附件：人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2021年第24號）.doc

人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑
注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑是指基于抗原抗體反應(yīng)原理，采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法等檢測技術(shù)，對來源于血清或血漿等人體樣本中的B19 IgM/IgG抗體進(jìn)行體外定性檢測的試劑。其臨床預(yù)期用途為：結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實驗室指標(biāo)，可用于急性及慢性人細(xì)小病毒B19感染的輔助診斷及免疫狀態(tài)的評估和急性及慢性感染患者抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。

人細(xì)小病毒B19（parvovirus B19，簡稱B19病毒）屬于細(xì)小病毒科（Parvoviridaefamily），紅病毒屬（Erythrovirusgenus），無包膜，是單鏈線狀DNA病毒。可以被分為1、2、3三種基因型，其中1型和3型又各自分為兩種亞型。B19病毒感染在人群中普遍存在，可通過呼吸道、血液、胎盤等進(jìn)行傳播，并且可在各年齡段中發(fā)生，尤其在孕婦和兒童中多見。易感人群還包括免疫功能缺陷或者不全的患者及貧血患者。兒童感染后最常引發(fā)傳染性紅斑；免疫力正常人群感染后一般為輕型自限性癥狀；孕婦感染可造成胎兒水腫和貧血，嚴(yán)重時導(dǎo)致胎兒死亡；先天免疫缺陷患者、獲得性免疫缺陷患者、腫瘤或器官移植手術(shù)后進(jìn)行化療的患者感染會導(dǎo)致慢性貧血癥；鐮狀細(xì)胞貧血癥等血液系統(tǒng)疾病患者感染會發(fā)生一過性再生障礙性危象而導(dǎo)致急性貧血；部分感染患者會出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，隨后演變?yōu)槎喟l(fā)性關(guān)節(jié)炎。

病毒血癥的后期階段，特異性IgM抗體開始出現(xiàn)。IgM抗體出現(xiàn)后可持續(xù)約5個月或者更久，對B19病毒特異IgM進(jìn)行檢測可用于近期感染和疾病的早期診斷。B19病毒感染后約第15天，開始出現(xiàn)特異性IgG抗體，持續(xù)數(shù)月甚至終生。B19病毒有兩種衣殼蛋白VP1和VP2，一個非結(jié)構(gòu)蛋白NS1。其中VP1和VP2組成衣殼包裹在B19病毒DNA表面，構(gòu)成B19病毒的抗原性。針對結(jié)構(gòu)蛋白VP1和VP2構(gòu)象性表位的IgG抗體可維持高滴度數(shù)月，并長期存在體內(nèi)，對該類IgG抗體進(jìn)行檢測可用于既往感染的診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究。

不同人群感染B19病毒后產(chǎn)生不同強(qiáng)度的免疫應(yīng)答反應(yīng)。健康成年人感染B19病毒后抗體反應(yīng)非常強(qiáng)，能檢測到高滴度的特異性IgM抗體。B19病毒感染后在免疫功能正常兒童可產(chǎn)生特異性抗體，發(fā)病后數(shù)日可檢出IgM，持續(xù)數(shù)月。當(dāng)患有溶血性貧血兒童感染B19病毒并發(fā)生再障危象時，IgM抗體反應(yīng)特別強(qiáng)。此外，慢性血液病患者、免疫缺陷或抑制患者，有時缺乏可檢測到的抗體反應(yīng)。

B19病毒感染檢測的常用方法有血清學(xué)抗體檢測、核酸檢測以及抗原檢測，其中B19病毒血清學(xué)抗體檢測是目前B19病毒感染臨床輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究的主要方法，用于對傳染性紅斑患者、或有B19病毒感染者接觸史、不明原因發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛癥狀的高危對象進(jìn)行檢測。血清學(xué)抗體檢測常應(yīng)用于母體出現(xiàn)B19病毒感染臨床癥狀、有可疑或確診的B19病毒感染暴露史以及發(fā)現(xiàn)胎兒貧血后的情況。如懷疑孕婦有B19病毒接觸史以及發(fā)現(xiàn)胎兒存在貧血的癥狀，建議盡早對母體血液中B19病毒的IgM和IgG抗體進(jìn)行檢測，聯(lián)合使用B19病毒DNA檢測、超聲檢查以及持續(xù)觀察有無胎兒水腫或貧血等手段，用于妊娠期B19病毒感染的輔助診斷以及免疫狀態(tài)的評價。

