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　　大家好，我是WJ，今天，我想跟大家分享我認(rèn)為細(xì)胞治療腫瘤項目中比較困難的一個點：生物樣本的管理；希望對大家有用~

　　我所做的CAR-T項目生物樣本檢測種類很多，大致按樣本類型歸為骨髓活檢樣本、骨髓樣、血樣、尿樣四類。

　　樣本類型

　　骨髓液-MRD采樣注意：

　　1.骨髓液24小時內(nèi)需寄送至中心實驗室。一般在比快遞預(yù)約時間提前約一個小時準(zhǔn)備開始采集，采集完成后立刻寄送，無需將樣本靜置、超低溫保存等處理。

　　2.安排好各隨訪檢測，PET-CT和骨髓穿刺同一天時，不可以先做PET-CT。其次，做完骨髓穿刺，受試者手術(shù)傷口疼，會影響日?；顒?，如果有需要到門診去做的檢查，可以提前或者延后預(yù)約，時間盡量錯開半日以上。

　　3.各時期檢查隨著隨訪計劃表是有不同安排的，一般MRD 項目要求單管采集4ml骨髓液，但在某些患者身上，骨髓液粘稠，可呈棉絮狀，研究者通過注射器抽吸的方法，無法滿足采集量。CRC應(yīng)該協(xié)助研究者在生物樣本記錄表內(nèi)明確登記采集樣本量，同時溝通項目組以尋求指導(dǎo)。

　　結(jié)果一般3-4個工作日內(nèi)通過中心實驗室網(wǎng)站可查詢。

　　骨髓液-FISH：一般在篩選制備前，會收集FISH的骨髓樣本，作為一項重要的試驗數(shù)據(jù)，一般是和MRD同批次寄送到指定外地中心實驗室。

　　骨髓組織活檢：受試者髂骨穿刺，取出活的組織。按照方案要求進(jìn)行，通常患者做完骨髓穿刺需要避免傷口處的發(fā)炎和感染，不能沾水。有時骨髓活檢是十分頻繁的，當(dāng)研究者認(rèn)為療效評估良好，受試者無異常主訴及癥狀，考慮到局部感染的風(fēng)險，以及手術(shù)帶給受試者的痛苦，會考慮跳過某次隨訪的骨髓活檢。前提是我們協(xié)助和項目組/申辦方溝通明確這樣是否可行，保留溝通郵件，將討論的結(jié)果整理交給研究者做保存記錄。

　　活檢樣本一般送至本地中心實驗室。紙質(zhì)報告在5個工作日左右可去病理科取得。

　　骨髓組織-免疫組化：通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的一種方法，送檢至本中心實驗室，一般只需要前期提供的骨髓樣本即可。

　　免疫組化結(jié)果會在骨髓活檢完成后申請免疫組化的7個工作日之內(nèi)在LIS系統(tǒng)查到或去病理科取得，其報告和骨髓活檢出在一張檢查單上，結(jié)果分為：

　　-（陰性）、個別+（個別陽性）、+（陽性），提示檢測分子是否存在于受試者骨髓組織的細(xì)胞內(nèi)。

　　血樣：在以中心實驗室手冊要求為準(zhǔn)的原則下，我分享一些個人經(jīng)驗

　　全血/血漿：隨訪血樣應(yīng)在同一天同一時段采集完成，采樣管和分裝管主管同時在24小時內(nèi)寄走。

　　血樣-RCL/VCN/NGS：評估CAR-T安全性指標(biāo)。一般要求超低溫（負(fù)60度甚至負(fù)80度）保存，寄送外地中心實驗室。

　　需要注意的是：一定仔細(xì)閱讀隨訪計劃表的備注對于RCL/VCN/NGS的要求，依照方案備注要求，主要隨訪期每次必測RCL與NGS，VCN按照方案備注內(nèi)容無需每次都測。

　　RCL原理：CAR-T的生產(chǎn)中常用慢病毒載體將CAR基因?qū)隩細(xì)胞中。盡管慢病毒載體具有復(fù)制缺陷，但如果在慢病毒生產(chǎn)過程中發(fā)生穿梭質(zhì)粒、包裝質(zhì)粒和T細(xì)胞之間或慢病毒載體與T細(xì)胞的內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄元件之間重組，則可能導(dǎo)致復(fù)制型慢病毒（RCL）的潛在風(fēng)險。

　　外周血CAR-T細(xì)胞數(shù)量：了解CAR-T在體內(nèi)復(fù)制數(shù)量的情況。樣本要求低溫（2-8度）保存。24小時內(nèi)寄送。

　　IL-6(白介素6)：監(jiān)測體內(nèi)炎癥的一項指標(biāo)，代表CarT細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的斗爭強弱，該值升高需警惕CRS反應(yīng)，通常在回輸開始前后測定，發(fā)熱受試者通常伴隨IL-6指標(biāo)升高，IL-6恢復(fù)正常則發(fā)熱停止，強烈的炎癥反應(yīng)可能會造成機體負(fù)擔(dān)過重從而導(dǎo)致受試者出現(xiàn)SAE，這也意味著回輸回輸期間需要密切觀察受試者的情況。樣本要求低溫（2-8度）保存。

　　當(dāng)受試者開始回輸，就一定要備份充足IL-6的試劑盒。結(jié)果需要3日，出具后第一時間發(fā)給研究者。我的項目是受試者渡過回輸期后，主要隨訪期就不會再測IL-6水平。

　　了解“CRS反應(yīng)”，這有一個傳送門：
　　http://app.house086.com/mag/circle/v1/forum/threadWapPage?tid=136969&fid=37

　　免疫球蛋白：carT攻擊惡性克隆性細(xì)胞通常會影響（抑制）自身免疫功能，尤其是骨髓瘤受試者，惡性腫瘤組織學(xué)來源是B細(xì)胞，抑制B細(xì)胞則，受試者正常的免疫球蛋白分泌減少，表現(xiàn)在受試者血液免疫球蛋白水平均在20g/L水平線上下（參考值：20-40），對于發(fā)生低免疫球蛋白血癥的AE，研究者將會考慮使用球蛋白類藥物。（樣本要求2-8度保存）

　　腫瘤指標(biāo)：療效評估的指標(biāo)。對于多發(fā)性骨髓瘤（MM）就是指血M蛋白定性，定量測定。

　　隨訪開始提前確認(rèn)流程，準(zhǔn)備包括（不限于以下物品）：
　　1、生物樣本申請單
　　2、生物樣本運輸單
　　3、生物樣本采集記錄表
　　4、生物樣本試劑盒及分裝管
　　5、冰箱門鑰匙及冰箱鑰匙
　　6、防濕袋及絨布

　　隨訪尿樣：用于療效評估。

　　骨髓瘤受試者采集尿樣比較特殊，需要采集24h尿樣。計量并分裝尿樣，一般取33ml，（3-4管），寄送。

　　寄送的血樣一般采集30ml（7-9管）,骨髓液（1-2管）一般寄送至外地指定實驗室，報告可通過實驗室網(wǎng)站查詢，以明確本次療效評估的結(jié)果和安全性的評估結(jié)果。

　　以上內(nèi)容是CART治療多發(fā)性骨髓瘤項目生物樣本的相關(guān)經(jīng)驗，有錯誤之處歡迎大家指出，且不同的CART項目肯定也有區(qū)別，僅以此文跟大家共同學(xué)習(xí)~