覆蓋各個年齡段人群。對于通用型甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑，臨床試驗人群應至少涵蓋近3年主要流行亞型，可參考中國國家流感中心的流感監(jiān)測報告。

對于甲型流感病毒新亞型試劑，臨床試驗所選擇病例除甲型流感病毒新亞型感染者及密切接觸者外，還應包括其他當年流行的季節(jié)性流感病毒感染患者、非流感病毒感染但具有流感樣癥狀的患者等。其臨床試驗應能夠體現(xiàn)該產(chǎn)品對甲型流感病毒新亞型檢測的特異性。

臨床試驗應對考核試劑聲稱的各種樣本類型分別進行驗證，應采用臨床原始樣本進行臨床試驗，臨床樣本的處理和保存等應分別滿足考核試劑及對比試劑說明書的相關要求。

3.臨床試驗對比方法

3.1 對于已有同類產(chǎn)品上市的試劑，選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用考核試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

3.2 對于無同類產(chǎn)品上市的新亞型試劑，臨床試驗對比方法應以核酸序列測定為主，輔以病毒分離培養(yǎng)鑒定。其中，用于核酸序列測定的引物應不同于考核試劑的引物。

3.3對于無同類產(chǎn)品上市的新樣本類型試劑，在充分考慮樣本類型差異的前提下，臨床試驗對比方法可選擇3.2小節(jié)的對比方法，也可選擇樣本類型等具有可比性的已上市同類產(chǎn)品。

4.臨床試驗最低樣本量

4.1 對于已有同類產(chǎn)品上市的試劑

建議采用單組目標值法進行最低樣本量的估算，通過陽性和陰性符合率分別估算陽性和陰性樣本量，并詳細描述各參數(shù)的確定依據(jù)。陽性和陰性符合率的臨床可接受標準（P0）建議不低于90%。當評價指標P接近100%時，該樣本量估算方法可能不適用，應考慮選擇更加適宜的方法進行樣本量估算和統(tǒng)計學分析，如精確概率法等。

如適用于多種樣本類型，在滿足總陽性和總陰性樣本量分別滿足統(tǒng)計學估算的前提下，每種樣本類型的陽性和陰性樣本例數(shù)，應均不少于70例。

4.2 對于無同類產(chǎn)品上市的新亞型試劑

以核酸序列測定作為對比方法時，可參考4.1小節(jié)樣本量的估算方法。

以病毒分離培養(yǎng)鑒定作為對比方法時，建議采用抽樣調查公式進行最低樣本量的估算，通過臨床靈敏度和特異度分別估算陽性和陰性樣本量，并詳細描述各參數(shù)的確定依據(jù)。臨床靈敏度的預期值建議不低于95%，臨床特異度預期值的設定應有充分依據(jù)。

4.3 對于無同類產(chǎn)品上市的新樣本類型試劑

如選擇3.2小節(jié)所述對比方法，可參考4.2小結樣本量的估算方法。

如選擇樣本類型具有可比性的已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，可參考4.1小節(jié)樣本量的估算。

5.統(tǒng)計學分析

常選擇交叉四格表形式總結兩種方法的結果，評價陽性符合率/陰性符合率、靈敏度/特異度，并計算相應的95%置信區(qū)間。不同樣本類型和不同對比方法均應分別進行統(tǒng)計分析。對各臨床試驗機構的病例數(shù)、年齡分布情況進行分類匯總。

對兩種試劑檢測結果不一致的樣本，應采用臨床參考標準或臨床上普遍認為質量較好的第三種同類試劑進行復核，同時結合患者的臨床病情對差異原因及可能結果進行分析。

6.其他

對于已批準上市的甲型流感病毒核酸（通用型）檢測試劑，如在其注冊證有效期內出現(xiàn)了甲流病毒新亞型的暴發(fā)流行，建議申請人對甲流病毒新亞型進行臨床試驗，分別對來自甲型流感病毒新亞型感染、其他常見的流感病毒亞型（如當年流行的季節(jié)性甲型流感病毒）及非流感病毒感染但具有流感樣癥狀的患者的新鮮樣本進行比對試驗。申請人應針對產(chǎn)品預期用途覆蓋病毒亞型的變化提出變更注冊申請，按照法規(guī)要求提交臨床試驗等資料。

7.境外臨床試驗數(shù)據(jù)的認可

境外臨床試驗數(shù)據(jù)應符合《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術指導原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗數(shù)據(jù)的注冊審查指導原則》的相關要求。應提交完整的臨床試驗方案、報告和倫理審查意見，以及該數(shù)據(jù)適用于中國患者人群的論證資料、境內外臨床試驗質量管理差異的對比資料和臨床試驗質量管理差異對于臨床試驗結果影響的論證資料。

申請人應根據(jù)上述臨床試驗技術審評要求，論證境外臨床試驗數(shù)據(jù)的充分性。

8.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機構的方案設置應一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各研究單位選用的對比試劑應完全一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，考核試劑的樣本類型不應超越對比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了對比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應選擇其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