鑒于母體感染細(xì)小病毒B19不能作為胎兒感染的證據(jù)，并且大多數(shù)妊娠期急性細(xì)小病毒B19感染無不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，本類試劑不用于孕期B19病毒感染的產(chǎn)前篩查。即該類產(chǎn)品不用于對母體以及胎兒無細(xì)小病毒B19相關(guān)癥狀的人群進(jìn)行檢測。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。建議申請人對以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：

1.臨床適應(yīng)癥背景情況

描述B19病毒的生物學(xué)特征、流行病學(xué)特征、抗體的分布情況（濃度水平、產(chǎn)生和消失的時間等）、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)和相關(guān)疾病、現(xiàn)有的臨床診斷方法或其他實驗室檢查方法等。

2.同類產(chǎn)品上市情況

從技術(shù)方法及預(yù)期用途等方面寫明申報產(chǎn)品與現(xiàn)行臨床診斷方法以及目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要異同點(diǎn)。

（二）主要原材料研究資料

由于B19病毒不同的抗原（VP1或VP2）以及表位（線性或構(gòu)象）類型對于IgM/IgG抗體的檢出能力不同；因此在選擇產(chǎn)品原料時，應(yīng)注重上述抗原以及表位的選擇，避免抗原或者表位的差異造成的假陰性。原材料研究資料中應(yīng)詳述此方面的考慮。另外，建議加入產(chǎn)品校準(zhǔn)品。

1.試劑盒所用病原體抗原

首先應(yīng)詳述確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)，此外應(yīng)提交抗原來源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白純度、濃度、功能性試驗等）等詳細(xì)試驗資料。

主要包括以下兩種情況：

1.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應(yīng)對B19病毒毒株選擇、培養(yǎng)、抗原提取、純化、鑒定等實驗過程予以詳述。如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，抗原表達(dá)及純化、鑒定等詳細(xì)資料。

1.2企業(yè)外購抗原

應(yīng)詳述抗原的名稱，抗原生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商選擇的研究資料及供應(yīng)商出具的抗原性能檢驗報告。

2.其他主要原輔料

應(yīng)提交各種原輔料的選擇及驗證資料，如固相載體、硝酸纖維素膜、化學(xué)發(fā)光劑、反應(yīng)緩沖液等，應(yīng)詳述確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)，說明每一原輔料的供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗報告，詳述申請人對每一原輔料技術(shù)指標(biāo)要求并提交檢驗數(shù)據(jù)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗證去除效果。

3.試劑盒質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原料來源、質(zhì)控品制備、陰陽性確認(rèn)等研究資料。質(zhì)控品至少包含陰性和弱陽性兩個水平，陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或樣本稀釋液。免疫層析方法學(xué)應(yīng)詳述質(zhì)控線相關(guān)原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗體）的選擇依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.企業(yè)參考品

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)驗證資料，說明參考品陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）。B19病毒 IgG 抗體的量值單位可以IU/ml表示。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同。對于同時檢測IgM和IgG抗體的試劑，應(yīng)對IgM和IgG抗體分別設(shè)置企業(yè)參考品。建議如下：

4.1陽性參考品和陰性參考品

陽性參考品應(yīng)考慮B19病毒 IgM/IgG 抗體檢出能力的驗證，可選擇多份確認(rèn)為陽性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價，納入類風(fēng)濕因子、ToRCH病原體（弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒及單純皰疹病毒）以及人類免疫缺陷病毒特異性抗體陽性樣本。

4.2檢測限參考品

可為參考物質(zhì)或臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含檢測限水平。

4.3精密度參考品

至少包括弱陽性水平參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.包被工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時間等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。

