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同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年修訂版）
（2020年第62號(hào)）

同種異體植入性醫(yī)療器械是以同種來(lái)源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品。

我國(guó)目前對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測(cè)血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對(duì)人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測(cè)血液中的病毒核酸。但是，盡管對(duì)供體進(jìn)行了嚴(yán)格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒存在的風(fēng)險(xiǎn)，以及生產(chǎn)過(guò)程中帶入外源病毒的風(fēng)險(xiǎn)。因此，要求同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過(guò)程中采用有效的病毒滅活工藝，并對(duì)病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗(yàn)證。

本指導(dǎo)原則是對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械生產(chǎn)過(guò)程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則是對(duì)注冊(cè)申請(qǐng)人和審評(píng)人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

本指導(dǎo)原則為2011年發(fā)布的《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的修訂版。主要修訂內(nèi)容包括：修改指導(dǎo)原則中部分語(yǔ)言描述，如常用病毒滅活方法、染毒方法、病毒滅活效果判定、其他需考慮的問(wèn)題、病毒滅活工藝的再驗(yàn)證等;完善指示病毒類型選擇及舉例的相關(guān)描述;增加病毒滅活/去除有效性驗(yàn)證的原則。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于需要對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的同種異體植入性醫(yī)療器械。

二、基本要求

（一）常用的病毒滅活方法

同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應(yīng)綜合考慮病毒滅活效果的驗(yàn)證，病毒滅活工藝對(duì)產(chǎn)品性能的影響，病毒滅活工藝本身的公認(rèn)性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟(jì)性。常用的病毒滅活方法舉例如下。

1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）

巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，利用病毒不耐熱的特點(diǎn)，通過(guò)適當(dāng)溫度和保溫時(shí)間處理，滅活病毒。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫(yī)療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運(yùn)用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時(shí)間。

2.γ射線輻照滅活法

γ射線輻照滅活法是主要通過(guò)破壞核酸而滅活病毒，其優(yōu)點(diǎn)包括滅活效率高、穿透力強(qiáng)、劑量易控制、無(wú)有害物質(zhì)殘留、無(wú)明顯溫度升高等。由于病毒在不同介質(zhì)中對(duì)射線的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活時(shí)，應(yīng)去除產(chǎn)品中的宿主組織和細(xì)胞，例如同種異體骨應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。采用該方法時(shí)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量，考慮輻照劑量的分布和滅活時(shí)間。

3.過(guò)氧乙酸-乙醇滅活法

過(guò)氧乙酸-乙醇滅活法可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒、艾滋病病毒、偽狂犬病病毒、牛病毒性腹瀉病毒、豬細(xì)小病毒等多種病毒。其用于同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活的效果已為實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。過(guò)氧乙酸具有極強(qiáng)的病毒滅活能力，乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制產(chǎn)品過(guò)氧乙酸殘留量及乙醇?xì)埩袅?，考慮滅活實(shí)際濃度和滅活時(shí)間。

4.乙醇滅活法

乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對(duì)多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、艾滋病病毒等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時(shí)，應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制乙醇?xì)埩袅?，考慮乙醇濃度和滅活時(shí)間。

（二）病毒滅活工藝的驗(yàn)證

1.指示病毒的選擇

應(yīng)選擇醫(yī)療器械可能污染的病毒，或與該病毒理化性質(zhì)相似的病毒。病毒選擇應(yīng)具有代表性，需考慮病毒顆粒的大小、核酸類型以及有無(wú)包膜等方面，應(yīng)考慮選擇對(duì)物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，至少應(yīng)選擇四類指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無(wú)包膜RNA病毒、無(wú)包膜DNA病毒，可參照下表選擇適宜的指示病毒。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝過(guò)程，考慮HIV對(duì)病毒滅活工藝的滅活抗性，確保相應(yīng)剩余風(fēng)險(xiǎn)可接受。

表1 可經(jīng)同種異體植入性醫(yī)療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及可選用的指示病毒（舉例）

2.染毒方法

由于同種異體植入性醫(yī)療器械多為固體形態(tài)，應(yīng)盡量模擬植入材料的病毒負(fù)載方式，考慮材料的結(jié)構(gòu)、尺寸和致密性，以及病毒在材料中的分布情況，結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)選擇合適的染毒方法，可采用浸泡法染毒（若適用）。病毒滅活零時(shí)的滴度應(yīng)至少≥10⁶TCID₅₀/mL，可根據(jù)產(chǎn)品和病毒的特點(diǎn)，選擇合適的浸泡溫度、時(shí)間及其他條件。

3.方案設(shè)計(jì)

3.1試驗(yàn)分組：應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對(duì)照組，對(duì)照組的設(shè)計(jì)應(yīng)能夠用于判定病毒滅活效果，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議包括細(xì)胞空白對(duì)照組、病毒對(duì)照組、樣品細(xì)胞毒性對(duì)照組（或滴定前進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)）、病毒滅活方法終止對(duì)照組及試驗(yàn)組。其中，病毒對(duì)照組的滴度是計(jì)算滅活量的基礎(chǔ)，應(yīng)證實(shí)其病毒的零時(shí)滴度≥10⁶TCID₅₀/mL。病毒滅活方法終止效果對(duì)照組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應(yīng)與病毒對(duì)照組相當(dāng)或接近，以證實(shí)病毒滅活方法能夠在設(shè)定的時(shí)間終止作用。試驗(yàn)組至少應(yīng)有適宜的時(shí)間點(diǎn)（包括零時(shí)），以闡明病毒滅活的動(dòng)力學(xué)，包括滅活動(dòng)力學(xué)曲線。