9.臨床試驗小結和報告

臨床試驗小結和報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

（五）產(chǎn)品說明書和標簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術內容應與注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，應以規(guī)范格式進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。流感病毒核酸檢測試劑說明書編寫應重點關注以下內容。

1.【預期用途】

1.1試劑盒用于定性檢測人口咽拭子、鼻咽拭子、鼻拭子等呼吸道分泌物樣本（根據(jù)具體情況描述）中X型流感病毒RNA（根據(jù)實際情況描述）。

1.2簡單介紹流感病毒的病原學特征、流行病學特征以及臨床表現(xiàn)和現(xiàn)有診斷方法等。

1.3強調本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標準。建議結合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。

2.【檢驗原理】

簡述產(chǎn)品的核酸提取和技術原理，介紹引物及探針設計/對照品（質控品）設置及熒光信號標記等。明確內標基因名稱及其作用。如采用了防污染措施，進行簡要描述。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料，例如核酸提取試劑等的產(chǎn)品名稱，生產(chǎn)廠家，貨號及注冊證號、備案號等信息。

4.【儲存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性等，明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【適用儀器】

注明所有適用儀器的型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。

6.【樣本要求】

描述樣本采集和處理方式，包括采樣步驟，適用的拭子材質，保存液、消化液的使用體積，滅活方式等。描述樣本及核酸提取液的保存穩(wěn)定性。

7.【檢驗方法】

明確核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰、陽性質控品與待測樣本同步進行核酸提取操作。明確各適用機型的反應參數(shù)設置。明確質控品和內標的檢測結果Ct值范圍，作為實驗有效性的標準。

8.【檢驗結果的解釋】

通過擴增曲線和Ct值進行結果陰陽性的判斷，列明結果陰性、陽性、復測、無效等所有情形。

9.【檢驗方法局限性】

9.1本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

9.2有關假陰性結果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、轉運及處理、樣本中病毒滴度過低均有可能導致假陰性結果。

9.2.2流感病毒待測靶序列的變異或其他原因導致的序列改變可能會導致假陰性結果。

9.2.3對于突發(fā)的新型流感病毒，其檢測的最適樣本類型及感染后的最佳采樣時間可能尚未確認，因此，在同一患者分次、多部位采集樣本會降低假陰性結果的可能性。

9.2.4未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子，可能會導致假陰性結果（如有）。

9.3有關假陽性結果的可能性分析

9.3.1如果樣本在運輸、處理過程中發(fā)生交叉污染，則可能導致假陽性結果；

9.3.2 實驗環(huán)境有PCR產(chǎn)物等氣溶膠污染，則可能導致假陽性結果；

9.3.3 實驗過程中使用的耗材、設備等受污染，則可能導致假陽性結果。

9.3.4取標本期間，接種減毒活疫苗的患者可能會導致檢測試劑檢測結果呈陽性

10.【產(chǎn)品性能指標】 詳述以下性能指標：

10.1國家參考品和企業(yè)參考品的符合情況。對于甲型流感通用型核酸檢測試劑，應列出所有驗證過的甲型流感病毒各亞型病毒株的信息。

10.2檢出限：簡要介紹評價方法、所用樣本情況以及評價結果。

10.3對包容性的研究情況進行總結。對于甲型流感通用型核酸檢測試劑，應列出所有驗證過的甲型流感病毒各亞型病毒株的信息。

10.4精密度：對精密度的研究情況進行總結。

10.5分析特異性

10.5.1甲型流感病毒各亞型間的交叉反應驗證：針對甲型流感病毒亞型檢測的試劑盒，則應對較常見的除目的基因外的其他亞型進行交叉反應驗證并對結果進行合理分析；

10.5.2交叉反應：詳述交叉反應驗證的病原體種類，及有/無交叉反應的濃度水平。

10.5.3干擾試驗：說明驗證的干擾物質種類及有/無干擾反應的濃度水平。

10.6臨床試驗：簡要介紹試驗方法、受試者及樣本、試驗結果和結論等。

11.【注意事項】

11.1臨床實驗室應嚴格按照《醫(yī)療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

11.2 試劑保存運輸及使用過程中多種因素可能導致性能變化，如保存運輸不當、樣本采集、樣本處理及檢測過程操作不規(guī)范等，請嚴格按照說明書操作。因拭子等樣本采集過程及病毒感染過程本身的特點，可能存在采集到的樣本量不足等原因帶來的假陰性結果，應結合臨床其他診療信息綜合判斷，必要時復測。

11.3避免實驗室污染的措施

11.4生物安全防護相關內容

三、參考文獻：

[1]國家市場監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法：國家市場監(jiān)督管理總局令第48號[Z].

[2]國家藥品監(jiān)督管理局.關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告：國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號[Z].

[3]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則：國家藥品監(jiān)督管理局2021年第72號[Z].

[4]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心.定性檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導原則：國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心2022年第36號[Z].

[5]國家衛(wèi)生健康委員會、國家中醫(yī)藥管理局.流行性感冒診療方案（2020）

[6]中國疾病預防控制中心.中國流感疫苗預防接種技術指南（2022-2023）