5.實驗體系反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

6.酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

7.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

8.對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計中采用的避免IgG對IgM檢測結(jié)果造成影響的合理措施。

（四）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、驗收標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析方法等詳細(xì)資料。對于本類產(chǎn)品建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。IgM抗體、IgG抗體應(yīng)分別研究。

1.適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法評價每個樣本類型的適用性。對于可比樣本（如血清、血漿），可采用同源比對的方法進(jìn)行驗證；對于不可比樣本，應(yīng)對每個樣本類型分別進(jìn)行性能評估。

2.最低檢測限

確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽性樣本梯度稀釋進(jìn)行最低檢測限確定。建議設(shè)置多個濃度梯度，每個濃度重復(fù)檢測不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個濃度至少重復(fù)檢測20次，將具有95%陽性檢出率的最低濃度作為最低檢測限。

驗證：選擇具有時間和區(qū)域特征性的至少3個臨床樣本（與最低檢測限確定不同樣本）在最低檢測限濃度水平進(jìn)行驗證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。

采用的稀釋液應(yīng)與適用樣本類型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進(jìn)行稀釋。同時應(yīng)提供詳細(xì)的抗體類型和滴度的確認(rèn)方法及驗證結(jié)果。

3.包容性驗證

選擇中國境內(nèi)來源于不同地域、不同人群的不少于30份B19病毒抗體弱陽性的患者樣本進(jìn)行研究。制備方式可為臨床陰性樣本作為基質(zhì)稀釋陽性樣本，樣本性質(zhì)的確認(rèn)方法可為臨床診斷結(jié)果或已上市同類產(chǎn)品檢測結(jié)果。如有條件，盡量納入不同B19病毒基因型的患者樣本進(jìn)行驗證。

4.分析特異性

4.1交叉反應(yīng)

4.1.1用于B19病毒交叉反應(yīng)驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結(jié)構(gòu)具有同源性（如在分類學(xué)上的近緣病毒）、易引起相同或相似的臨床癥狀、易并發(fā)感染的其他微生物（見表1），以及高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)驗證。

4.1.2如果檢測試劑采用基因重組抗原，應(yīng)增加對重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評價。例如，如果采用大腸桿菌作為宿主菌，建議考慮大腸桿菌自身蛋白或載體骨架編碼的蛋白產(chǎn)生的抗體與被測物之間可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

其中用于交叉反應(yīng)研究用的抗體類型應(yīng)與待測目的抗體類型相同，如申報兩種抗體類型，用于交叉反應(yīng)研究的病原體的IgM抗體、IgG抗體應(yīng)分別進(jìn)行驗證。應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗證的病原體抗體樣本來源、陰陽性、種屬確認(rèn)等相關(guān)信息。

4.2干擾實驗

4.2.1內(nèi)源性及外源性干擾

應(yīng)對樣本中可能存在的內(nèi)源性及外源性干擾物質(zhì)（見表2）進(jìn)行研究。建議對B19病毒抗體弱陽性、陽性的臨床樣本，使用潛在最大濃度的干擾物質(zhì)分別進(jìn)行添加，確定是否產(chǎn)生干擾。如有干擾，梯度稀釋干擾物并進(jìn)一步確定可接受的干擾物質(zhì)的最高濃度水平，或產(chǎn)生干擾的濃度水平。應(yīng)使用多份臨床樣本，每個樣本重復(fù)檢測不少于3次。申請人應(yīng)描述干擾物質(zhì)的種類，說明樣本的制備方法及待測物的水平，以及不產(chǎn)生干擾的驗收標(biāo)準(zhǔn)。

4.2.2抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿和/或全血樣本，可采用一定數(shù)量血清、血漿、全血同源樣本進(jìn)行對比實驗研究，以驗證不同抗凝劑的適用性。

4.2.3 B19病毒IgM抗體檢測特異性驗證

對于IgM抗體檢測試劑，可采用對至少10份含有B19病毒特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實驗研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測，IgM檢測結(jié)果應(yīng)為陰性；或者選用其他合理的方法進(jìn)行驗證。