3.2觀察指標(biāo)：

3.2.1滅活病毒的滴度，采用細(xì)胞病變或其他適宜的指標(biāo)。

3.2.2病毒滅活速率、滅活曲線。以列表和做圖的形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。

3.3病毒滅活效果的判定

應(yīng)綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評(píng)價(jià)每次驗(yàn)證結(jié)果。

3.3.1所選擇的指示病毒是否適宜，驗(yàn)證的設(shè)計(jì)是否合理。

3.3.2病毒滴度降低量：病毒滅活零時(shí)的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過(guò)與病毒滅活后測(cè)定的殘留病毒量比較，計(jì)算出該方法實(shí)際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如因檢測(cè)方法的靈敏度造成檢測(cè)出的病毒降低量接近但小于4 logs時(shí)，應(yīng)盲傳三代，如無(wú)病毒檢出，亦可認(rèn)為是有效的去除/滅活病毒步驟。病毒去除/滅活有效性驗(yàn)證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，因此需獲得生產(chǎn)全過(guò)程中估計(jì)去除/滅活病毒的總降低量。一般每種指示病毒的總降低量為各步驟降低數(shù)量的總和。但是由于驗(yàn)證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低量≤1 log，則不宜將其計(jì)算在總量中。

3.3.3病毒滅活動(dòng)力學(xué)：病毒滅活通常不是簡(jiǎn)單的一級(jí)反應(yīng)，評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時(shí)也要考慮病毒滅活動(dòng)力學(xué)。需以作圖的形式報(bào)告滅活動(dòng)力學(xué)驗(yàn)證結(jié)果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說(shuō)明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時(shí)才達(dá)到最低檢出限度值，則不能認(rèn)為是一個(gè)有效的病毒滅活方法，或者殘留的指示病毒對(duì)該滅活方法有抵抗力，說(shuō)明該步病毒滅活方法無(wú)效。

4.病毒滅活工藝驗(yàn)證原則

4.1若采用一步病毒滅活工藝，應(yīng)同時(shí)對(duì)有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無(wú)包膜RNA病毒、無(wú)包膜DNA病毒等四類病毒或其指示病毒（參見(jiàn)表1）的滅活效果均達(dá)到4logs以上，可認(rèn)為是有效病毒滅活工藝；若采用多步不同滅活原理的病毒滅活工藝，應(yīng)分別進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證，并保證上述每類病毒滅活工藝至少有一步的滅活效果可達(dá)到4logs以上。

4.2若采用的病毒滅活/去除工藝將導(dǎo)致醫(yī)療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據(jù)產(chǎn)品來(lái)源、采集及過(guò)程控制情況以及對(duì)患者的風(fēng)險(xiǎn)/受益分析來(lái)判斷其可接受性，但其單一去除/滅活病毒步驟的降低量仍需達(dá)到4 logs以上。

5.舉例說(shuō)明病毒滅活效果的判斷

5.1初始病毒負(fù)載量為6 logs，檢測(cè)到剩余病毒量為4logs，則該病毒滅活工藝不是有效工藝，只能說(shuō)明具有一定的病毒滅活作用。

5.2初始病毒負(fù)載量為6 logs，但由于產(chǎn)品本身的細(xì)胞毒作用使得檢測(cè)靈敏度限值為4 logs，僅能證明滅活2 logs的病毒。此種情況需改變?cè)囼?yàn)設(shè)計(jì)重新進(jìn)行驗(yàn)證，或者應(yīng)盲傳三代，如仍無(wú)病毒檢出，可認(rèn)為是有效的病毒滅活方法。

5.3初始病毒負(fù)載量為6 logs，但仍可檢測(cè)到2 logs的剩余病毒，且清除病毒的量可重復(fù)，應(yīng)認(rèn)為是有效的滅活病毒的方法。

5.4初始病毒負(fù)載量為6 logs，之后未檢測(cè)出病毒。但是由于檢測(cè)靈敏度限值為2 logs，僅能認(rèn)為大約滅活了4 logs病毒。事實(shí)上可能等于或大于4 logs，因此應(yīng)判定此方法為有效的滅活病毒的方法。

6.其他需考慮的問(wèn)題

6.1如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)考慮這些處理方法對(duì)病毒檢測(cè)結(jié)果的影響。

6.2模擬的生產(chǎn)工藝參數(shù)應(yīng)盡可能與實(shí)際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間等。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對(duì)病毒滅活效果的影響。

6.3病毒滅活工藝對(duì)某些類型病毒滅活效果的局限性。

（三）病毒滅活工藝的再驗(yàn)證

產(chǎn)品結(jié)構(gòu)組成改變，生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)場(chǎng)地等變更時(shí)，應(yīng)考慮可能對(duì)特定病毒滅活工藝效果的影響，均需評(píng)價(jià)是否需對(duì)病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗(yàn)證。

三、名詞解釋

1.同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來(lái)源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細(xì)胞異體真皮等。

2.植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：

- 全部導(dǎo)入人體；

- 替代上皮表面或眼表面；

通過(guò)外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過(guò)外科侵入方法，部分導(dǎo)入人體保留至少30天的器械，也認(rèn)作是植入性器械。

3.病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行病毒滅活。

四、參考文獻(xiàn)

1.《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（國(guó)藥監(jiān)注〔2002〕160號(hào)）

2.《消毒技術(shù)規(guī)范》衛(wèi)生部2002版

3.YY/T 0340-2002 《外科植入物 基本原則》

五、編寫(xiě)單位

本指導(dǎo)原則由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心編寫(xiě)并負(fù)責(zé)解釋。