5.精密度

具體試驗方法可以參考相關(guān)的美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件。企業(yè)應(yīng)對每項精密度指標(biāo)的驗收標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。

5.1影響精密度的條件包括：操作者、測量儀器、測量程序、試劑批次、校準(zhǔn)（校準(zhǔn)品批次，校準(zhǔn)周期）、運(yùn)行、時間、地點(diǎn)、環(huán)境條件等。除申報試劑本身外，還應(yīng)對以上可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗證。

5.2設(shè)定合理的精密度評價周期。

5.3用于精密度評價的樣本應(yīng)使用臨床樣本。至少包括三個水平：陰性、弱陽性以及中等陽性的樣本。

6.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

建議采用高滴度的B19病毒抗體陽性臨床樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測，每個梯度重復(fù)3至5次，將顯色深度或檢測值隨滴度升高反而變淺或降低時的滴度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時B19病毒抗體的最低滴度。

7.企業(yè)參考品的驗證（如適用）：

根據(jù)主要原材料研究資料中企業(yè)參考品的設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗并提供詳細(xì)的實驗數(shù)據(jù)。

（五）陽性判斷值確定資料

陽性判斷值反映區(qū)分受試者目標(biāo)狀態(tài)的特征。申請人應(yīng)考慮不同地理區(qū)域流行病學(xué)背景以及產(chǎn)生不同強(qiáng)度免疫應(yīng)答反應(yīng)的人群（如免疫缺陷/抑制人群）與正常人群之間的差異，選擇具有代表性的樣本建立陽性判斷值，注意應(yīng)納入一定數(shù)量的弱陽性樣本。

建議采用受試者工作特征曲線（ROC）的方法確定陽性判斷值。如采用其他研究方法，應(yīng)說明其合理性。若試驗結(jié)果存在灰區(qū)，建議申請人從臨床意義的角度出發(fā)，合理設(shè)定灰區(qū)范圍并提供灰區(qū)的確定資料。

試驗所用樣本來源應(yīng)考慮到年齡（成人或兒童）、不同的感染階段（早期和晚期）和生理狀態(tài)（是否妊娠）等因素的影響。另外，建議申請人考慮建立陽性判斷值時使用的受試者樣本對于目標(biāo)人群的代表性，通過臨床試驗進(jìn)一步確認(rèn)陽性判斷值的準(zhǔn)確性。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性（如涉及）及凍融穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實際運(yùn)輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗證，以確認(rèn)樣本的保存條件及效期（短期、長期）。需要冷凍保存的樣本同時應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗證。某些用于防腐、冷凍用途或起穩(wěn)定保護(hù)作用的添加劑可能會對檢測造成影響，如涉及，請對該添加劑的影響進(jìn)行合理驗證。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗資料

臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。

1.試驗方法

臨床試驗可采用試驗用體外診斷試劑與臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗，證明兩者等效，從而間接證明試驗用體外診斷試劑臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測性能等方面應(yīng)與試驗用體外診斷試劑具有較好的可比性。臨床試驗方案中應(yīng)針對對比試劑的選擇及依據(jù)進(jìn)行詳細(xì)描述。

對于B19病毒IgM檢測試劑，申請人還應(yīng)選擇感染急性期患者采集的樣本進(jìn)行申報試劑與感染急性期判斷的方法的一致性研究，以評價申報試劑的檢測性能。用于評價的樣本可選擇處于感染急性期患者的采集樣本（不少于30例）；或者選擇商業(yè)血清轉(zhuǎn)化盤（不少于5套）?？刹捎玫挠糜诟腥炯毙云谂袛嗟姆椒ǎ纾築19病毒特異性IgG抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換（動態(tài)監(jiān)測2份或以上的血清IgG，恢復(fù)期與急性期比較IgG呈4倍以上升高）、核酸檢測等方法，對于B19病毒感染急性期的判斷應(yīng)密切結(jié)合患者的臨床診斷綜合進(jìn)行。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗方案中應(yīng)根據(jù)試驗用體外診斷試劑的預(yù)期用途、適用人群和檢測要求等合理確定臨床試驗受試者選擇要求，包括：受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本收集的前瞻性和回顧性設(shè)計等，并在臨床試驗過程中嚴(yán)格遵循。

臨床試驗的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，包括各種可能接受B19病毒感染檢查的人群，例如具有疑似B19病毒感染癥狀的人群。

入組人群應(yīng)包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦、免疫功能受損、接受免疫抑制治療的人群，應(yīng)盡量覆蓋各類適用人群。

建議臨床試驗采用前瞻性收集的樣本進(jìn)行研究，同時，在嚴(yán)格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的回顧性樣本。

另外，建議根據(jù)流行病學(xué)證據(jù)納入不同地區(qū)的患者/人群，以研究本產(chǎn)品的臨床檢出能力。

3.臨床試驗機(jī)構(gòu)數(shù)量及要求

該類產(chǎn)品臨床試驗應(yīng)在三家及以上符合要求的臨床試驗機(jī)構(gòu)開展。申辦者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及其預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，選擇具有一定地域代表性的機(jī)構(gòu)開展臨床試驗。原則上應(yīng)具有相關(guān)學(xué)科的優(yōu)勢，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評價方案。

4.樣本類型

B19病毒抗體檢測試劑的樣本類型通常涉及血清、血漿等。如血清與血漿樣本之間經(jīng)研究不存在性能差異，可以在各具有一定數(shù)量陰/陽性樣本的前提下，通過合并統(tǒng)計的方式證明兩種樣本類型的適用性。

臨床樣本的采集、處理、保存等應(yīng)分別滿足臨床試驗中所涉及各產(chǎn)品說明書相關(guān)要求。

5.臨床試驗樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評價的必要條件。臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算。

當(dāng)采用申報產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對比試驗時，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗用體外診斷試劑評價指標(biāo)預(yù)期值。

對于B19病毒抗體檢測試劑的臨床陰/陽性符合率，基于目前的科學(xué)認(rèn)識，建議P0不低于90%。當(dāng)選定的產(chǎn)品的符合率預(yù)期值（PT）遠(yuǎn)高于預(yù)期目標(biāo)值時，應(yīng)采用其他的方法進(jìn)行樣本類的估算。當(dāng)評價指標(biāo)P接近100%時，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。

臨床試驗樣本量除需滿足上述統(tǒng)計學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；臨床試驗樣本應(yīng)包含一定數(shù)量的醫(yī)學(xué)決定水平附近樣本或灰區(qū)樣本。

6.臨床評價指標(biāo)的選擇與統(tǒng)計學(xué)分析

臨床評價指標(biāo)應(yīng)在臨床試驗的設(shè)計階段確定，并在臨床試驗方案中予以明確。

對于此類檢測試劑的比較研究試驗，臨床評價指標(biāo)主要包括試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。統(tǒng)計分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率等指標(biāo)及其95%可信區(qū)間。除此之外，還應(yīng)同時進(jìn)行假設(shè)檢驗評價兩種分析方法的一致性。結(jié)果不符樣本的復(fù)核結(jié)果不應(yīng)納入上述統(tǒng)計。

7.結(jié)果不符的樣本

對于比較研究試驗中申報產(chǎn)品與對比產(chǎn)品檢測不一致的結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行合理的分析。如采用實驗室參考方法或第三方檢測試劑進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)果不應(yīng)用于修訂原有統(tǒng)計結(jié)果。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制以及前期性能評價的結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

B19病毒IgM/IgG抗體檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：陰/陽性參考品符合率、最低檢測限、精密度等。

如果申報試劑已有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出符合性的要求。

按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》的要求，申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的產(chǎn)品檢驗。

對于已經(jīng)有國家參考品的項目，應(yīng)提供產(chǎn)品能夠符合國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品要求的產(chǎn)品檢驗報告。對于目前尚無國家參考品的項目，提供產(chǎn)品能夠符合企業(yè)參考品要求的產(chǎn)品檢驗報告。

（十）產(chǎn)品說明書

1.【預(yù)期用途】

產(chǎn)品預(yù)期用途的描述應(yīng)符合現(xiàn)行的疾病診療指南、專家共識。應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人體血清或血漿等樣本中的人細(xì)小病毒B19lgM/lgG抗體。

適用樣本類型應(yīng)結(jié)合申報產(chǎn)品臨床性能的確認(rèn)情況進(jìn)行描述。

1.2病毒特征以及臨床適應(yīng)癥背景：簡要描述B19病毒生物學(xué)特征及致病性，感染后臨床表現(xiàn)，相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。人群中B19病毒特異性抗體的陽性率，不同類型B19病毒抗體的產(chǎn)生、持續(xù)時間、臨床提示作用及與B19病毒感染診斷的其他方法的關(guān)聯(lián)等。

1.3目標(biāo)人群：依據(jù)臨床試驗的入組人群進(jìn)行編寫。

1.4產(chǎn)品功能：結(jié)合目標(biāo)人群的臨床表現(xiàn)和其他診斷指標(biāo)，用于B19病毒感染的輔助診斷。

1.5明確B19病毒抗體檢測不得用于無癥狀人群的產(chǎn)前篩查；不得將本試劑的檢測結(jié)果單獨(dú)作為終止妊娠的依據(jù)。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，質(zhì)控品應(yīng)明確具體基質(zhì)成分。對于膠體金試劑應(yīng)描述試劑條/卡結(jié)構(gòu)組成。校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)提交靶值單。明確不同批次組分能否混用。

2.2介紹檢測中使用的抗原/抗體信息及標(biāo)記物信息，包括抗原的性質(zhì)（如純化的天然抗原、重組抗原等）、抗體的動物源性、抗體的性質(zhì)（單克隆或多克?。?、標(biāo)記物種類等。

2.3試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、注冊證號/備案號（如有）、貨號等其他相關(guān)信息。

3.【儲存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息。

4.【適用機(jī)型】

對于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測試劑應(yīng)明確適用酶標(biāo)儀的波長要求，其他方法學(xué)的檢測試劑應(yīng)明確具體的適用機(jī)型型號。

5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容

5.1樣本采集前的要求：如采集時間、采集量，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

5.2樣本采集：說明采集方法及樣本類型，對于血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

5.3干擾物的影響：明確常見干擾物對實驗結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

5.4樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

6.【檢驗方法】

詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟：

6.1實驗環(huán)境：檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

6.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

6.3高濃度樣本稀釋的方法。

6.4試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等。

6.5定標(biāo)（如適用）：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定，對需要進(jìn)行重新定標(biāo)情況的說明及對定標(biāo)周期的建議。

6.6質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

6.7對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序及注意事項等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時間。

6.8特別說明檢驗操作過程中的注意事項。

7.【檢驗結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)。

建議參考相關(guān)臨床診療指南進(jìn)行描述，包括所有可能出現(xiàn)的B19IgM/IgG結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋，后續(xù)的處理措施等。如有灰區(qū)判定，應(yīng)詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方式。

8.【檢驗方法局限性】

結(jié)合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床適應(yīng)癥背景、檢測方法及適用人群等，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

9.1對相應(yīng)國家參考品（如有）檢測的符合情況。

9.2企業(yè)內(nèi)部陽性和陰性參考品符合率。

9.3最低檢測限：簡要介紹評價方法、所用樣本以及評價結(jié)果。

9.4分析特異性

9.4.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

9.4.2干擾物質(zhì)：說明驗證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

9.5精密度：簡要介紹評價方法、所用樣本以及評價結(jié)果。

9.6鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對鉤狀效應(yīng)的驗證情況進(jìn)行總結(jié)。

9.7包容性驗證：簡要介紹樣本來源和結(jié)論。

10.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

10.2有關(guān)實驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

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四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。